• 한국자원식물학회지
• /
• 제23권2호
• /
• pp.145-150
• /
• 2010

활성산소의 하나인 과산화수소(hydrogen peroxide, $H_2O_2$)에 대한 세포독성과 이에 대한 연꽃수술(Nelumbo nucifera stamen, NNS)추출물의 항산화효과 및 멜라닌화에 미치는 영향을 알아보기 위하여 세포부착율 (cell adhesion activity, CAA)을 비롯한 티로시나제활성저해능 및 총멜라닌합성량을 분석하였다. 본 실험 결과 hydrogen peroxide($H_2O_2$)는 배양 인체피부흑색종세포 (SK-MEL-3)의 CAA를 유의하게 감소시킴으로서 세포독성효과를 나타냈다. 이에 대하여 NNS추출물은 $H_2O_2$의 산화적 손상에 의하여 감소된 CAA를 유의하게 증가시킴으로서 항산화효과를 나타냈다. 한편, $H_2O_2$에 대한 NNS추출물의 멜라닌화에 대한 영향에 있어서 NNS추출물은 $H_2O_2$에 의하여 활성화된 티로시나제활성과 총멜라닌합성량을 감소시킴으로서 멜라닌화에 대하여 억제효과를 나타냈다. 이상의 결과로 부터 $H_2O_2$는 배양 인체피부흑색종세포에 고독성을 나타냈으며 NNS와 같은 식물추출물은 $H_2O_2$와 같은 활성산소에 의한 산화적 손상 및 멜라닌화를 방어하는데 효과적인 것으로 나타났다.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제21권2호
• /
• pp.77-84
• /
• 1994

꽃기린 현탁배양에 의한 화청소의 생산에 미치는 탄소원 의 역할을 규명하고 이들 배양세포를 생물반응기를 이용하여 대량배양을 시도하였으며 생성된 색소의 분리 및 동정을 행하였다. 세포의 생장은 3% sucrose농도에서 양호하였으나 단위세포무게당 색소함량은 sucrose의 농도가 3%에서 9%로 증가함에 따라 증진되었다. sucros는 배양 1일 후부터 glucose와 fructose로 분해되지 시작하며, 고농도로 공급된 sucrose는 배지의 삼투압제로 작용하여 색소의 형성을 촉진하였다. 생물반응기 배양의 경우, 기포발생형 생물반응 기가 세포의 손상을 방지하 양호한 생육상을 나타내어 적합하였고 접종농도를 증가시킴으로서 총 색소의 함량은 감소하였으나 배양기간이 1/2로 단축되었으며 색소의 1일 생산성도 증가되는 효과를 나타내었다. 기포발생형 생물반응기를 이용한 색소생산량은 2.2 mg/L/day를 나타내었다. 한편, 배양세포로부터 생성된 주된 화청소는 cyanidin-3-glucoside로 추정되었다.

• Journal of Plant Biology
• /
• 제24권1호
• /
• pp.13-19
• /
• 1981

Ammonium citrate와 ammonium succinate가 고려인삼(Panax ginseng C. A. Meyer) 배양세포의 생육 및 질소성분의 흡수에 미치는 영향을 조사하기 위하여 Murashige and Skoog 배지에서 ammonium nitrate 대신에 농도를 달리하여 ammonium citrate와 ammonium succinate를 첨가한 MS배지에 인삼 callus를 액체 진탕배양하여 다음과 같은 결론을 얻었다. Ammonium citrate 10mM과 ammonium succinate 10mM을 첨가한 배양기에서 생육량, NO$_3$-N 흡수량 및 전질소량이 control보다 많았고, NH$_4$-N 흡수량은 control과 같았다. 또한 각각 5mM씩 첨가한 경우에는 거의 모두 control과 별 차이가 없었다. 결론적으로 ammonium citrate 10mM과 ammonium succinate 10mM첨가한 배양기에서는 NO$_3$-N 등의 흡수를 촉진하여 배양세포의 대사를 촉진시켜 생육량을 증가시키는 것으로 생각된다. 그리하여 ammonium citrate 또는 ammonium succinate의 농도를 조절 공급하면 인삼 배양세포의 증식을 촉진시킬 수 있다고 사료된다.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제22권2호
• /
• pp.115-120
• /
• 1995

