• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제14권2호
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• pp.379-384
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• 2004

Fibroblast growth factor-2 (FGF-2) is known to modulate numerous cellular functions in various cell types, including cell proliferation, differentiation, survival, adhesion, migration, and motility, and also in processes such as wound healing, angiogenesis, and vasculogenesis. FGF-2 regulates the expression of several molecules thought to mediate critical steps during angiogenesis. This study examines the mechanisms underlying FGF-2-induced cell migration, using human umbilical vein endothelial cells (HUVECs). FGF-2 induced the nondirectional and directional migration of endothelial cells, which are inhibited by MMPs and plasmin inhibitors, and induced the secretion of matrix metalloproteinase-3 (MMP3) and MMP-9, but not MMP-l and MMP-2. FGF-2 also induced the secretion of the tissue inhibitor of metalloproteinase-l (TIMP-I), but not of TIMP- 2. Also, the pan-PKC inhibitor inhibited FGF-2-induced MMP-9 secretion. It is, therefore, suggested that FGF-2 induces the migration of cultured endothelial cells by means of increased MMPs and plasmin secretion. Furthermore, FGF-2 may increase MMP-9 secretion by activating the PKC pathway.

• 한국자원식물학회:학술대회논문집
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• 한국자원식물학회 2003년도 춘계 학술발표대회
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• pp.104-104
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• 2003

In this study, seven grain seeds(sorghum maize, buckwheat, soy bean, mung bean, red bean, and barngrass) and germinated seven grain seeds were examined the fibrinolytic activity through fibrin plate assay and SDS-PAGE. The results obtained were as follows : 1. In the fibrin plate assay, the extracts of maize, barngrass, sorghum and buckwheat showed fibrinolytic activity. Especially, Maize of them showed fibrinolytic activity that was almost similar to plasmin, fibrinolytic enzyme used as a positive control. 2. In the SDS-PAGE of seven grain seeds, fibrinolytic activity was remarkably shown in mung bean and red bean. 3. In the fibrin plate assay of germinated grain seeds, buckwheat(5 mm), buckwheat(10 mm) and soy bean(10 mm) showed a level of fibrinolytic activity that was about 0.3 fold than 1.0 unit of plasmin, Also maize(10 mm) of them showed a level of fibrinolytic activity that was about 0.5 fold than 1.0 unit of plasmin. As a result, maize of grain seeds was found that it has a strong fibrinolytic activity.

• KSBB Journal
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• 제21권4호
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• pp.292-297
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• 2006

본 연구에서는 상황버섯의 수용성 추출물을 이용하여 PPAECs 세포의 발아에 미치는 효과 및 그 작용기작을 알아보고자 하였다. 상황버섯 추출물을 $10{\sim}50{\mu}g/mL$ 농도로 처리하면 PPAECs 세포의 발아가 약 $38{\sim}58%$ 억제되었으나, $200{\sim}400{\mu}g/mL$ 처리군에서는 약 $1.42{\sim}1.47$배의 발아 증가를 유도하였다. PPAECs 세포에 상황버섯 추출물을 처리한 결과, MMP-2는 상황버섯 추출물 농도 $50{\mu}g/mL$까지는 약 30% 정도 분비가 억제되다가 $100{\mu}g/mL$에서부터 증가하기 시작하여 $400{\mu}g/mL$에서는 약 1.7배의 MMP-2 분비 증가 효과를 나타냈다. 이에 비해 MMP-9의 분비는 농도-의존적으로 감소되었으며, MMP-3는 $50{\sim}400{\mu}g/mL$에서 약 $1.5{\sim}1.7$배의 분비 증가 고과를 보였다. 또한 $100{\sim}200{\mu}g/mL$ 농도의 상황버섯 추출물에서 피브린 젤의 용해 및 MMP-2의 활성화에 관여하는 플라스민의 분비증가가 약 2.4배 유도되었다. 한편 상황버섯 추출물 처리시 고농도($100{\sim}400{\mu}g/mL$)에서 PPAECs 세포의 발아가 촉진되었으며, 이러한 효과는 MMPs 및 플라스민 억제제에 의해 약 $40{\sim}44%$ 억제되어 피브린 젤에서 확인된 상황버섯 추출물에 의한 발아 증가는 MMPs 및 플라스민의 분비증가에 의한 것이라 사료된다.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제11권5호
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• pp.402-407
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• 2006

Vascular endothelial cells release proteinases that degrade the extracellular matrix (ECM), thus enabling cell migration during angiogenesis and vasculogenesis. Sildenafil citrate stimulates the nitric oxide-cyclic guanosine monophosphate pathway through inhibition of phosphodiesterase type V (PDE5). In this report, we examined the mechanisms underlying sildenafil citrate-induced cell migration using cultured mouse aortic endothelial cells (MAECs). Sildenafil citrate induced migration and proteinase secretion by murine endothelial cells. Sildenafil citrate induced the secretion of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and MMP-9, which is inhibited by $NF-{\kappa}B$ inhibitors. Sildenafil citrate also induced the secretion of plasmin, which is inhibited by PI 3'-kinase inhibitors. It is suggested that sildenafil citrate-induced migrating activity in endothelial cells may be accomplished by increased secretion of proteinases.

