To evaluate the diagnostic significance of p16 overexpression in human hepatocellular carcinoma (HCC), we analyzed p16 status and growth inhibitory patterns by p16 overexpression in HCC cell lines having different pRE status. SKHep1 and SNU449 cells show homozygous deletion of p16. The p16 gene in SNU398 cell is inactivated at posttranscription level. Adenovira1-p16 (Ad-p16) infection inhibits the cell growth in Hep3B, SNU398, and SNU449. Failure of growth inhibition in SKHepl results from the low transduction efficiency of adenovirus. The p16-mediated growth inhibition shows G 1 phase arrest in pRE-positive SNU449 but not in pRE-negative Hep3B. These results suggest that therapeutic efficacy of p16 gene might be considered on the transduction efficiency and the toxicity of adenoviral vector. Beside, growth inhibitory effect of p16 could be exerted through either pRE-dependent or -independent pathway.
We explore the question of whether adenosine 5'-triphosphate (ATP) acts as an excitatory neurotransmitter in guinea-pig gastric smooth muscle. In an organ bath system, isometric force of the circular smooth muscle of guinea-pig gastric antrum was measured in the presence of atropine and guanethidine. Under electrical field stimulation (EFS) at high frequencies (>20 Hz), NO-mediated relaxation during EFS was followed by a strong contraction after the cessation of EFS (a 'rebound-contraction'). Exogenous ATP mimicked the rebound-contraction. A known $P_{2Y}-purinoceptor$ antagonist, reactive blue 2 (RB-2), blocked the rebound-contraction while selective desensitization of $P_{2Y}-purinoceptor$ with ${\alpha},{\beta}-MeATP$ did not affect it. ATP and 2-MeSATP induced smooth muscle contraction, which was effectively blocked by RB-2 and suramin, a nonselective $P_2-purinoceptor$ antagonist. Particularly, in the presence of RB-2, exogenous ATP and 2-MeSATP inhibited spontaneous phasic contractions, suggesting the existence of different populations of purinoceptors. Both the rebound-contraction and the agonist-induced contraction were not inhibited by indomethacin. The rank orders of agonists' potency were 2-MeSATP > ATP ${ge}$ UTP for contraction and ${\alpha},{\beta}-MeATP\;{\ge}\;{\beta},{\gamma}-MeATP$ for inhibition of the phasic contraction, that accord with the commonly accepted rank order of the classical $P_{2Y}-purinoceptor$ subtypes. Electrical activities of smooth muscles were only slightly influenced by ATP and 2-MeSATP, whereas ${\alpha},{\beta}-MeATP$ attenuated slow waves with membrane hyperpolarization. From the above results, it is suggested that ATP acts as an excitatory neurotransmitter, which mediates the rebound-contraction via $P_{2Y}-purinoceptor$ in guinea-pig gastric antrum.
김치와 사람의 분변에서 ginsenoside 전환이 높은 균주 2종을 분리하였다. 분리된 균주는 형태학적, 생화학적 특성 조사와 16S rRNA 염기서열 결정을 통한 균주 동정 결과 Lactobacillus plantarum과 Lactobacillus sakei로 밝혀졌고 이를 각각 CKDHC 0801 및 CKDHC 0802로 명명하였다. 두 균주의 홍삼배지에서의 생육도를 관찰한 결과 CKDHC 0801은 24시간에 CKDHC 0802는 48시간에 최고 성장도를 보였다. 특히 두 균주를 혼합하여 홍삼배지에 배양시 더욱 높은 성장률을 나타냄으로써 홍삼을 발효하기에 적합한 균주임을 확인하였다. 당 이용율을 살펴본 결과 CKDHC 0801이 더 높게 나타났다. pH변화 측정결과 CKDHC 0801과 두 개의 균주를 혼합 배양한 경우에는 배양 후 24시간에서 48시간사이에 5.2에서 4.2로 낮아졌으나, CKDHC 0802는 배양 후 3일후에야 pH 4.2 수준으로 낮아졌다. 이 균주들을 이용한 홍삼발효는 ginsenoside의 조성이 고분자인 Rg1, Rb1 등에서 저분자인 Rg3, Rg5+Rk1 등으로 전환되어지는 것을 확인하였다. 이를 통해서 이 두 가지의 균주를 이용한 발효홍삼은 홍삼의 효능을 증진시킬 수 있는 좋은 사용예가 될 것으로 사료된다.
