A lectin with in-vitro anticancer activity against established human cancer cell lines has been purified by affinity chromatography on asialofetuin-linked amino activated silica beads from the tubers of Arisaema tortuosum, popularly known as Himalayan Cobra lily, a monocot plant from the family Araceae. The bound Arisaema tortuosum lectin (ATL) was eluted with glycine-HCl buffer, pH 2.5. ATL was effectively inhibited by asialofetuin, a complex desialylated serum glycoprotein as well as by N-acetyl-D-lactosamine, a disaccharide. It gave a single band corresponding to a subunit molecular weight of 13.5 kDa in SDS-PAGE, pH 8.8 both under reducing and non reducing conditions. When subjected to gel-filtration on Biogel P-200, it was found to have a molecular weight of 54 kDa, suggesting a homotetramer structure, in which individual polypeptides are not bound to each other with disulfide bonds. ATL is a glycoprotein with 0.9% carbohydrate content, stable up to $55^{\circ}C$ and at pH 2 to 10. The lectin had no requirement for divalent metal ions i.e. $Ca^{2+}$ and $Mn^{2+}$ for its activity. However, as reported for other monocot lectins, ATL gave multiple bands in isoelectric focusing and Native PAGE, pH 8.3. The lectin was found to inhibit in vitro proliferation of human cancer cell lines HT29, SiHa and OVCAR-5.
The soluble acid invertase ($\beta$-D-fructofuranoside fructohydrolase, EC 3.2.1.26) was isolated and characterized from the hypocotyls of mung bean (Phaseolus radiatus L.). The enzyme was purified to apparent homogeneity by consecutive step using diethylaminoethyl (DEAE)-cellulose anion exchange, Concanavalin (Con) A affinity and Sephacryl S-300 chromatography. The overall purification was about 148-fold with a yield of about 15%. The finally purified enzyme exhibited a specific activity of about 139 $\mu$mol of glucose produced mg-1 protein min-1 at pH 5.0 and appeared to be a single protein by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and nondenaturing PAGE. The enzyme had the native molecular weight of 70 kD and subunit molecular weight of 70 kD as estimated by Sephadex G-200 chromatography and SDS-PAGE, respectively, suggesting that the enzyme was composed of a monomeric protein. On the other hand, the enzyme appeared to be a glycoprotein containing N-linked high mannose oligosaccharide chain on the basis of its ability to bind to the immobilized C on A. The enzyme had a Km for sucrose of 1.8 mM at pH 5.0 and maximum activity around pH 5.0. The enzyme showed highest enzyme activity with sucrose as substrate, but the activity was slightly measured with raffinose and cellobise. No activity was measured with maltose and lactose. These results indicate the soluble acid invertase is a $\beta$-fructofuranosidase.
인삼(Panax ginseng C.A. Meyer) 종자단백질인 vicilin을 ammonium sulfate 침전, gel permeation 및 이온 교환 크로마토그래피로 정제하였다. Vicilin은 분자량 55,000(큰 소단위) 및 44,000(작은 소단위)인 두 종의 소단위를 포함하는 당단백질이다. Vicilin에 대한 항체를 토끼에서 형성시켜 DEAE-Affi-Gel Blue affinity 크로마토그래피로 정제하였다. 이 항체와 금 입자가 결합된 2차 항체를 종자의 배유세포에 반응시켰다. 금 입자는 배유세포내의 단백질체, 전자밀도가 높은 과립 및 골지체의 elaborating 과립에 표지되었다. 이러한 결과는 조면소포체에서 합성되어 골지체로 수송된 vicilin이 골지의 소포내에서 공정과정을 거쳐 전자밀도가 높은 과립이 된 다음 단백질로 수송됨을 나타낸다.
Lactoferrin is an 80-kDa iron-binding glycoprotein that is found in high concentrations in human milk. Human lactoferrin (hLF) has several beneficial biological activities including immune system modulation and antimicrobial activity. In the present study, we devolved a method of hLF expression through introducing the hLF gene construct into Oriza sativa cv. Nakdong using the Agrobacterium-mediated transformation system. The expression of the hLF gene under the control of the rice glutelin promoter was detected in the seeds of transgenic rice plants. Transformed rice plants were selected on media containing herbicide(DL-phosphinothricin) and the integration of hLF cDNA was confirmed by Southern blot analysis. The expression of the full length hLF protein from the grains of transgenic rice plants was verified by Western blot analysis. The lactoferrin expression levels in the transformed rice grains determined by enzyme-linked immunosorbant assay accounted for approximately 1.5% of total soluble protein. Taken together, these data indicate that rice grains expressing hLF can be directly incorporated into infant formula and baby food.
