들깨는 우리나라에서 재배되어온 대표적인 유지작물로 지질의 함량 중 알파리놀렌산의 함량이 60% 전후로 불포화도가 높아서 산패가 쉽게 일어나는 문제가 있다. 알파리놀렌산은 소포체 유래의 ${\Delta}15$ desaturase (FAD3)와 엽록체 유래의 ${\Delta}15$ desaturase (FAD7)에 의해서 합성된다. 엽록체 유래의 FAD7 유전자 발현의 손상없이 종자의 알파리놀렌산 함량을 낮추기 위해 소포체 유래 FAD3 유전자를 RNAi기법을 이용하여 발현을 억제하였다. 재배종인 엽실들깨의 배축을 이용하여 아그로박테리움 매개 형질전환법으로 제초제(바스타) 저항성을 가진 형질전환체 17개체를 획득하였다. 형질전환체는 0.3% (v/v) 바스타제초제를 이용하여 선발하였으며 Northern blot으로 FAD3 유전자의 발현이 억제되는 것을 확인하였다. 온실에서 수확한 12개체 종자 지방산 함량을 분석한 결과 알파리놀렌산 함량이 10-20% 2개체, 30-40% 7개체, 대조구와 비슷한 60%대 3개체를 획득하였다. 형질전환체의 $T_2$ 종자의 분리비와 지방산 조성을 분석한 결과 동형접합체 계통에서 6-10% 알파리놀렌산 함량을 보였으며 이형접합계통은 20-26% 알파리놀렌산 함량을 나타내어 동형으로 고정시 FAD3 유전자 발현이 상당히 강력히 억제됨을 확인할 수 있었다. 들기름의 지방산 중 알파리놀렌산 함량의 감소는 들깨의 산패를 방지하고 감마리놀렌산 등의 고가의 건강기능성 지방산 생산에 활용할 수 있을 것으로 기대된다.
Taurine content in Korean foods of plant origin was determined for 118 commonly used food items including cereals, potatoes, pulses, nuts, seeds, vegetables and fruits. Taurine concentration in food sample was analyzed using an automated amino acid analyzer(Biochrom 20, Pharmacia LKB) based on ion-exchange chromatography. Taurine was frequently detected in plant kingdom in much lower concentrations(1/100~1/1000) than those found in marine lifes and mammals. Glutinous rice, glutinous millent and sorghum did not contain taurine, while 0.7~3.9mg taurine/100g dry wt were detected in rice, barley and their products. Potatoes and sweet potatoes contained 0.3~1.2mg taurine/100g wet wt, and seasame seeds, perilla seeds, almonds, walnuts and gigko nuts contained 0.7~3.0mg taurine/100g wt. Taurine concentration was undetectable in most of the pulses, and in a large number of vegetables. Garlic bulbs, eggplants, green peppers, lotus roots, and cabbages have a relatively high level of taurine(around 1mg taurine/100g wet wt) among vegetables. Taurine was absent or found in very low levels(<1mg taurine/100g wet wt) in most of the commonly used fruits.
녹두, 대두, 참깨 및 들깨를 상온에서의 침지 및 발아 그리고 $60^{\circ}C$에서 incubation 및 $120^{\circ}C$에서 autoclaving시켰을 때 이들의 처리가 phosphorus와 phytic acid의 함량에 미치는 영향을 조사하였다. Total P는 24시간의 침지와 incubation에서 약간 감소하였고, $5{\sim}6$일간의 발아에서는 녹두와 대두에서 약간의 증가를 보이었으나 전체적으로 큰 변화는 없었다. Inorganic P는 24시간의 침지후에 전시료에서 그함량이 증가함을 보여주었고, 발아기간이 경과함에 따라 급속히 증가하였다. 10시간의 incubation에서 참깨와 들깨 inorganic P는 증가되었으나 두류에서는 별다른 변화가 없었고, 4시간의 autoclaving으로는 두류에서 $244{\sim}285%$정도 증가되었으나 깨종실에서는 별다른 변화가 없었다. Phytic acid는 침지시 녹두에서 25%로 가장 많이 감소되었고 둘째는 7%로 가장 적게 감소되었다. 이들 종실의 발아시는 $5{\sim}6$일 후에 녹두의 phytic acid는 92%, 대두는 76% 그리고 참깨는 78%나 크게 감소되었고, incubation시는 녹두와 대두에서 각각 83%와 61% 감소되었고, autoclaving시에도 대두에서 68%, 깨에서 17%까지 감소되었다.