국내품종인 동진벼와 태백벼의 미숙접합자배 유래 배발생 현탁배양 세포의 초저온 보존 시스템을 개발하였다. 동결/해동 후 캘러스 재생률은 동진벼의 경우 2 M DMSO와 0.4 M sucrose를 태백벼의 경우 0.64 M DMSO와 0.4 M sucrose를 혼용처리하였을 때 캘러스 재생률이 각가 88%와 90%로 가장 높았다. 또한 고농도의 삼투용액에서 배양세포 의 전처리 과정은 필요하지 않았다. 재생된 캘러스를 1 mg/L NAA와 5 mg/L kinetin이 첨가 된 $N_{6 }$, 배지로 이식하여 명배양하였을 때 체세포배발생을 통하여 다수의 유식물체가 발달하였다. 약 100여개의 식물체가 재분화되었으며, 이중 25%는 albino이었다.다.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제21권5호
• /
• pp.309-314
• /
• 1994

간편하면서도 효율적인 단자엽 식물의 형질전환 기법을 개발하기 위하여 배발생 세포를 직접 electroporation하여 DNA를 도입하는 실험을 벼와 잔디에서 실시하였다. 잔디는 수정 후 3주된 미숙배에서 캘러스를 유도하였으며, 2.4-D가 1 mg/L 함유된 액체 MS배지로 옮겨 진탕배양한 것을 electroporation 실험에 이용하였다. 벼는 20 mm 정도의 미숙화서 유래의 캘러스를 액체 N$_{6}$배지(1 mg/L 2.4-D 함유)에서 진탕배양하여 획득한 세포주를 사용하였다. 액체 진탕배양한 세포괴를 GUS expression vector인 pGA1074 (30 $\mu\textrm{g}$/ml)와 함께 MS 액체 배지에서 Electroporation하였다. 세포벽과 세포막을 통한 세포로의 DNA 전이는 GUS 유전자의 발현 여부 및 정도에 따라 결정하였다. 400 volt, 800 $\mu$F capacitance로 electroporation 처리된 벼와 잔디의 세포괴들은 200 ${\mu}\ell$ (packed cell volume)의 세포괴 당 25 unit (1 unit=파란색을 띤 독립된 세포군) 이상의 빈도로 GUS 활성을 나타내었다. 반면에 무처리 세포주 및 처리한 비배발생 세포주에서는 GUS 발현이 일어나지 않음을 반복적으로 확인차였다. 따라서 electroporation에 의한 벼와 잔디의 형질전환실험에서 원형질체 대신 intact한 배발생 세포가 이용될 수 있음을 의미한다

• 한국응용곤충학회지
• /
• 제22권4호
• /
• pp.293-299
• /
• 1983

강남콩 렉틴과 근류균(R. phaseoli)의 결합에 관한 광범위한 실험을 수행하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 강남콩종자의 자엽에서 가장 많은 렉틴은 성장에 따라 뿌리로 이동하였는데 발아후 약 5일경에, 뿌리의 길이가 $6\~8cm$인 것이 가장 렉틴의 함량이 많았다. 2. 근류균의 배양시기에 따가 강남콩렉틴과의 응집력을 측정 한 결과 배양초기 가 후기보다 응집력이 높았다. 3. 강낭콩종자에 존재하는 렉틴을 추출 정제하여서 6종 근류균과의 응집력을 측정한 결과 R. phaseoli와의 응집이 가장 강했고 이는 렉틴에 대한 특이적 결합, 즉 숙주특이성을 입증하는 것이었다. 4. 단당류에 의한 응집반응의 경쟁적 저해를 시도함으로써 강남콩렉틴의 근류균에 대한 결합부위가 mannose와 galactose를 포함한 oligosaccharides가는 것을 알수 있었으며 이들의 저해효과에 필요한 당의 최소농도는 6.25mM로서 측정되었다. 5. R. phaseoli와 강낭콩 렉틴을 강낭콩 뿌리에 인공감염시켜본 결과 렉틴의 경쟁적 저해가 확인되었으므로 뿌리혹형성에 렉틴의 가교가 관여한다는 가설을 입증할 수 있었다. 6. Immunodiffusion에 의한 R. phaseoli의 항원 결정기는 R. japonicum과 일부 관련성이 있을뿐 다른 Rhizobium spp.과는 전혀 다른 것으로 나타났다.

