1997년과 1998년 광주와 광명의 상추 재배 온실에서 새로운 병해가 발견되었다. 처음에는 잎에 병반이 불규칙적이고 작은 연녹색이었다가 점점 커져 지름이 2$\sim$5 mm 정도인 수침상의 검은색 병반이 형성되었다. 잎의 아래쪽에서 엽맥을 따라 검은색의 줄무늬 병반이 형성되기도 하고 심해지면 잎이 시들어 말라 죽었다. YDC 배지에서 병원세균을 순수 분리하였을 때 Xanthomonas속 세균의 전형적인 특징인 노란색 색소를 띤 세균이 형성되었다. 분리된 세균을 $10^8$ cfu/ml로 현탁한 후 상추의 엽맥에 주사 접종하여 병원성을 확인하였다. 지방산 조성 및 함량과 다양한 탄소원 이용정도를 이용하여 분리세균 SL0246과 SL1352를 X. campestris pv. vitians로 동정하였으며 이 병을 상추의 세균성점무의병으로 명명하였다.
폐흡충중의 진단은 일반적으로 객담에서 충란을 검출하는 것이 가장 확실한 진단법으로 간주되고 있지만 이소기생의 경우는 물론, 본 기생충의 감염자 및 감염 강도의 감소로 인해 실제 폐에 기생한 경우에 있어서도 객담 검사의 민감도가 매우 낮아져 혈청학적 검사의 필요성이 점차 대두되고 있다. 따라서 식염수 추출액을 항원으로 하여 효소면역 측정법을 실시하는 방법으로 면역 진단을 실시하고 있으나 조항원의 단백 구성이 복잡하여 간흡충을 비롯한 몇몇 흡충류 감염자 혈청에서 교차 반응이 야기되고 있다. 그동안 정제 항원을 만들고자 하는 시도가 많았음에도 불구하고 특이 항원의 분리는 실제로 불가능하였다. 이와 같은 문제점을 보완하기 위하여 폐흡충 조항원을 SDS-PAGE로 전기영동한 다음 EITB를 이용하여 항원대별 항원성 및 특이성을 관찰하여 폐흡충 조항원의 폐흡충증 혈청에 대한 특이 반응대를 확인해 보고자 하였다. 실험에 사용된 항원은 실험적으로 개에 감염시켜 24주만에 얻은 폐흡충 성충의 식염수 추출액이며 3∼20%의 linear gradient gel에서 SDS-PAGE하였다. Silver 염색한 결과 229 kDa∼10kDa 사이에서 26개의 항원대를 구성하고 있었으며 주요 항원대에 대하여 EITB를 실시한 결과 폐흡충 감염자 혈청은 229, 91, 60, 50, 35∼31, 27, 25, 21, 17, 11 및 10kDa의 분자량을 갖는 항원대와 반응하였다. 간흡충 감염자 혈청은 35∼31, 19, 11및 17 kDa의 항원대와 반응하였고 낭미충 감염자 혈청은 229, 31∼31, 27, 25 및 17kDa의 항원대와 반응하였다. 광절열두조충 1예도 17 kDa의 항원대와 반응하였다. 따라서 91, 60, 21 및 10kDa의 항원대 중 일부가 폐흡충 조항원에 있어서 체홉충에 대한 종특이 항원대로 생각되었으며 향후 immunoblot을 이용한 폐흡충중의 면역진단에 이용될 수 있는 항원대로 간주할 수 있었다.
Alginate microspheres, containing fluorescein isothiocyanate-bovine serum albumin (FITC-BSA) or green fluorescent protein (GFP) were prepared and used as a model drug to develop the oral vaccine delivery system. The alginate microspheres were coated with poly-L-lysine or chitosan. Two methods, w/o-emulsion and spray, were used to prepare alginate microspheres. To optimize preparation conditions, effects of several factors on the particle size and particle morphology of microsphere, and loading efficiency of model antigen were investigated. In both preparation methods, the particle size and the loading efficiency were enhanced when the concentration of sodium alginate increased. In the w/o-emulsion preparation method, as the concentration of Span 80 was increased from 0.5% to 2%, the particle size was decreased, but the loading efficiency was increased. The higher the emulsification speed was, the smaller the particle size and loading efficiency were. The concentration of calcium chloride did not show any effect on the particle size and loading efficiency. In the spray preparation method, the particle size was increased as the nozzle pressure $(from\;1\;kgf/m^2\;to\;3\;kgf/m^2)$ and spray rate was raised. Increasing calcium chloride concentration (<7%) decreased the particle size, in contrast to no effect of calcium chloride concentration on the w/o-emulsion preparation method. Alginate microspheres prepared by two methods were different in the particle size and loading efficiency, the particle size of microspheres prepared by the spray method was about $2-6\;{\mu}m$, larger than that prepared by the w/o emulsion method $(about\;2{\mu}m)$, and the loading efficiency was also higher with spray method. Furthermore, drying process for the microspheres prepared by the spray was simpler and easier, compared with the w/o emulsion preparation. Therefore, the spray method was chosen to prepare alginate microspheres for further experiments. Release pattern of FITC-BSA in alginate microspheres was evaluated in simulated intestinal fluid and PBS (phosphate buffered saline). Dissolution rate of FITC-BSA from alginate/chitosan microsphere was lower than that from alginate microsphere and alginate/poly-L-lysine microsphere. By confocal laser scanning microscope, it was revealed that alginate/FITC-poly-L-lysine microspheres were present in close apposition epithelium of the Peyer's patches of rabbits following inoculation into lumen of intestine, which proved that microspheres could be taken up by Peyer's patch. In conclusion, it is suggested that alginate microsphere prepared by spray method, showing a particle size of & $10\;{\mu}m$ and a high loading efficiency, can be used as a model drug for the development of oral vaccine delivery system.
