• 한국식품위생안전성학회지
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• 제18권1호
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• pp.25-29
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• 2003

리스테리아의 p60단백질은 Listeria속 고유의 단백질로써, 주요 세포외 단백질이기에, 식품에서 이 세균의 존재를 밝혀주는 중요한 지시단백질로 사용된다. 본 연구는 재조합 DNA 방법으로 재조합-p60 단백질을 대장균에서 생산하였으며, 아밀로오스 컬럼 크로마토그라피의 방법으로 정제하여, Listeria spp.의 p60에 특이적 항체를 생산하는 단일클론을 선별하였다. 생산된 항p60 항체 1H4는 병원성 Listeria 균주인 L. monocytogenes, L. ivanovii, L. weishi meri II 특이적으로 강한 항체반응을 보였으며, Listeria속의 비병원성균인 L. innocua등과는 상대적으로 매우 약한 항체반응을 보였으며, 타 세균의 단백질과는 거의 반응하지 않았다. 1H4항체는 복수생산법에 의해 대량생산되었으며, 이 항체의 특이성은 면역학적 방법에 의한 리스테리아 검출키트의 개발에 유용하게 사용될 수 있을 것이다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제17권2호
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• pp.161-170
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• 1975

This study is to investigate the content of crude protein intruded in the sericin of cocoon shell and pupa by treatment of buffer solution (pH 1 to pH 13) 20 ml per 1 gram for 30 and 60 minutes at 30$^{\circ}C$, 60$^{\circ}C$ and 100${\pm}$2$^{\circ}C$, respectively. The results obtained are summarized as follows. 1. The quantity of total crude protein obtained from cocoon shell and pupa by treatment during 30 minutes at 30$^{\circ}C$ was dissolved as the largest quantity of 11.874 mg/g at pH 1 and l5.93mg/g at pH 13, but dissolved the smallest quantity 1.75g/g at pH 5 as known. and tile quantity of crude protein treated for 60 minutes is 13.437mg/g at pH 1 and 22.50mg/g at pH 13. Also, the smallest quantity is 2. 813mg/g at pH 5 as known. 2. By the treatment during 30 minutes at 60$^{\circ}C$, the dissolved largest quantity was 13.12mg/g at pH 1 and 21.875 mg/g at pH 13, but the smallest quantity is 2.375mg/g at pH 5 as known After treatment for 60 minutes at 60$^{\circ}C$, the dissolved largest quantity was 17.500 mg/g at pH 1 and 31.56mg/g at pH 13, bu the smallest quantity is 3.849 mg/g at pH 5. 3. The dissolved crude protein from the cocoon shell and pupa by treatment for 30 minutes at 100${\pm}$2$^{\circ}C$ was the largest quantity of 147.000mg/g at pH 1 and 398. 125mg/g at pH 13, but the smallest quantity is 75.00mg/g at pH 5 as known. After treatment for 60 minutes at 100${\pm}$2$^{\circ}C$, the largest quantity was 253.76 mg/g at pH 1 and 460.625mg/g at pH 13, but the smallest quantity is 139.375mg/g at pH 5 as known. 4. The dissolved crude protein from the cocoon shell and pupa was not different in quantity by treatment at 30$^{\circ}C$ or 60$^{\circ}C$. But dissolved crude protein was large quantity from cocoon shell more than pupa, as known. 5. The treatment of cocoon shell and pupa during 60 minutes at 100${\pm}$20$^{\circ}C$ was increased to the dissolved largest quantity of crude protein of 19.20％ at pH 1 and 22. 18％ at pH 13 from the cocoon shell and 6. 12％ at pH, an d 23.87％ at pH 13 from the pupa. But dissolved crude protein was increased to the larger quantity from pupa more than cocoon shell.

