• 미생물학회지
• /
• 제38권4호
• /
• pp.318-321
• /
• 2002

토양 등의 인 제한환경에서 특이적으로 발현하는 벡터를 구축하기 위해서 Enterobacter areogenes의 phoA 유전자의 promoter가 든 pEAAP를 구축하였다. pEAAP는 pET-22b(+)을 BglII와 XbaI으로 절단하여 T7 promoter와 lac operator를 제거하고pho box가 포함된 phoA promoter를 삽입하여 구축하였다. pEAAP가 인 제한 환경에서 특이적으로 발현되는지 조사하고자 Bacillus subtillis var. amyloliquefaciens (KCTC 8913P)의 Phytase유전자인 Bsa-phy1을 도입한 pEAPHY1을 구축하였다. CK-PHY1 (pEAPHY1을 도입한Escherichia coli JM109)는 인 제한 환경에서 41 kD)의 Bsa-Phy1을 발현하였다. 또한, CK-PHY1은 phytate를 유일한 인산원으로 첨가된 고체배지에서 phytate를 분해하여 투명대를 형성하였다.

• 미생물학회지
• /
• 제46권2호
• /
• pp.113-121
• /
• 2010

인산 결핍기에 직면한 Bacillus subtilis는 PhoP-PhoR twocomponent system (TCS)를 통해 이러한 상황을 인식하고 생존을 유지하기 위해 Pho regulon으로 불리는 일련의 유전자들의 발현을 조절한다. 이때 histidine kinase인 PhoR은 자동 인산화되어, 인산을 response regulator인 PhoP에 전달한다. 인산화된 PhoP (PhoP~P)는 Pho regulon 유전자의 프로모터(promoter) 부위에 존재하는 반복되는 6 bp의 잘 보존된 PhoP 결합서열에 결합하여 해당 유전자의 발현을 활성화시키거나 억제한다. 이러한 Pho regulon 신호전달 시스템은 최소한 세 개의 TCS (PhoP-PhoR, ResD-ResE TCS, SpoOA phosphorelay), 광범위한 탄소대사 조절자(CcpA), 전위기 조절자(AbrB, ScoC) 등을 포함하는 신호전달 시스템과 밀접하게 상호 연결되어 있을 뿐만 아니라, 생육에 필수적인 YycF-YycG TCS와 상호조절을 통한 밀접한 관련을 가지고 있다. Pho regulon에 의한 인산결핍 스트레스 반응을 이해하는데 많은 진척이 있었으나, 많은 의문들은 여전히 남아있다. 이러한 의문들을 푸는 일은 B.subtilis의 응용연구에 중요한 정보를 제공할 것이다.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
• /
• 제10권2호
• /
• pp.149-154
• /
• 2005

Secretion of the expressed heterologous proteins can reduce the stress to the host cells and is beneficial to their recovery and purification. In this study, fed-batch cultures of Escherichia coli YK537 (pAET-8) were conducted in a 5-L fermentor for the secretory production of human epidermal growth factor (hEGF) whose expression was under the control of alkaline phosphatase promoter. The effects of feeding of glucose and complex nitrogen sources on hEGF production were investigated. When the fed-batch culture was conducted in a chemically de-fined medium, the cell density was 9.68 g/L and the secreted hEGF was 44.7 mg/L in a period of 60 h. When a complex medium was used and glucose was added in pH-stat mode, the secreted hEGF was improved to 345 mg/L. When the culture was fed with glucose at a constant specific rate of $0.25\;gg^{-1}h^{-1}$, hEGF reached 514 mg/L. The effects of adding a solution containing yeast extract and tryptone were further studied. Different rate of the nitrogen source feeding resulted in different levels of phosphate and acetic acid formation, thus affected hEGF expression. At the optimal feeding rate, hEGF production achieved 686 mg/L.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제21권3호
• /
• pp.214-220
• /
• 1993

The mating type a of yeast, Saccharomyces cerevisiae mutant with hmla2-102 and sir3-8ts was changed to type alpha by changing the growth temperature from 25C to 35C. A temperature-sensitive expression vector system was constructed using mating factor alpha1 (Mfalpha1) gene encoding alpha factor which is expressed in the type alpha cells. Vectors with different copy numbers were constructed by joining the promoter and pre or prepro-secretion single sequence of Mfalpha1 to promoterless PHO5' gene as a reporter gene.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제19권6호
• /
• pp.568-574
• /
• 1991

효모에서 대랑의 물질생산계를 구축하기 위하여 먼저 여러 종류의 베터의 이용이 가능한 다양한 영양요구성 marker를 지니며 형질전환율이 향상된 효모숙주를 선별 개량하였다. 벡터의 제작에 사용되는 프로모터로는, 효모의 여러 유전자 중에서 그 활성이 매우 높은 해당계의 효소 GAP-DH의 구조 유전자 GAP를 이용하기로 하여, 효모염색체 DNA중에서 GAP 프로모터를 분리하여 이용하기 쉽게 변형하였다. 분리된 GAT promoter의 기능을 검토하기 위하여, reporter로 APase의 구조유전자 PHO5'를 이용하여 세포내의 copy수가 상이한 발현 벡터를 제작하여 GAP 프로모터에 의한 APase의 활성 및 전사산물을 측정한 결과, 정상적인 전사가 이루어 졌으며, 효소활성도 높게 나타났으며, 벡터의 copy수에 의한 효소활성의 차이도 감지되었다.