Benzo[a]pyrene (BP)으로 유발한 mouse의 전위암 형성에 대한 astaxanthin 함유 난황 (astaxanthin-containing egg yolk : AEY)의 영향을 연구하였다. Female ICR mouse (6-7 주령, 5 mice/cage, 20 mice/treatment)에게 물과 사료를 자유로이 공급하면서 일주일간 적응시킨 후 다음과 같이 처리를 하였다. BP (2 mg/0.2 ml corn oil)를 각 mouse에 경구투여하기 4 일과 2 일 전에 50 mg AEY, 100 mg AEY, 150 mg AEY, 또는 150 mg control egg yolk (CEY)을 함유하는 phosphate-buffered saline (PBS) 0.2 ml를 경구투여하였다. Control mouse는 0.2 ml PBS와 BP 만 경구투여하였다. 이 과정을 4회 반복하였다. BP를 경구투여 한 일주일 후부터 몸무게와 사료섭취량을 매주 기록하였으며 24주 후에 생존한 모든 mouse에 대해 전위암 생성을 조사하였다. AEY를 처리한 mouse에서는 control mouse나 CEY 처리 mouse에 비해 mouse 당 암의 수가 1/3 정도로 감소되었다. 이와 같은 AEY의 항암효과는 AEY의 처리량에 비례하였다. AEY 처리에 따른 암발생율은 control이나 CEY 처리에 비해 감소되었으나 150 mg AEY 처리에서만 유의성이 있는 감소를 보였다. AEY 처리에 따른 몸무게나 사료 소비량의 감소현상은 볼 수 없었다. 따라서 이 결과는 AEY가 BP로 유발한 mouse의 전위암 발생을 억제함을 암시한다.
The safety and immunogenicity of an attenuated recombinant Salmonella vaccine strain, Salmonella enterica serovar Typhimurium llaB, was assessed. This vaccine strain could survive in low pH condition, and its ability of intracellular survival did not differ from that of S. enterica serovar Typhimurium UK1, which is the wild-type of the vaccine strain. The mortality of the mice orally administered with the vaccine strain was $50\%$ at the dose of $10^7$ CFU. All mice administered with $10^5\;or\;10^3$ CFU of the vaccine strain survived for 3 days postinoculation (pi). However, all mice administered with more than $10^3$ CFU of the vaccine strain died within 3 days pi. To examine the protective effect of the vaccine strain, mice were orally immunized with $10^4\;and\;10^6$ CFU of the bacteria. Control mice were given with 0.5 ml of phosphate buffered saline (PBS). After 8 days, the mice were challenged with $10^9$ CFU of S. enterica serovar Typhimurium UK1, and mortality was examined for 5 days. The survival rates of the mice immunized with $10^4\;and\;10^6$ CFU of the vaccine strain were $60\%\;and\;80\%$, respectively, whereas all control mice died within 2 days after challenging. To investigate the immunogenicity of S. enterica serovar Typhimurium llaB, mice were orally immunized with $10^5\;or\;10^6$ CFU ml of the vaccine strain. Five mice of each group were sacrificed at 5 and 12 days after immunization, and results showed that immunization of the vaccine strain led to increases of IgG1, IgG2, and IgM titers against S. enterica serovar Typhimurium UK1 in mouse sera, cytokine expressions such as IL-2, IL-4, IL-6, and IL-10 in spleen, and the lymphocyte proliferation response to mitogens (concanavalin A or LPS) stimulation.
Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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제40권1호
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pp.3-10
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2014
Objectives: Although nerve growth factor (NGF) could promote the functional regeneration of an injured peripheral nerve, it is very difficult for NGF to sustain the therapeutic dose in the defect due to its short half-life. In this study, we loaded the NGF-bound heparin-conjugated fibrin (HCF) gel in the NGF-delivering implants and analyzed the time-dependent release of NGF and its bioactivity to evaluate the clinical effectiveness. Materials and Methods: NGF solution was made of 1.0 mg of NGF and 1.0 mL of phosphate buffered saline (PBS). Experimental group A consisted of three implants, in which $0.25{\mu}L$ of NGF solution, $0.75{\mu}L$ of HCF, $1.0{\mu}L$ of fibrinogen and $2.0{\mu}L$ of thrombin was injected via apex hole with micropipette and gelated, were put into the centrifuge tube. Three implants of experimental group B were prepared with the mixture of $0.5{\mu}L$ of NGF solution, $0.5{\mu}L$ HCF, $1.0{\mu}L$ of fibrinogen and $2.0{\mu}L$ of thrombin. These six centrifuge tubes were filled with 1.0 mL of PBS and stirred in the water-filled beaker at 50 rpm. At 1, 3, 5, 7, 10, and 14 days, 1.0 mL of solution in each tubes was collected and preserved at $-20^{\circ}C$ with adding same amount of fresh PBS. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was done to determine in vitro release profile of NGF and its bioactivity was evaluated with neural differentiation of pheochromocytoma (PC12) cells. Results: The average concentration of released NGF in the group A and B increased for the first 5 days and then gradually decreased. Almost all of NGF was released during 10 days. Released NGF from two groups could promote neural differentiation and neurite outgrowth of PC12 cells and these bioactivity was maintained over 14 days. Conclusion: Controlled release system using NGF-HCF gel via NGF-delivering implant could be an another vehicle of delivering NGF to promote the nerve regeneration of dental implant related nerve damage.
Tetracycline is known to be effective in eliminating periodontopathogens and have collagenolytic activity. This study was performed to observe the desorption kinetics and structural changes of tetracycline-treated barrier membranes for guided tissue regeneration. Four kinds of barrier membranes were tested : $Tefgen^{(R)}$(American Custom Medical, USA) and $Gore-Tex^{(R)}$(W.L. Gore & Associates Inc., USA) as nonresorbable membranes ; Resolut(polyglycolide & polylactide copolymer, W.L. Gore & Associates Inc., USA) and $Biomend^{(R)}$(collagen, Collatec Co., USA) as resorbable membranes. The membranes were cut into discs(diameter : 4mm) and were immersed in 5% tridodecylmethylammonium chloride(TIMAC) ethanol and air-dried. The membrane discs were absorbed with $100{\mu}g/ml tetracycline solution(pH8) for one minute and dried. For desorption kinetics, TC treated discs were immersed in phosphate buffered saline solution (PBS, pH 7.4). PBS was exchanged daily and TC concentration was measured by absorbance at 276nm on UV spectrophotometer. To measure remaining antibacterial activity, discs of 1 day to 4 weeks after desorption were placed on Mueller Hinton agar containing Bacillus cereus and incubated aerobically in $37^{\circ}C$ for twelve hours and the inhibition diameters were measured. To observe the structural change of membranes after TIMAC treatment or immersion in PBS, the membrane discs were examined under SEM. The results were as follows : 1. Total amounts of TC absorbed into membrane discs($0.7536mm^2$) were $2000{\mu}g$, $1800{\mu}g$, $2625{\mu}g$ and $2499{\mu}g$ for $Tefgen^{(R)}$, $Gore-Tex^{(R)}$, $Biomend^{(R)}$ and $Resolut^{(R)}$. 2. The concentration of TC released from barrier membrane discs was maintained over $4{\mu}g/ml$ until the fifth day in nonresorbable membranes and $Resolut^{(R)}$, but until the fourth day in $Biomend^{(R)}$, Until the ninth day in nonresorbable membranes and until the seventh day in resorbable membranes, the TC concentration was maintained over $1{mu}g/ml$. 3. The four membrane discs in the first day showed similar size of inhibition zone. One to four weeks later, the inhibition zone was much smaller in resorbable membrane discs than nonresorbable membrane discs. 4. Any structural change due to treatment of TIMAC was not observed on the nonresorbable membranes. $Resolut^{(R)}$ did not show any structural change except fibrillar loosening during immersion period, but Biomend showed destruction of membrane structure from the first week of immersion. This study indicates that tetracycline treated barrier membranes lead to the sustained release of tetracycline for over 7 days. This slow release pattern of tetracycline may contribute to the favorable clinical outcome of guided tissue regeneration.
