Eighty-five different cultivars of Brassica rapa, B. juncea, B. nap us, B. carinata, B. oleracea and hexaploid Brassica collected from Bangladesh, Japan, China and Denmark were analyzed by SDS-PAGE for seed and leaf protein variations, using esterase, acid phosphatase and peroxidase isozyme analysis. Ten polymorphic bands were identified from seed protein however no identifiable polymorphic band was found in the leaf protein. Polymorphic markers clearly distinguished the different Brassica species as well as yellow sarson (YS) and brown seeded (BS) cultivars of B. rapa. The $F_1$ cross between YS and brown seeded cultivars showed the existance of all poly-morphic bands of the respective parents. The Bangla-deshi and Japanese cultivars of B. rapa differed in the amount of seed protein. In the case of isozyme analysis, esterase showed the highest number of polymorphic bands (13) followed by acid phosphatase (9) and peroxidase (5). These polymorphic markers were very effec-tive for classification of all the species studied in this experiment. In parentage tests using isozymes, the hybridity of intra-and-interspecific crosses of almost all the seedlings could be identified from their respective cross combinations. Esterase polymorphism showed a clear differentiation between YS and BS types of B. rapa. In addition, two esterase polymorphic markers were iden ified to differentiate some cultivars of B. juncea. Segregation patterns in these two esterase bands showed a simple Mendelian monohybrid ratio of 3:1 in $F_2$, 1:1 in test cross and 1:0 in back cross progenies. No polymorphic band was identified to distinguish different cultivars of the same species by acid phosphatase or peroxidase. Polymerase Chain Reaction (PCR) was carried out with seed coat color specific marker of B. juncea. The yellow seeded cultivars produced a strong band at 0.5 kb and weak band 1.2 kb. In the addition of these two specific bands, Japanese yellow-seeded cultivars expressed two more weak bands at 1.0 kb and 1.1 kb. Where the brown seeded cultivars generated a single strong band at 1.1 kb. In segregating population, the yellow seed coat color marker segregated at a ratio 15 (brown) : 1 (yellow), indicating the digenic inheritance pattern of the trait.
Genomic DNA from the muscle of marsh clam (Corbicula leana) from Gochang was extracted in order to identify genetic differences and similarity by randomly amplified polymorphic DNAs-polymerase chain reaction. 3.28 of the 23.0 polymorphic bands per lane were found to be polymorphic in marsh clam. Also, about 4.34% of total polymorphic bands were either specific to marsh clam. The major common bands of 0.28 kb generated by primer OPB-15 (GGAGGGTGTT) were present in every individuals, respectively, which were polymorphic. This common bands which present in every individuals should be diagnostic of specific strains, species and/or their relatedness. Primer OPB-19 (ACCCCCGAAG) produced the highest number of specific bands, which was 12. The specific minor band of 0.07 kb was present in lane 22, which were polymorphic. Especially, only a specific band (1.35 kb) identifying individuals was observed in lane 22.
Genomic DNA from the muscle of marsh clam (Corbicula leana)from Gochang was extrected in order to identify genetic differences and similarity by randomly amplified polymorphic DNAs-polymerase chain reaction. 3.28 of the 23.0 polymorphic bands per lane were found to be polymorphic in marsh clam. Also, about 4.34% of total polymorphic bands were either specific to marsh clam. The major common bands of 0.28 kb generated by primer OPB-15 (GGAGGGTGTT) were present in every individuals, respectively, which were polymorphic. This common bands which present in every individuals should be diagnostic of specific strains, species and-or their relatedness. Primer OPB-19 (ACCCCCGAAG) produced the highest number of specific bands, which was 12. The specific minor band of 0.07 kb was present in lane 22, which were polymorphic. Especially, only a specific band (1.35kg) identifying individuals was observed in lane 22.