• 한국동물학회:학술대회논문집
• /
• 한국동물학회 1999년도 한국생물과학협회 학술발표대회
• /
• pp.265.1-265
• /
• 1999

No Abstract, See Full Text

• 생명과학회지
• /
• 제19권5호
• /
• pp.566-572
• /
• 2009

S. marcescens KCTC 2172로부터 유전자 은행을 작성하여 재조합 클론 pDH3를 얻었으며, pDH3 유래의 서브클론을 작성하였다. 플라스미드 pPH4의 전염기서열 5,137 bp 영역을 결정한 결과 3개의 ORF가 있음을 확인하였다. 이들은 pst 오페론의 pstC, pstA, 및 pstB, 세 유전자를 동일 전사방향으로 코드하고 있었다. 타 세균의 유전자와 비교한 결과 S. marcescens의 pst 오페론은 pstS와 phoU가 결손되어 있다. 조절영역에는 CRP 결합영역과 pho box 서열이 존재하였다. 보고된 유전자와 상동성 조사결과, PstC 단백질은 Yersinia sp., Vibrio sp. 및 Pseudomonas sp.와는 49, 37, 33%의 상동성을, PstA 단백질은 Yersinia sp., Vibrio sp. 및 Pseudomonas sp.와 64, 51, 47%의 상동성을, PstB 단백질은 Methanocaldococcus sp., E. coli 및 Mycoplasma sp.와 60, 50, 48%의 상동성을 나타내었다. Pst 유전자들은 조절영역의 cAMP-CRP 복합체에 의해 in vivo에서 양성적으로 발현됨을 확인하였다. Pst 오페론을 포함하는 플라스미드를 도입한 대장균은 인산운송에 관여하는 능력을 확인하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제19권1호
• /
• pp.37-44
• /
• 1991

진핵세포 유전자의 기초대사발현의 조절계를 밝히기 위한 일환으로, 효모의 histidine생합성계 효소의 구조유전자 HIS5를 이용하였다. HIS5 유전자는 충분한 아미노산 조건하에서는 발현이 억제되어 비교적 높은 기초발현만을 하나, 어떤 아미노산이 결핍되면 탈억제되어 높은 발현량을 보이며 탈억제는 cis의 작용인자인 promoter상의 5'-TGACTC-3' 및 trans 작용인자 GCN4와 GCD17 GCN2등이 관여한다. trans 작용인자들에 의한 HIS5 유전자의 발현량의 변화를 간단하게 측정하기 위하여, HIS5 promoter와 repressible acid phoshates(APase)의 구조유전자중 promoter를 제거한 DNA단편을 연결시켜 HIS5-PHO5 융합유전자를 이용하였다. gcn2 및 gcn4 변이주의 APase 활성은 야생주와 비교하여 3내지 4배 낮았으며, gcn2변이주와 gcn2 gcn4 이중변이주의 APase 활성은 유사하였다.

• 한국초지조사료학회지
• /
• 제17권3호
• /
• pp.285-292
• /
• 1997

This study was conducted to obtain the transgenic Brnssica napus plants with tobacco Apase gene using the binary vector system of Agrobacteriurn fumefociens. The results obtained were summarized as follows: A repressible acid phosphatase gene of Saccharon~yces cerevisiae, pho105 was used for screening of tobacco Apase cDNA. In order to identify Apase gene in tobacco genome, Southern blot analysis was pcrformed and the Apase gcnc may be present as a single copy, or at most two or three copies, in tobacco genome. To isolate the tobacco Apase gene, tobacco cDNA library was constructed using purifed mRNA from -Pi treated tobacco root and the plaque forming unit of the library was 2.8 x $10^5$ pfu/m${\ell}$, therefore the library might cover all expressed mRNAs. Using pho5 as a probe. tobacco Apase cDNA was cloned, and restriction mapping and Southern blot analysis of cDNA insert were revealed that the 3.6 kb cDNA contained tobacco acid phosphatase cDNA. Plasmid pGA695 -tcAPl was constructed by subcloning tobacco Apase cDNA into the Hind site of pGA695 with 35s promoter which can be expressed constitutively in plants. The Brassica napus cotyledonary petioles were cocultivated with the ,4 grobacteriunz and transferred to the selection medium. The transformed and regenerated plants were transplanted to soil medium. Southern blot analysis was done on the transformed plants, and it was confirmed that a foregin gene was stably integrated into the genonies of B. nnpus plants.