Lim, Chae-Yeon;Kim, Deuk-Su;Kang, Yangjoo;Lee, Ye-Rin;Kim, Kibum;Kim, Do Sun;Kim, Moon-Soo;Ko, Kisung
Biomolecules & Therapeutics
/
제30권6호
/
pp.546-552
/
2022
Epidermal cell adhesion molecule (EpCAM) is a tumor-associated antigen (TAA), which has been considered as a cancer vaccine candidate. The EpCAM protein fused to the fragment crystallizable region of immunoglobulin G (IgG) tagged with KDEL endoplasmic reticulum (ER) retention signal (EpCAM-FcK) has been successfully expressed in transgenic tobacco (Nicotiana tabacum cv. Xanthi) and purified from the plant leaf. In this study, we investigated the ability of the plant-derived EpCAM-FcK (EpCAM-FcKP) to elicit an immune response in vivo. The animal group injected with the EpCAM-FcKP showed a higher differentiated germinal center (GC) B cell population (~9%) compared with the animal group injected with the recombinant rhEpCAM-Fc chimera (EpCAM-FcM). The animal group injected with EpCAM-FcKP (~42%) had more differentiated T follicular helper cells (Tfh) than the animal group injected with EpCAM-FcM (~7%). This study demonstrated that the plant-derived EpCAM-FcK fusion antigenic protein induced a humoral immune response in mice.
S.M. Cho;Kim, J.Y.;J.E. Jung;S.J. Mun;S.J. Jung;Kim, K.S.;Kim, Y.C.;B.H. Cho
한국식물병리학회:학술대회논문집
/
한국식물병리학회 2003년도 정기총회 및 추계학술발표회
/
pp.65.2-65
/
2003
To protect the plant against several soil-borne pathogens, we are currently constructing disease-resistant transgenic root stock for the growth of cucurbitaceae vegetable plants, watermelon and gourd. We made a watermelon cDNA library from Cladosporium cucumerinum-Infected leaves for substractive hybriazation and differential screening. We isolated the several pathogen inducible cDNA clones, such as caffeoyl-CoA-methyltransferase, LAA induced protein, receptor-like kinase homolog, hydroxyproline-rich glycoprotein, catalase, calmodulin binding protein, mitochondrial ATPase beta subunit, methyl tRNA synthetase and WRKY transcription factors. We previously obtained CaMADS in pepper and galactinol synthase ( CsGolS) in cucumber that were confirmed to be related with disease-resistance. CaMADS and CsGolS2 were transformed into the inbred line 'GO701-2' gourd, the inbred line '6-2-2' watermelon and the Kong-dye watermelon by Agrobacterium tumerfaciens LBA4404. Plant growth regulators (zeatin, BAP and IAA) were used for shoot regeneration and root induction for optimal condition. Putative transgenic plants were selected in medium containing 100mg/L kanamycin and integration of the CaMADS and CsGO/S2 into the genomic DNA were demonstrated by the PCR analysis. We isolated major soil-borne pathogens, such as Monosporascus cannonballus, Didymella bryoniae, Cladosporium cuvumerinum from the cultivation area of watermelon or root stock, and successfully established artificial inoculation method for each pathogen. This work was supported by a grant from BioGreen 21 program, Rural Development Administration, Republic of Korea.
Lysin motif (LysM) proteins are reported to be necessary for the virulence and immune response suppression in many herbaceous plant pathogens, while far less is documented in woody plant pathogens. In this study, we preliminarily characterized the molecular function of a LysM protein LtLysM1 in woody plant pathogen Lasiodiplodia theobromae. Transcriptional profiles revealed that LtLysM1 is highly expressed at infectious stages, especially at 36 and 48 hours post inoculation. Amino acid sequence analyses revealed that LtLysM1 was a putative glycoprotein with 10 predicted N-glycosylation sites and one LysM domain. Pathogenicity tests showed that overexpressed transformants of LtLysM1 displayed increased virulence on grapevine shoots in comparison with that of wild type CSS-01s, and RNAi transformants of LtLysM1 exhibited significantly decreased lesion length when compared with that of wild type CSS-01s. Moreover, LtLysM1 was confirmed to be a secreted protein by a yeast signal peptide trap assay. Transient expression in Nicotiana benthamiana together with protein immunoblotting confirmed that LtLysM1 was an N-glycosylated protein. In contrast to previously reported LysM protein Slp1 and OsCEBiP, LtLysM1 molecule did not interact with itself based on yeast two hybrid and co-immunoprecipitation assays. These results indicate that LtLysM1 is a secreted protein and functions as a critical virulence factor during the disease symptom development in woody plants.