• BMB Reports
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• 제38권2호
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• pp.177-181
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• 2005

Effects of common electrophoretic reagents, reducing agents ($\beta$-mercaptoethanol [BME] and DTT), denaturants (SDS and urea), and non-ionic detergent (Triton X-100), on the activity and stability of bovine plasmin (b-pln) and human plasmin (h-pln) were compared. In the presence of 0.1% SDS (w/v), all reagents completely inhibited two plns, whereas SDS (1%) and urea (1 M) denatured plns recovered their activities after removal of SDS by treatment of 2.5% Triton X-100 (v/v). However, reducing agents (0.1 M of BME and DTT) treated plns did not restore their activities. Based on a fibrin zymogram gel, five (from b-pln) and four (from h-pln) active fragments were resolved. Two plns exhibited unusual stability in concentrated SDS and Triton X-100 (final 10%) and urea (final 6 M) solutions. Two bands, heavy chain-2 (HC-2) and cleaved heavy chain-2 (CHC-2), of b-pln were completely inhibited in 0.5% SDS or 3 M urea, whereas no significant difference was found in h-pln. Interestingly, 50 kDa (cleaved heavy chain-1, CHC-1) of b-pln and two fragments, 26 kDa (light chain, LC) and 29 kDa (microplasmin, MP), of h-pln were increased by SDS in a concentration dependent manner. We also found that the inhibition of SDS against both plns was reversible.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제51권2호
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• pp.147-152
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• 2013

국내 유용 곤충의 70% 에탄올 및 물 추출물의 혈전용해 효과를 확인하기 위하여 fibrin plate를 이용하여 혈전용해능을 측정하였고, 그 분해산물을 SDS-PAGE를 이용하여 분리하였다. 그 결과 5종 (방울벌레 유충, 방울벌레 성충, 장수풍뎅이 성충, 꽃무지 유충, 꿀벌 유충)의 물 추출물에서 plasmin과 비교하여, 높은 혈전 용해 능을 나타내었고, 분해 패턴 또한 plasmin과 비슷하거나 더 강한 단백질 분해능을 나타내어 물 추출물에서 높은 혈전 용해능을 확인할 수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제17권9호
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• pp.1469-1476
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• 2007

Jeot-gal is a traditional Korean fermented seafood and has long been used for seasoning. We isolated 188 strains from shrimp, anchovy, and yellow corvina Jeot-gal, and screened sixteen strains that showed strong fibrinolytic activities on a fibrin plate. Among those strains, the strain that had the largest halo zone was chosen and identified as Bacillus licheniformis by using 16S rDNA sequencing and an API CHB kit. The fibrinolytic activity of Bacillus licheniformis was characterized and designated as bpKJ-31. The active component of bpKJ-31 was identified as a 37 kDa protein, designated bacillopeptidase F, by internal peptide mapping and N-terminal sequencing. The optimum activity of bpKJ-31 was shown at pH 9 and $40^{\circ}C$, with a chromogenic substrate for plasmin. It had high degrading activity for the $B{\beta}$-chain and $A{\alpha}$-chain of fibrin(ogen), and also acted on thrombin, but not skim milk and casein. The amidolytic activity of bpKJ-31 was inhibited by 1 mM phenylmethanesulfonyl fluoride, but 1 mM EDTA did not affect the enzyme activity, indicating that bpKJ-31 is an alkaline serine protease, like a plasmin. The bpKJ-31 showed approximately 14.3% higher fibrinolytic activity than the plasmin. These features of bpKJ-31 make it attractive as a health-promoting biomaterial.