RAPD 분석은 한 개의 primer를 이용하여 임의의 DNA 조각을 증폭하는 것이다. 이때 만들어지는 여러 형태의 DNA pattern을 이용하여 리스테리아 모노사이토제네스를 분류할 수 있다. 리스테리아균들을 효과적으로 RAPD typing 할 수 있는 primer들을 엄선하기 위하여 리스테리아 표준균주 13종을 대상으로 총 31가지 primer들의 RAPD 분리력을 비교하여 보았다. 결과는 재현성이 높았으며 이중 6가지 primer(primer 6, HLWL74, UBC155, UBC127, Lis5, Lis11)가 discrimination index, band의 숫자, band scoring의 난이도 등을 고려해 볼 때 나머지 primer 들에 비해 우수한 분리력을 보였다. 이들 primer들은 장차 리스테리아의 RAPD typing에 이용될 수 있을 것으로 보이며, 현재는 이들을 이용하여 돈육공장의 오염원 규명을 위한 연구를 수행 중이다.
RAPD 분석은 한 개의 primer를 이용하여 임의의 DNA조각을 증폭하는 것이다. 이때 만들어지는 여러 형태의 DNA band유형을 이용하여 살모넬라를 분류할 수 있다. 살모넬라를 효과적으로 RAPD typing할 수 있는 primer들을 엄선하기 위하여 살모넬라 표준군주 16종을 대상으로 총 20가지 primer들의 RAPD 분리력을 비교하여 보았다. 결과는 재현성이 높았으며 이중 primer A, OPG04, OPG10, OPL-03을 16가지 균 모두를 다른 유형으로 분리하였고 primer OPB-17, OPB-6, OPG08, OPL-02는 15가지 유형으로 분리하였다. 이들은 discrimination index, band의 숫자, band scoring의 난이도 등을 고려해 볼 때 나머지 primer 들에 비해 우수한 분리력을 보였다. 이들 primer들은 장창 살모넬라의 RAPD typing에 이용될 수 있을 것으로 보이며, 현재는 이들을 이용하여 돈육 공장의 오염원 구명을 위한 연구를 수행 중이다.
Five broiler chicken lines, namely HC, BPB2, CPB2, PB2 and UM1, involving in a selection program and differing in selection intensity and genetic background, were screened for randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) polymorphism using 10 selected decamer primers. Nine primers amplified the genomic DNA, generating 200 to 2,500 bp and all detected polymorphism between lines. Out of 74 bands scored using these primers, 34 (50.0%) were found to be polymorphic. The number of polymorphic loci ranged from 3 to 6 with an average of 4.33. Lines differed considerably for within-population genetic similarity estimated by band frequency (WS = 93.55 to 99.25). Between-line genetic similarity estimates based on band sharing as well as on band frequency ranged from 71.35 to 86.45 and from 73.38 to 87.68, respectively. Lines HC and PB2 were the most closely related to the other, while BPB2 and CPB2 appeared to be more distant from each other. The between-line genetic distance based on both band sharing and band frequency revealed the similar trends as for Between-line genetic similarity. Based on BS and BF criteria, BPB2 and CPB2 as well as PB2 and UM1 lines can be merged to launch a new genetic group for further progress in biometrical objectives. A phylogenetic tree, derived using Nei's coefficient of similarity revealed the different pattern of genetic distance between lines.
This study was carried out to develop specific primers for PCR detection of Phellinus linteus. Diverse genomes of 15 Phellinus spp. including five Phellinus linteus isolates were fingerprinted by Primer Universal rice primer(URP)1F. The URP-PCR pattern differentiated P. linteus isolates from other phellinus spp. A polymorphic band(2.8 kb), which is unique for P. linteus isolates, was isolated and sequenced. Twenty four-oligonucleotide primer pairs were designed based on information of DNA sequence. The primer set(PLSPF2/PLSPR1) amplified single band(2.2 kb) of expected size with genomic DNA from seven Phellinus linteus, but not with that of other Phellinus species tested. The primers could be used identically in both DNA samples from mycelium and fruit bodies. This specific primers could offer a useful tool for detecting and identifying P. linteus rapidly.