We examined whether extracts from 14 local citrus spp. on Jeju Island (Korea) contained chemosensitizing activity that would increase the cytotoxic effect of vincristine(VCR) in drug-resistant cancer cells. We report that methanol extracts from fruits and flowers of some species had a chemosensitizing effect that reversed P-glycoprotein (Pgp)-mediated multidrug resistance (MDR). Using drug-sensitive AML-2/WT and drug-resistant AML-2/D100 in the absence of VCR in human acute myelogenous leukemia cells we found that fruit or flower extracts alone generally had low cytotoxicity $(IC_{50}>200\;{\mu}g/ml)$. In studies examining the effect of extracts on 120 ng/ml VCR cytotoxicity in drug-resistant AML-2/D100 cells, we found that immature fruit extracts had greater chemosensitizing activity than either extracts from mature fruit or flower. Of the 14 species examined, the immature fruit extract from Inchangkyool (Citrus ichangiensis) showed the hishest chemosensitizing index(CI) valus. Immature fruit extracts of Hongkyool(C. tachibana), Byungkyool(C. platymamma), Cheongkyool(C. nippokoreana) and Jinkyool (C. sunki) also strongly potentiated VCR cytotoxicity in AML-2/D100 cells. The chemosensitizing effect of peel extracts was 2-10-fold that of whole fruit extracts from Hongkyool (C. tachibana), Byungkyool (C. platymamma) and Inchangkyool (C. inchangiensis). The CI values for flower extracts were higher than those for mature fruit extracts, but lower than those for immature fruit extracts. These results indicate that immature citrus fruits contain compounds that do not exert their activity solely through cytotoxicity. In particular, Incahngkyool (C. inchangiensis), Byungkyool(C.platymamma), Cheongkyool(C. nippokoreana) and Hongkyool (C. tahibana) may be useful sources of chemosensitizing compounds.
Kim, Sung-Ryul;Yoon, Ju-Yoon;Choi, Gug-Sun;Chang, Moo-Ung;Choi, Jang-Kyung;Chung, Bong-Nam
The Plant Pathology Journal
/
제26권2호
/
pp.130-138
/
2010
Orchid fleck virus (OFV) is an unassigned plant virus in the family Rhabdoviridae. OFV was isolated from Cymbidium sp. showing oval necrotic lesions on their leaves in Korea, and designated as OFV-NHHS1. The complete nucleotide sequence of the RNA1 (6,413 nt) (GenBank accession no. AB516442) and RNA2 (6,001 nt) (GenBank accession no. AB516441) was determined in this study. RNA1 and RNA2 contained five and one ORF respectively. RNA1 encodes nucleocapsid (N) of 49 kDa, ORF2 of 26 kDa, ORF3 of 38 kDa, ORF4 of 20 kDa and glycoprotein (G) of 61 kDa proteins, whereas RNA2 encodes a single polymerase of 212 kDa. OFV-NHHS1 shared extremely high similarity of 98.6-100% and 98.9-99.6% in nucleotidle and amino acid sequences with a Japanese isolate, OFV-so, respectively. However, the N, G and L of OFV-NHHS1 revealed 6.9-19.3%, 7.3-12.0%, and 13.4-26.6% identities to those of 29 Rhabdoviruses, respectively. To survey the infection rate of OFV in commercial orchids in Korea, 51 Cymbidium sp., 10 Phalaenopsis sp., 22 Oncidium sp. and 21 Dendrobium sp. plants that showed typical viral symptoms were collected. RT-PCR with specific primers for detection of Cymbidium mosaic virus (CymMV), ORSV and OFV showed high infection rate by ORSV alone and double infection by ORSV and CymMV. One of the orchids tested was infected with OFV. This is the first report of the complete nucleotide sequences of OFV isolated in Korea.
Jo, Seung-Hyun;Kwon, Suk-Yoon;Park, Doo-Sang;Yang, Kyoung-Sil;Kim, Jae-Whune;Lee, Ki-Teak;Kwak, Sang-Soo;Lee, Haeng-Soon
Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
/
제11권5호
/
pp.442-448
/
2006
Human lactoferrin (hLf) is an iron-binding glycoprotein that has been considered to play many biological roles in the human, including the stimulation of the immune system, antimicrobial and anti-inflammatory effects, and regulation of iron absorption. We generated transgenic Siberian ginseng (Acanthopanax senticosus) cell cultures producing a functional hLf protein using the signal peptide sequence from the endoplasmic reticulum and driven by an oxidative stress-inducible SWPA2 promoter which is highly expressed in plant cell cultures. The production of hLf increased proportionally to cell growth and showed a maximal level (up to 3.6% of total soluble protein) at the stationary phase in suspension cultures. Full-length hLf protein was identified by immunoblot analysis in transgenic cell cultures of Siberian ginseng. Recombinant hLf (rhLf) was purified from suspension cells of Siberian ginseng by ammonium sulfate precipitation, cation-exchange and gel filtration chromatography. N-terminal sequences of rhLf were identical to native hLf (nhLf). The overall monosaccharide composition of rhLf showed the presence of plant specific xylose while sialic acid is absent. Antibacterial activity of purified rhLf was higher than that of nhLf. Taken together, we anticipate that medicinal Siberian ginseng cultured cells, as demonstrated by this study, will be a biotechnologically useful source for commercial production of functional hLf not requiring further purification.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.