들깨 4품종을 4월 25일부터 30일 간격으로 7월 25일까지 4차에 걸쳐서 파종하여 각 파종기에 따른 생태변이를 조사하였다. 파종기가 늦어짐에 따라 초장, 1차분지수 착화방수, 생체중, 건물중, 발아요소일수 및 개화소요일수가 감소되는 경향을 보임으로서 파종기와 이들 형질간에 높은 부의상관 및 개화소요일수와 소요적산온도 사이에는 높은 정의상관관계를 보였다. 저온, 장일조건하에 조기파종하면 영양생장이 길어서 개화기까지 약 132일이 소요되고, 그 후 파종은 점차로 단축되어 불과 57일만에 개화를 볼 수 있다. 파종기에 따른 종실수량은 품종에 따라 다르다. 즉 A형(논산종)과 B형(진천종)은 조기파 종할수록 수량이 많았고, C형(남양종과 울진종)은 5월 25일 파종구가 가장 많았다. 1000립종은 파종기가 늦을수록 무거워 지는 경향이었다. 이상의 결과로 보아, 들깨는 단일성작물로서 파종기 여하를 막론하고 9월상$\~$중순까지 개화함으로 품종에 따라 충분한 영양생장기간을 고려하여 파종하여야 한다.
A computer vision system to measure low flow rate of solid particles was developed and tested to examine its performance with various sized 7 kinds of seeds, perilla, mung bean, paddy, small red bean, black soybean, Cuba bean and small potato tuber. The test was performed for two types of particle flow, continuous and discontinuous. For the continuous flow tested with perilla, mung bean and paddy, the tests resulted correlation coefficients for the flow rates measured by the computer vision and direct method about 0.98. Average errors of the computer vision measurement were in a range of 6∼9%. For the discontinuous flow tested with small red bean, black soybean, Cuba bean and small potato tuber, the tests resulted correlation coefficients for the flow rates measured by the computer vision and direct method 0.98∼0.99. Average errors of the computer vision measurement were in a range of 5∼10%. Performance of the computer vision system was compared with that of the conventional optical sensor to count particles in discontinuous flow. The comparison was done with black soybean, Cuba bean and small potato tuber, and resulted that the computer vision has much better performance than the optical sensor in a sense of precision of the measurement.
들깨(Perilla frutescens var. japonica HARA)는 대표적인 유지작물 중 하나로서, 목적에 따라 잎들깨와 종실들깨로 구분된다. 들깨는 식용과 약용으로 사용되어 왔으며, 들깨의 잎, 줄기, 종자에는 다양한 기능성 성분이 많이 함유되어 있다고 알려져 있다. 본 연구는 들깨를 기능성 소재로서 이용하고자 최적의 수확시기 및 조건을 분석하기 위해 새싹들깨와 잎들깨의 생육단계별 및 부위별로 들깨의 주요 기능성 화합물인 rosmarinic acid, caffeic acid, luteolin, GABA의 함량 비교하였다. 새싹들깨의 기능성 화합물 분석 결과 자연광 조건하의 흙에서 재배한 새싹들깨가 rosmarinic acid 23.19±0.16 mg/g과 GABA 0.55±0.05 mg/g으로 높은 함량을 보였고, 파종 후 6~8일 시기에 rosmarinic acid, caffeic acid, GABA의 함량이 가장 높게 나타났다. 따라서 자연광 조건하의 흙에서 파종 후 6~8일이 새싹들깨의 최적의 수확조건으로 판단된다. 생육단계별 및 부위별로 잎들깨의 기능성 화합물 변화 분석결과 caffeic acid와 rosmarinic acid는 영양생장에서 생식생장으로 넘어가는 단계에 0.28±0.03~0.30±0.07 mg/g과 20.60±7.02~19.37±3.18 mg/g으로 함량이 가장 높았으며, luteolin은 생식생장단계에 31.11±2.98~22.35±1.64 ㎍/g으로 함량이 가장 높았다. GABA는 영양생장 초기단계에서 0.42±0.09~0.37±0.04 mg/g으로 가장 높은 함량을 보였다. 부위별 분석 결과 잎, 줄기, 추대 부위 중 추대부위가 rosmarinic acid (55.22±9.33 mg/g), caffeic acid (0.39±0.03 mg/g), luteolin (1044.89±6.72 ㎍/g)으로 함량이 가장 높게 나타났다. 종합적으로 새싹들깨와 잎들깨에서 기능성 화합물이 가장 증가하는 시기를 확인함으로써 적합한 수확시기 및 부위를 확인하였다. 본 연구는 기능성 소재로서 들깨를 이용하기 위해 새싹들깨와 잎들깨의 적합한 수확시기 및 조건을 제시하였다.