퇴비화 과정 중 암모니아 휘산과 관련된 난분해성 및 이분해성 유기물의 역할을 재조명하기 위해 분뇨와 톱밥(난분해성) 또는 쌀겨(이분해성)를 혼합한 후 4주간 $CO_2$ 발생량과 $NH_3$ 휘산량을 조사하였다. 이산화탄소 발생량은 톱밥처리구에 비해 쌀겨처리구에서 43$\sim$122% 정도 높았으며, 이에 상응하게 최종 건물중 손실률도 쌀겨처리구가 35.1$\sim$41.5%로 톱밥처리구의 18.7$\sim$22.6%에 비해 유의하게(P$\sim$0.05) 높았다. 톱밥처리구에서는 시험기간인 4주간 암모니아 휘산이 발생하지 않았는데, 이는 톱밥의 C/N 비가 높아 질소무기화가 지체되었고 톱밥 자체가 $NH_4^+$를 흡착할 수 있는 능력이 있기 때문으로 판단되었다. 반면, 이분해성인 쌀겨 처리구에서는 퇴비화 초기에는 질소부동화에 의해 암모니아 휘산이 나타나지 않았지만, 8일 이후부터는 쌀겨처리량이 낮은 순서대로 이분해성 유기물의 고갈에 의한 질소재무기화에 의해 암모니아 휘산이 관측되었다. 따라서, 이분해성 유기물은 초기 암모니아 부동화를 통해 암모니아 휘산을 감소시킬 수 있지만, 부동화된 질소의 재무기화에 의해 퇴비화 중반기에 오히려 암모니아 휘산이 증가할 수 있는 것으로 나타났다. 반면, 난분해성 유기물인 톱밥은 암모니아 고정능이 있어 물리화학적 흡착에 의해 암모니아 휘산을 저감시킬 수 있는 것으로 판단되었다.
본 연구는 몽골 마유로부터 분리한 유산균 Enterococcus faecium SA5의 이화학 특성을 파악하고 유산균 E. faecium SA5의 ${\beta}$-glucosidase의 활성과 이를 통한 ginsenoside 전환을 확인하는 것을 목표로 진행되었다. E. faecium SA5는 내산성, 내담즙성을 나타내었으며 4종의 병원성 미생물(Salmonella typhimurium KCTC 3216, Listeria monocytogenes KCTC 3710, Bacillus cereus KCTC 1012, Staphylococcus aureus KCTC 1621)에 항균 활성을 가질 뿐만 아니라 항생물질 colistin, gentamycin, neomycin에 내성을 나타내었다. 또한, E. faecium SA5는 bile salt hydrolase 활성을 나타내어 혈액 내 콜레스테롤 수준 감소 효과가 있다고 사료되며 10% skim milk에서 배양하였을 때, pH가 감소하고 산도 및 생균수가 증가하는 것으로 보아 발효유 스타터로써의 활성을 갖는 것으로 판단되었다. 또한 E. faecium SA5의 ${\beta}$-glucosidase에 의해 ginsenoside $Rb_1$이 ginsenoside $Rg_3-s$와 $Rg_3-r$으로 전환되었음을 TLC 분석을 통해 확인하였다. 따라서 E. faecium SA5는 잠재적인 probiotics로 이를 이용하여 발효유 제조 및 ginsenoside 전환 관련 건강기능식품 개발에 응용할 수 있을 것으로 사료된다.
1999년 3월, 7월, 9월 및 11월에 섬진강 하구역에서 염분경사에 따른 영양염의 거동을 조사하였다. 조사 정점은 지리적 위치보다는 각 조사시마다 표층 염분을 현장에서 측정하여 결정하였다. 질산 질소와 규산 규소의 주요 공급원은 섬진강이었으며 아질산 질소와 인산 인은 섬진강 하구입구와 인접한 광양만에서 배출되는 도시하수와 공장폐수에 영향을 받고 있는 것으로 나타났다. 암모니아 질소는 난초도로부터 약 $6\~8km$ 지점에서 공급양상을 보였다. 암모니아 질소, 인산 인,규산 규소의 강한 제거 거동은 엽록소 $\alpha$ 농도가 $>8{\mu}g/L$ 이상으로 매우 높았던 11월 $5\~15psu$ 염분역에서 나타났다. 엽록소 a 최고치 지점에서 N : P 비가 높고 인산 인이 거의 제거된 것은 인산 인이 식물플랑크톤 성장의 제한 요인으로 작용하고 있다는 것을 시사해 주고 있다. 11월에 $5\~15psu$ 염분 역에서의 상대적으로 높은 Rb/Ra (Rb: Fluorescence before acidifcation, Ra: Fluorescence after acidification) 비는 식물플랑크톤이 이 지역에서 생리적으로 성장하기에 좋은 환경이었음을 의미한다.