Endosulfan은 높은 잔류성과 소수성을 가진 유기염소계 잔류성 농약이다. 이 연구는 십자화과 식물에 다량 함유되어 있고 심혈관계질환의 예방에 효과가 있는 것으로 알려진 인돌을 이용하여 소장에서 endosufan의 흡수에 미치는 영향을 조사하였다. 흰쥐를 이용해서 37 kBq의 $^{14}C$-endosulfan이 함유된 지질유화액을 시간당 3 mL씩 8시간 동안 지속적으로 공급받은 동물군을 대조군으로 하였고, 인돌이 함유된 지질유화액을 같은 조건에서 공급받은 동물군을 실험군으로 하여 8시간 동안 흡수율을 측정하였다. 림프순환계로 흡수된 대조군의 $^{14}C$-endosulfan 양에 비해 인돌을 공급받은 실험군의 $^{14}C$-endosulfan의 양이 유의적으로 감소되었다. 이와 유사하게 콜레스테롤의 흡수도 인돌에 의해서 유의적으로 감소되는 경향을 보였다. 또한, 8시간 동안 흡수되지 않고 장벽에 잔류하는 $^{14}C$-endosulfan 양이 인돌을 공급받은 실험군에서 유의적으로 증가되는 것으로 나타났다. 이러한 림프순환계로의 endosulfan 흡수 감소현상은 인돌공급에 의해 소장의 점막에 잔류하는 endosulfan의 양이 증가되었기 때문인 것으로 판단된다. 이상의 실험결과들을 종합해 볼 때, 십자화과 식물에 존재하는 인돌 성분의 섭취가 대표적인 잔류성 농약인 endosulfan의 소장에서의 흡수를 감소시켜 체내 잔류 저감화에 효과적으로 영향을 미치는 것을 이 실험을 통해서 확인할 수 있었다.
고지혈증은 체내 지질대사에 이상이 생겨 혈중의 지질이 비정상적으로 높아진 상태로서, 지질이 필요 이상으로 혈액내 존재하게 되면 혈관벽에 쌓이고 굳어지게 되면서 동맥경화증, 고혈압, 뇌졸중 등의 심혈관계 질환을 일으키기도 한다. 본 연구에서는 고콜레스테롤 식이로 고지혈증을 유도한 생쥐의 동물모델에서 복분자 추출물의 유효성분인 protocatechuic acid(PCA)를 경구 투여하여 PCA의 간손상 보호 효과와 지질 대사함량 변화를 분석함으로써 PCA의 고지혈증 치료에 대한 유의적인 임상 효과를 제시하였다. PCA의 투여는 고콜레스테롤 식이에 의한 간무게 증가, 비장무게의 증가, 흉선의 위축, 신장의 위축 등 장기무게변화에 대하여 회복 효과를 보였고, 혈청 내 간세포 손상 마커 GPT 및 GOT의 회복 효과를 나타내었으며, 혈청 내 총콜레스테롤, 중성지방, HDL, LDL의 지질대사산물의 profile에서도 유의적인 회복효과를 보였다. 특히, PCA의 투여군에서는 혈중 HDL의 농도를 정상식이군 수준으로 높이고, LDL의 농도를 크게 낮추는 효과를 나타냄으로써 HDL/LDL의 균형유지에 역할을 나타내는 것으로 보이며 이러한 효과는 simvastatin의 HDL/LDL 조절 효과와는 다른 패턴을 보이고 있다. 따라서 PCA는 단독으로 고지혈증 치료의 기능성 소재로써의 개발 가능성뿐만 아니라, 합성의약품 simvastatin 등의 스타틴계 약물의 보조제로써의 개발 가능성을 제시한다.
Bartonella henselae 는 고양이할큄병의 원인체이다. 고양이가 Bartonella spp.의 주된 보유숙주이기는 하지만, 최근 애완견의 할큄에 의한 고양이할큄병 발생이 보고되었다. 8두의 개에 1 ml의 인산완충식염수에 부유한 $2{\times}10^8CFU$의 B. henselae Houston-1을 0일에 피내주사하고, 동량을 21, 28, 36, 58, 64일째에 추가로 피내주사 하였다. B. henselae 감염을 nested PCR을 통해 확인하였다. B. henselae-PCR 양성군이 음성군에 비해 B. henselae로 말초혈액단 핵구를 자극한 후 얻은 배양상청액에서의 IFN-$\gamma$ 농도가 유의성 있게 높았다. B. henselae자극시, Th1활성을 보이는 개 말초혈액단핵구의 면역양상은 Th2활성을 보인다고 알려진 고양이와는 다른 것으로 보인다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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