본 연구에서는 6종류의 종실에서 기름을 착유하여 조지방 함량(crude fat content) 측정 및 총 지방산 조성과 위치별 지방산 조성을 비교 분석 하였으며, triacylglycerol(TAG)의 조성과 tocopherol 함량을 분석하였다. Folch법을 이용하여 분석된 조지방 함량은 들깨 21.64%, 홍화씨 13.85%, 고추씨 9.60%, 석류씨 8.85%, 녹두 2.25%, 결명자 2.00%로 나타났다. 추출된 종실유의 지방산 분석결과 불포화 지방산인 linoleic acid(C18:2)가 81.57 wt%~46.17 wt%로 가장 높은 비중을 차지하였으며, sn-2 위치의 지방산 조성에서도 linoleic acid의 함량이 88.30 wt%~15.99 wt%로 높은 함량을 나타내었다. Triacylglycerol(TAG)의 조성은 reversed-phase HPLC를 이용하여 분석하였으며 partition number(PN)=36~48의 분포를 보였다. Total tocopherol의 함량은 석류씨에서 가장 높은 377.74 mg /100 g으로 나타났으며 이 외에 각각 녹두(141.16 mg/100 g), 결명자(107.23 mg/100 g), 고추씨(33.88 mg/100 g), 들깨(30.05 mg/100 g), 홍화씨(29.80 mg/100 g) 순으로 측정되었다.
${\gamma}-Tocopherol$ methyltransferase(TMT)는 토코페롤 생합성 대사의 마지막 단계인 감마 토코페롤을 알파 토코페롤로 변환하는데 관여하는 효소이다. 들깨의 미성숙 종자 cDNA유전자 은행에서 TMT로 추정되는 유전자를 분리하였으며 이 유전자는 1369개의 염기와 367개의 아미노산으로 구성되었으며 분자량은 약 42kDa의 추정된다. 이 cDNA는 Genbank와 상동성 분석결과 애기장대의 TMT유전자와 아미노산 수준에서 60% 정도의 상동성을 가지고 있으며 methyltransferase domain과 S-adenosyl methionine binding domain을 가지고 있으므로 TMT 유전자로 추정했다. 이 유전자의 특성을 알기 위하여 완전한 크기를 가지는 TMT유전자를 대장균에서 발현하고 invitro에서 효소의 활성을 측정하였다.
본 연구에서는 초임계 이산화탄소 추출을 이용해 도라지(Platycodon grandiflorum A. DC) 종자로부터 유지를 제조하여 새로운 식용유지로서의 물리화학적 특성을 조사하였다. Soxhlet 용매 추출에 비해 6,000 psi 압력 및 $40^{\circ}C$ 온도조건에서의 초임계 이산화탄소 추출로 더 많은 유지를 얻을 수 있었고 특히 볶은 종자로부터는 32.7%까지 얻을 수 있었다. 볶은 종자로부터 얻은 초임계 도라지 종자유는 시판 대두유나 들깨유와 마찬가지로 대부분 중성지질로 구성되어 있음을 TLC 분석으로 확인하였다. 또한 이 유지는 고도로 불포화된 지질로 대두유나 들깨유보다 linoleic acid(73.27%) 함량이 훨씬 높았으며 그 다음으로 oleic acid(13.16%) 함량이 높았다. 유지의 물리화학적 특성으로, 비중 0.92, 점도 45.37 cP, 굴절률 1.48, 색도 L=47.30, a=-3.69, b=25.72, 요오드가 141.57 g $I_2/100g$ oil, 비누화가 191.21 mg KOH/g oil, 산가는 2.60 mg KOH/g oil 였다. 이런 특성들 중에서 지질의 불포화도와 관련이 있는 굴절률, 점도 및 요오드가는 두 시판 유지들의 중간값을 나타내었다. Rancimat 법으로 측정한 산화유도기간을 비교한 결과에서도 초임계 추출 도라지 종자유(2.03 hr)는 대두유(2.94 hr)보다는 낮으나 들깨유(1.79 hr)보다는 높은 중간값을 나타내었다. 종자 볶음 공정은 유지의 추출 수율을 증가시킬뿐만 아니라 콜레스테롤에스터 함량과 산가 감소에 긍정적 효과도 있었다. 이상으로부터, 초임계 이산화탄소 추출을 통해 볶은 도라지종자로부터 높은 수율로 유지를 제조할 수 있었고 이 유지는 식용유지로서 적합한 특성을 가진다고 판단되었다.
선발마커로 두 종류의 항생제 (hpt와 nptII)와 제초제(bar) 유전자를 사용하여 아그로박테리움을 이용한 수정된 들깨 형질전환방법을 개발하였다. 들깨 배축 절편을 pMOG6-Bar 운반체 혹은 pCK-Bar 운반체를 가진 아그로박테리움 EHA 105와 각각 3일간 공동배양 하였다. 1차로 형성된 신초는 하이그로마이신(15mg/L)이나 카나마이신(125 mg/L)을 사용하여 선발하였고 재분화 된 신초들은 확실한 형질전환체를 얻기 위해서 포스피노트리신(1.2 mg/L)에서 한번 더 선발하였다. 뿌리는 호르몬이 없는 MS배지에서 재분화 신초로 부터 유도하였으며 80개의 재분화개체를 획득하였다. 들깨 지놈으로 형질전환유전자의 삽입은 서던 블럿으로 확인하였고 유전자의 발현은 노던 블럿으로 분석하였다. To 식물체로부터 유도된 T1들깨 종자들은 후대로의 안정된 유전자 전이를 확인하기 위하여 0.3% 바스타 제초제 살포로 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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