• Journal of Plant Biotechnology
• /
• 제35권1호
• /
• pp.87-94
• /
• 2008

Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV)는 돼지의 급성장염을 유발하여 설사 등의 증상을 일으키는 바이러스이다. 본 연구에서는 PEDV 항원단백질을 생산하는 담배 배양세포주를 개발하고자 하였다. PEDV에서 항원성이 알려진 스파크 단백질의 일부분을 암호화하는 유전자를 PCR로 합성하여 4종류의 형질전환 벡터를 제작하였다. 담배 배양세포 BY-2를 재료로 하여 Agrobacterium tumefaciens을 매개로 형질전환하였다. 선발배지 (MS salt, $KH_2PO_4$ 370 mg/L, 2,4-D 0.18 mg/L, Thiamin HCl 1 mg/L, kanamycin 100 mg/L, 침랙무 400 mg/L)에서 캘러스를 3주 간격으로 3개월 동안 계대배양하여 카나마이신 저항성 캘러스를 선발하였다. 선발된 캘러스를 대상으로 PCR 분석한 결과 형질전환 효율은 75% 이상이었으며 벡터당 40 여개 이상의 형질전환 배양세포주를 얻었다. 형질전환 배양세포주를 대상으로 Southern blot 분석하여 PEDV 유전자가 고구마 식물체의 게놈으로 안정적으로 도입되었음을 확인하였다. Northern blot 분석 결과 PEDV 스파크 단백질 유전자가 높은 수준으로 발현함을 확인하였으며 dot blot으로 PEDV 스파크 단백질 고생산 배양세포주를 선발하였다. 형질전환 담배 배양세포로부터 생산된 PEDV 항원단백질을 BALB/c 마우스에 경구투여 하여 면역활성을 조사한 결과 형질전환 세포주인 35S::SP1-M, 35S::SP2-M, 35S::SP4-M 세포주에서 1:10의 희석배수까지 바이러스 억제효과가 관찰되었다. 제작된 형질전환 벡터는 고구마와 같은 경구용 사료작물에 활용할 수 있을 것이다.

• Journal of Plant Biology
• /
• 제37권3호
• /
• pp.365-370
• /
• 1994

Excised cotyledon segments of ginseng zygotic embryos at various developmental stages were cultured on MS basal medium from which somatic embryos were directly induced. The frequency of somatic embryo formation on the segments declined with the advancing zygotic embryo maturity. All of the cells in the cotyledons of immature zygotic embryos were smaller and more densely cytoplasmic than those in mature embryos. Histological examinations revealed that the poly-somatic embryos formed on immature embryos were of multi-cell originand derived from the epidermal and subepidermal cell layers. However, in the cotyledon of germinating zygotic embryos, only theepidermal cells were densely cytoplasmic and singularly competent to develop into somatic embryos resulting into single embryos at a frequency of 100%.

• Journal of Plant Biotechnology
• /
• 제33권2호
• /
• pp.75-84
• /
• 2006

Heteroplasmic rice plastid transformant was generated using suspension cells as bombardment materials. PCR analyses confirmed incorporation of aadA and cp4-epsps genes into the rice plastid genome by homologous recombination events via the flanking sequences of the trnI and trnA. Transplastomic calli were actively proliferated when cultured on AAM2 medium supplemented with various concentrations (500-3000 mg/L) of streptomycin in dark condition, and transplastomic suspension cells showed resistance to nonselective herbicide, glyphosate. Through 'agarose pie selection' method, heteroplastomic calli, containing considerably high level of transplastome and expressing the CP4 EPSPS protein, were obtained. They were further regenerated to green shoots with healthy roots.

• Journal of Plant Biology
• /
• 제36권1호
• /
• pp.19-27
• /
• 1993

Effects of polyamines on DNA synthesis were studied in synchronized culture of Nicotiana tabacum L. When DFMO and DFMA, inhibitors of ornithine decarboxylase and arginine decarboxylase, respectively were initially applied to the cells, the polyamine contents were rapidly dropped and [methyl-3H] thymidine incorporation into DNA was markedly reduced during the early stage of culture period. Inhibition of DNA synthesis, however, was partially reversed when these inhibitors were applied simultaneously with putrescine. In addition, exogenous administration of putrescine also increased the DNA synthesis during the all over the culture period. In vitro activity of DNA polymerase from Nicotiana tabacum L. was promoted by increasing concentrations of polyamines in the reaction mixture. Maximal activity was shown at 5 mM putrscine, 0.5 mM spermidine and spermine, respectively. Lack of Mg2+ ion in the reaction buffer resulted in an inhibition of the enzyme activity by about 30%. The inhibition could not be completely reversed by application of polyamines at optimal concentrations. These results suggest that polyamines promote the DNA synthesis in vivo and in vitro by stabilizing the DNA-helix upon binding to negatively charged groups on DNA or increasing the activity of DNA polymerase in Nicotiana tabacum L.