• 한국버섯학회지
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• 제17권4호
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• pp.241-246
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• 2019

야생 잎새버섯 추출물을 이용하여 심혈관계 질환과 관련된 기능성 식품 개발을 위한 기초자료를 얻기 위해 준비한 물 추출물과 유기용매 분획물의 혈전용해활성과 트롬빈저해활성, acetylcholinesterase 저해활성, 항산화활성을 확인하였다. 10 mg/mL의 농도에서 물 추출물과 물 분획물은 각각 0.93 plasmin unit와 0.73 plasmin unit의 높은 혈전용해활성을 나타냈으며, 부탄올 분획물은 79.60%의 트롬빈저해활성을 나타냈다. 클로로포름 분획물은 85.88%의 높은 acetylcholinesterase 저해활성을 나타냈고, 물 추출물의 항산화 활성은 39.81%로 비교적 낮게 나타냈다. 부분 정제된 효소를 포함하고 있는 물 분획물은 섬유소원의 Bβ chain를 모두 분해시켰지만, Aα chain은 느리게 분해시키고 γ chain 과는 반응하지 않았다. 실험 결과로부터 야생 잎새버섯 추출물은 높은 혈전용해활성과, 트롬빈저해활성, acetylcholinesterase 저해활성을 나타내 심혈관계 질환 예방을 위한 제약과 기능성식품 개발에 이용 가능할 것으로 기대된다.

• 생명과학회지
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• 제14권2호
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• pp.263-268
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• 2004

본 연구에서는 FGF-2를 이용하여 혈관내피세포의 발아와 단백질분해효소의 분비 및 인테그린과의 관계를 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. PPAECs 세포의 발아에 미치는 FGF-2의 효과를 조사한 결과, 10 ng/ml에서 약 3.5배 증가되는 등 농도-의존적으로 발아가 증가되었다. MMPs에 대한 enzyme immunoassay결과, MMP-2에서만 약 1.9배의 분비증가가 유도되었다. MMP-1 및 MMP-3는 FGF-2에 의해 유의할만한 분비 증가가 나타나지 않았으며, 특이하게 MMP-3는 FGF-2의 처리 없이도 많은 양이 분비되었고, MMP-9은 0.6∼1.2 ng/$10^{6}$ cells 정도로 분비량이 적었다. FGF-2에 의한 플라스민의 분비증가 여부를 확인한 결과, 10 ng/ml에서 약 2.6배 증가하였으며, MMPs 억제제 및 인테그린 억제제에 의해 유의할만한 감소가 나타났고 플라스민 억제제인 $\alpha$2-antiplasmin에 의해서는 플라스민의 분비가 완전히 억제되었다. 또한, FGF-2 처리에 의해 농도-의존적으로 인테그린 Mac-1의 발현이 증가되었으며, 인테그린 억제제인 IS201를 전처리한 결과, 인테그린 Mac-1의 발현이 완전히 억제되었다. FGF-2에 의한 발아 유도효과는 IS201 처리에 의해 거의 완벽하게 억제되었으며, MMP-2 및 플라스민의 분비도 유의할만하게 감소시켰다. 이상의 결과를 요약하면, FGF-2에 의해 유도된 혈관내피세포의 발아 증가는 MMP-2 및 플라스민의 분비증가와 인테그린 Mac-1의 발현 증가에 의한 것이라 생각된다.

• KSBB Journal
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• 제18권6호
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• pp.485-489
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• 2003

HGF는 내피세포의 증식 및 이동을 일으키는 강력한 혈관 신생 유도인자 및 생존인자로서 작용한다고 알려져 있다. 본 연구에서는 HUVECs 세포를 이용하여 내피세포의 이동 및 단백질분해효소의 분비에 미치는 HGF의 효과를 확인하였다. 그 곁과, HGF 처리 (10ng/$m\ell$)에 의해 HUVECs 세포의 이동이 약 3.3배 촉진되어, HGF가 HUVECs 세포에서 강력한 이동 유도인자라는 사실을 확인하였다. 내피세포의 이동에 관여할 것이라 여겨지는 MMPs, TIMPs 및 플라스민의 분비에 미치는 HGF의 효과를 관찰한 결과, HGF에 의해 MMP-2 및 MMP-3의 분비양이 각각 3.3배와 6.1배씩 증가되었다. HGF에 의한 TIMPs 분비효과를 관찰한 결과, TIMP-1은 대조군에 비해 약 1.8배 분비가 증가되었으나, TIMP-2는 대조군에 비해 약 3.1배 분비가 억제되었다. 또한, 광범위 MMPs-억제제인 BB-94 (20ng/$m\ell$) 및 플라스민 억제제인 $\alpha$$_2$-antiplasmin (100mU)을 처리했을 때, HGF에 의해 유도된 혈관내피세포의 이동이 거의 완벽하게 억제되었다. 결론적으로, HGF는 HUVECs 세포에서 MMP-2, MMP-3, MMP-9, TIMP-1 및 플라스민의 분비 증가를 일으켰으며, HGF에 의해 분비가 증가 된 단백질분해효소에 의해 세포외기질 및 기저막 단백질로의 혈관내피세포의 이동이 촉진되고, 결과적으로 혈관신생을 유도할 것이라 사료된다.