• Journal of Periodontal and Implant Science
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• 제33권4호
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• pp.543-553
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• 2003

Due to considerably high degree of sequence homology between bacterial and human heat shock proteins(hsp), it has been widely thought that this protein might be involved in autoimmune disease mechanisms in humans. To elucidate how stress proteins contribute in the immunopathogenesis of periodontitis, the present study was performed to evaluate the T cell immune responses specific to Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) heat shock protein (hsp)60 and T-cell epitope specificities for P. gingivalis hsp60 in periodontitis. Anti-P. gingivalis IgG antibody titers were elevated in all patients. We could establish P. gingivalis hsp-specific T cell ines from the peripheral blood of peridontitis, a mixture of $CD4^+$ and $CD8^+$ cells. Of 108 overlapping synthetic peptides spanning whole P. gingivalis hsp60 moleculc, ten peptides with cpitopes specifities for T-cell were showed. Interestingly, ten epitopes were also identified as T-cell epitopes in the present study as well as B-cell epitopes in peridontitis. Therefore, all the ten representative epitopes were designated as common T-and B-cell epitopes for peridontitis. It is critical in developing a peptide vaccine strategy for potential prevention of periodontitis. It was concluded that P. gingivalis hsp60 might be involved in the immunoregulatory process of periodontitis with heat shock protein specificities.

• 한국식품영양과학회지
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• 제22권6호
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• pp.758-762
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• 1993

Sodium hexametaphosphate(SHMP)가 탈지대두박 단백질의 추출과 농축단백질의 색도 및 아미노산 조성에 미치는 영향을 검토하였다. SHMP에 의한 단백질의 추출은 1.5% SHMP에서 가장 높았으며 이 이상의 농도에서는 오히려 감소하는 결과를 나타내었다. 또한 참깨박 단백질의 추출은 pH 5.0에서 17.0%, pH 2.0에서는 22.7%로 아주 낮았으나 pH 12.0에서 60.7%의 단백질이 추출되었다. 시료와 용매와의 비율에 있어서는 1 : 40에서 약 60%의 단백질이 추출되었으며 비율이 증가할수록 추출율이 증가하는 경향을 나타내었고 SHMP처리로 인해 농축단백질의 색도가 개선되었다. 참깨빡 농축단백질의 아미노산 조성을 비교한 결과 SHMP의 처리에 의해 lysine과 hethionine의 함량이 현저히 감소된 반면 valine과 leucine함량은 증가된 결과를 나타내었다.

• 한국양식학회지
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• 제10권2호
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• pp.143-151
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• 1997

본 연구는 조피볼락 사료에 있어서 어분대체품을 결정하고, 상품어분대체품과 유인물질의 첨가 효과를 통하여 조피볼락용 어분대체품개발을 위한 기초자료도 사용하고자 수행되었다. 실험사료는 조단백질 52%로, 가용성 에너지 16.8 KJ/g으로 설계되었고, 주단백질원으로 북양어분, 어분대체품 및 상품어분대체품을 사용하였다. 사료의 성분조성은 다음과 같이 요약된다 : 사료1, 100%FM (control) ; 사료2, 60%FM : 40% CFMA ; 사료3, 60%FM : 40% CFMA+ATT ; 사료 4, 80%FM : 20% FMA ; 사료5, 80% FM: 20%FMA+ATT : 사료 6, ; 사료6, 60%FM : 40%FMA+ATT; 사료7, 40%FM : 60% FMA+ATT. 어분대체품은 혈분(BM), 오징어간분(SLP), 육골분(MBM), 수지박(LM), 가금부산물(PBP), 우모분(FM), 필수아미노산(Met, Lys, Ile) 등을 적절히 배합하여 제작 사용하였다. 성장률, 사료효율, 일간성장률 및 단백질효율에 있어서 사료 1은 사료 4, 사료 5 및 사료 6에 비해 유의적인 차이가 없었지만(P>0.05), 나머지 실험구들은 대조구에 비해 유의적으로 낮게 나타났다(P<0.05). 특히, 상품어분대체품(CFMA)인 사료 2와 사료 3은 실험사료로 제작된 동일한 수준의 사료 6과 비교하여 성장률, 사료효율, 단백질효율에서 유의적으로 낮은 경향을 보였다. 0.5% 유인물질을 첨가한 사료 3과 5는 사료 2와 4에 비해 유의적인 차이는 보이지 않았으며(P>0.05), 간중량지수, hemoglobin 및 비만도에 있어서는 유의적인 차이가 나타났다(P<0.05). 따라서, 조피볼락에 있어서 어분대체품(FMA)으로 어분단백질을 40%정도 대체 가능함을 알 수 있었다.