인삼의 여러 생리 활성 가운데 항산화 정도를 알아보기 위하여 백삼(6 년근), 백삼(5 년근), 피부백삼(5 년근), 피부백삼 (4 년근) 의 80% 에탄올 엑기스, 에틸아세테이트 분획, 수포화 부탄올 분획, 물 분획을 얻은 후 LC/Mass 를 사용하여 사포닌 함량을 조사하고 기존의 여러 가지 항산화 작용 측정 방법들의 오류를 없애고 더욱 정확한 결과를 낼 수 있는 대처 방안으로 선정된 ORAC Assay에 의해 항산화 활성을 검토하였다. 인삼 중 사포닌은 ginsenoside Rg 1 과 Rb1 이 주요 성분으로 다량 함유하고 있었으며, Rc, Rb2, Re 등이 뒤를 이었고, 그밖에도 Rd, Rg3, Rh1가 널리 분포하고 있었다. 피부백삼 5 년근의 경우 에탄올 엑기스와 수포화 부탄올 분획에서 다른 인삼 분획에 비해 높은 함유량을 보였으나 실험의 한계상 인삼 재배기간과 인삼 종류별 각각의 분획에 대한 사포닌 함량 비교는 어려웠다. 인삼의 각 분획별 항산화 활성은 80% 에탄올 엑기스, 에틸아세테이트 분획, 수포화 부탄올 분획, 물 분획 모두에서 나타났고 비교적 전체 유기 용매 분획의 값이 비슷하였으며, 수층 분획이 다소 낮은 활성을 보였다. 검체 인삼들의 각 용매추출 분획 상호간의 유의성 비교에서는 모든 인삼 검체의 에틸아세테이트 분획에서만 유의성을 나타내었다(p>0.05). 인삼 중 항산화 활성은 에틸아세테이트 층으로 이행되는 폴리페놀 계통 성분이나 일부 비극성의 사포닌에 의한 것으로 추측되고 있으나 모든 분획에서 나타난 것으로 보아 이들 외에 산성 다당체, 당 단백질, 수용성 다당류 등 다른 생리활성 물질에 대한 연구가 요구된다.
The content and composition of saponin compounds of Panax species were analyzed according to their species, region and processing type of red and white ginseng. The species employed were Korean-, Chinese-, Japanese red ginsengs, and Korean white ginseng of Panax ginseng, American- and Canadian ginsengs of Panax quinquefolium, and Panax notoinseng. Twelve main saponin components in the ginseng were identified and quantified using TLC and HPLC. All three species had remarkably different content and composition. However, within each species they were similar. Twelve major ginsenosides were determined in P. ginseng, eight in p. quinquefolium, and six in P. notoginseng. Of the components of P ginseng Rf, $Rh_1$, $Rh_2$ and Ra were not detected in P quinquefolium, and $Rb_2$, Rc, Rf, $Rh_2$, Ra and Ro not detected in P. notoinseam. Crude saponin content and protopanaxadiol/protopanaxatriol saponin ratio were compared. They were 4.81~5.24% and 1.27~ 1.45 in p. ginsengs, 7.01~7.25% and 2.12~ 2.15 in p. quinquefolium, 9.80% and 0.99 in P. notoineng. The prosapogenin and sapogenin content were different among the Panax species.
가압형 마이크로웨이브 추출장치를 이용하여 추출조건(에탄올농도, 추출온도 및 추출시간)에 따른 인삼 ginsenosid서 추출특성을 반응표면분석에 의해 모니터링하고, 마이크로파 추출법의 추출효율을 확인하였다. 조건별 추출물의 ginsenoside함량에 대한 회귀식의 $R^2$는 대부분 0.830이상으로 $10\%$이내의 수준에서 유의성이 인정되었다. $Ginsenoside-Rb_2$ -Rc, -Re 및 $-Rg_1$은 추출온도가 높을수록 증가하여 $140^{\circ}C$에서 가장 높게 나타났으며, 에탄을 농도가 $50\~75\%$에서 가장 높은 추출율을 보였다. Ginsenoside의 HPLC 패턴은 MAP 추출온도 $120^{\circ}C$에서 unknown peak가 확인되었으며, $150^{\circ}C$추출에서는 unhown peak가 증가되었다. $Ginsenoside-Rb_2$와 -Re 함량에 미지화합물(unknown peak)을 포함하였을 때 는 최대의 추출온도가 $129^{\circ}C$에서 $147^{\circ}C$로 증가하였고, 동시에 추출시간과 $R^2$가 증가하였다. MAP 추출에서 unknown화합물의 함량이 최소가 되는 조건은 에탄올 농도 $67.33\%$, 추출온도 $99.34^{\circ}C$, 추출시간 3.65분이었다. 추출효율의 확인시험에서 8분간의 MAP추출법은 현행 추출법(40시간) 매우 유사한 수준의 ginsenoside 추출효율을 나타내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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