서철재래종, 내장산 수집종, 대둔산 수집종, 거제도 수집종, 진부재래종 및 일본 도입종 등 계통의 용담을 대상으로 RAPD 분석을 통한 유사도 분석을 수행한 결과 적용한 20가지의 10-merprimer 중 8가지에서 54개의 증폭된 DNA 절편을 얻었다. 그 중 53.7%에 해당하는 29개의 band가 다형현상을 보였으며, 9.3%에 해당하는 5개의 band는 모든 계통에서 공통적으로 나타났고, 37%인 20개의 band가 특이성을 보였다. 특이성을 보이는 band들은 내장산 수집종에서 2개, 거제도 수집종에서 1개, 진부재래종에서 11개, 일본 도입종에서 6개가 관찰되었다. 유전적 유사도의 분석결과 서천재래종, 내장산 수집종, 대둔산 수집종 및 거제도 수집종이 0.76-0.87의 유사도를 보여 한 집단으로 구분되었으며, 이 집단과 진부재래종 및 일본 도입종 사이의 유사도는 0.23-0.34로 각 각 다른 집단으로 구별되었다. 또한 진부재래 종과 일본 도입 종 사이의 유사도는 0.41로 나타나 서로 구분되었다.
The study was carried out for comparison of variants and development of genetic markers using Randomly Amplified Polymorphic D사A (RAPD) analysis method. The ginseng variants used were as follows: Chungkyung-Chong, Hwangskoog-Chong, KG101 selected by the pureline selection method, and 6 kinds of Jakyung-Chong strains Uinjakyung, Jakyung-Chong 81783, Jakyung-Chong 847913, Jaky tong-Chong 79742, Jinjakyung of USSR, and Mimaki of Japan). Four of 10 RAPD primers showed the distinctive polymorphism among 9 ginseng variants and lines, and were selected for more detailed polymorphic analysis. The sequences of 4 selected primers were TGCCGAGCTG (Primer#2), AATCGGGCTG (#4), GAAACGGGTG (U7), and GTGACGTAGG (#8). All primers produced several common bands among the strains. However, when primer # 2 was applied, the electrophoregram showed the specific band at 1.8 kb region in Chungkyung-Chong, Hwangskoog- chong, and KG101, and 1 kb in the Jakyung-Chong 847913. In primer #4, 1.1 kb band was shown in Chungkyung-Chong, Hwangskoog-Chong, KG101, and Jakyung-Chong 79742. In primer # 7, 700 bp band was appeared in Jakyung-Chong 81783 and Jinjakyung of USSR In primer # 8, 800 bp band was observed only in Mimaki, comparing to another strains. When Similarity Index (SI) was calculated, Chungkyung-Chong and Hwngskoog-Chong, and Jakyung- chong 81783 and Jinjakyung of USSR showed the most close SI, 0.11 and 0.08, respectively. The data of KG101, which showed the SI of 0.13 with the group of Chungkyung-Chong and Hwangskoog-Chong, coincided with the fact that it was released from Hwangskoog-Chong by breeding process. The data of Jakyung strains indicated the significant variation among the strains. From these results, RAPD analysis method could be succesively applied to the classification and genetic analysis for breeding of Korean ginseng.
CHO Jung Jong;KIM Yong-Tae;HUR Sung Bum;KIM Young Tae
한국수산과학회지
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제29권6호
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pp.761-769
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1996
The random amplified polymorphic DNA (RAPD) technique was used to characterize 18 reference strains of microalgae, mostly Chlorella species, collected from various localities around Korea peninsular. Eighteen strains consist of four genera of the family marine Chlorella from 12 samples, two genera of fresh water Chlorella from three samples, and three genera on Nannochloris. Twenty 10-mer anonymous primers were screened for amplification of genomic DNA extracted from samples using the CTAB extraction method. Nineteen of these oligonucleotide primers were positive or band producing. Three of 20 random primers (OPA 10, OPA 12, and OPA 18) resulted in both clear band and a high degree of reproducibility and showed some potential to be used to discriminate individual samples of both genetically hetero-and homogeneous populations, in determining phylogenetic relationships between species within a genus and developing individual fingerprints for each samples.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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