• Journal of Periodontal and Implant Science
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• 제38권4호
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• pp.565-578
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• 2008

Purpose: Porphyromonas gingivalis(P. gingivalis) heat shock protein (HSP)60 may play a role in the immunopathogenesis of periodontitis as well as atherosclerosis by modulating autoimmune reaction due to its high level of sequence homology between bacteria and human counterpart. The purpose of this study was to identify immunodomiant epitope of P. gingivalis HSP60 that is reactive exclusively to the homologous bacteria without reacting with human HSP. Materials and methods: The present study was performed to identify the peptide specifically recognized by anti-P. gingivalis HSP60 monoclonal antibodies mono-reactive to P. gingivalis HSP60. Results: Four different hybridomas were cloned producing monoclonal IgG antibodies exclusively to P. gingivalis HSP60. Thirty seven synthetic peptides (20-mer with 5-amino acid overlapping) were synthesized. All of these peptide were subject to SDS-PAGE for immunblot analysis. One peptide (TVPGGGTTYIRAIAALEGLK) and the other peptide (TLVVNRLRGSLKICAVKAPG) were recognized by all and one of the four monoclonal antibodies, respectively, that reacted solely with P. gingivalis HSP60. Immunohistochemistry to identify the localization of the HSP60 in the diseased gingival tissues revealed that all of the four monoclonal antibodies were highly reacted with the diseased gingival tissue than normal gingival tissue. Conclusion: The P. gingivalis HSP60 peptides (TVPGGGTTYIRAIAALEGLK and TLVVNRLRGSLKICAVKAPG, respectively) are positively involved in the immunopathologic process of periodontal disease. The peptide may potentially be developed as vaccine candidates. Further investigations are under way to identify more clones producing monoclonal antibodies reactive to P. gingivalis HSP and to other periodontopathogenic bacteria as well, while maintaining specificities to human counterpart.

• Radiation Oncology Journal
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• 제16권4호
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• pp.377-388
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• 1998

목적 : 방사선조사에 의한 apoptosis에서 나타나는 각종 세포주기관련 유전자들의 발현 양상을 RNA와 단백 수준에서 분석하여 방사선조사에 의한 apoptosis에서의 세포주기 조절의 변화를 규명함으로서 방사선치료의 기전에 대한 분자생물학적 이해를 도모하고자 본 연구를 시행하였다. 대상 및 방법 : promyelocytic leukemia 세포주인 HL60 세포주를 배양하여 선형가속기(6MV X-선)로 세포에 8Gy의 방사선을 조사하였다. 조사후 다양한 시간 간격으로 Apoptotic DNA Fragmentation Assay법을 이용하여 apoptosis를 확인하고 동시에 세포주기관련 유전자들(cyclinA, cyclin B, cyclin C, cyclin Dl, cyclin E, cdc2, CDK2, CDK4, $p16^{INK4a}$, $p21^{WAF1}$, $p27^{KIP1}$, E2F, PCNA와 Rb)을 단백질과 RNA 수준에서 분석하기위해 western blot analysis와 반정량적 RT-PCR을 시행하였다. 결과: 8 Gy의 방사선 조사에 의해 HL60세포에서 apoptosis가 관찰 되었다. 방사선 조사군에서 cyclin A단백은 조사후 48시간까지 시간이 갈수록 증가하였으며, cyclin E, E2F, CDK2 및 Rb 단백은 증가되었다가 다시 감소를 보였다. Rb단백의 증가는 대부분 비활성형인 ppRb (phosphorylated Rb protein)의 양적변화에 의한 것이었다. cyclin Dl, PCNA, COC2, CDK4, $p16^{INK4a}$단백은 발현의 차이를 보이지 않았으며 $p21^{WAF1}$과 $p27^{KIP1}$ 단백은 검출되지 않았다. cyclin A, B, C mRNA는 방사선 조사 직후 감소하였다가 12시간부터 발현이 증가되었으며 cyclin Dl mRNA는 조사후 바로 증가하여 48시간에 다시 감소하였다. cyclin E mRNA는 조사 후 시간이 경과함에 따라 감소하였다. CDK2 mRNA는 3시간째는 감소하다가 6시간부터 많은 증가를 보였으며 CDK4 mRNA는 조사후 6-12시간에 급격한 발현증가를 보였다. $p16^{INK4a}$ RNA는 발현의 변화가 없었으며, $p21^{WAF1}$ 및 $p27^{KIP1}$ RNA의 발현은 관찰되지 않았다. 결론 : 이상의 결과로 미루어볼 때, 방사선 조사에 의한 HL60세포의 apoptosis와 세포의 Gl/S transition는 밀접한 관계가 있는 것으로 생각되며 Rb단백의 증가와 활성형 Rb단백의 감소 현상도 관련이 있는 것으로 사료된다. 이는 E2F의 비정상적인 과발현 및 cyclin E/CDK2의 발현 증가와 관련이 있는 것으로 추측된다. 또한 $p21^{WAF1}$ 및 $p27^{KIP1}$는 방사선에 의한 apoptosis에는 관여되지 않는 것으로 사료된다.

• Journal of Periodontal and Implant Science
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• 제41권2호
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• pp.54-59
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• 2011

Purpose: The aim of this study was to define the immunoreactive specificity of Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) heat shock protein (HSP) 60 in periodontitis and atherosclerosis. Methods: In an attempt to define the cross-reactive bacterial heat-shock protein with human self-antigen at molecular level, we have introduced a novel strategy for cloning hybridoma producing anti-P. gingivalis HSP 60 which is polyreactive to bacterial HSPs or to the human homolog. Results: Five cross-reactive clones were obtained which recognized the #19 peptide (TLVVNRLRGSLKICAVKAPG) among 37 synthetic peptides (20-mer, 5 amino acids overlapping) spanning the whole molecule of P. gingivalis HSP 60. We have also established three anti-P. gingivalis HSP 60 monoclonal antibodies demonstrating mono-specificity. These clones recognized the #29 peptide (TVPGGGTTYIRAIAALEGLK). Conclusions: Peptide #19 and #29 of P. gingivalis HSP 60 might be important immunoreactive epitopes in the immuno-pathogenic mechanism of bacterial antigen-triggered autoimmune diseases.

• Journal of Periodontal and Implant Science
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• 제33권3호
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• pp.331-340
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• 2003

본 연구의 목적은 인간의 동맥경화증에서 Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis)와 인체 열충격단백 60의 T-세포 및 교차성 B-세포 epitope를 규명하고 수립된 T-세포주의 T-세포 주요조직적합체 양상을 파악하려는 데 있다. P. gingivalis 열충격단백-반응성 T 세포주와 환자의 혈청을 이용하여 P. gingivalis 열충격단백60 분자를 구성하는 104개의 중복성 합성 펩타이드의 T-세포 epitope과 B-세포 epitope을 규명하였다. 인체 열충격단백60에 대한 B-세포 epitope도 같은 방법으로 파악하였다. P. gingivalis, P. gingivalis 열충격단백60 또는 인체 열충격단백60에 대한 IgG 항체는 모든 동맥경화증 환자에서 상승하였다. P. gingivalis 열충격단백60의 3, 15, 24, 33, 45, 53, 64, 84, 88, 99번 펩타이드가 주요한 T-세포 epitope였고 이것들은 T-세포 및 B-세포 공동 epitope이기도 했다. 또한 인체 열충격단백60 교차반응 B-세포 epitope은 15, 29, 53, 56, 69, 74번 펩타이드로 판명되었다. 대부분 환자의 주요조직적합체는 $HLA-DRB1^{\ast}1504$와 $HLA-DZB1^{\ast}0603$으로 나타났다. 결론적으로 P. gingivalis 열충격단백60은 제 2급 주요조직적합제-제한적으로 분해되고 전달되었으며 이 단백질이 공통적인 T-세포 및 B-세포 epitope를 가지면서 동시에 인체 열충격단백60과 교차성 B-세포 epitope을 가지면서 동맥경화증의 면역조절기능에 관여한다고 볼 수 있다.

• 대한약리학회지
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• 제31권2호
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• pp.241-250
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• 1995

Protein B23 is one of the major nucleolar phosphoproteins associated with pre-ribosomal particles, and is localized in the granular region of the nucleolus. Recent studies suggest that protein B23 shuttles between nucleus and cytoplasm and also interacts with HIV Rev. These findings indicate that protein B23 is important in nucleocytoplasmic relationship and viral replication. However, the exact function of protein B23 is not clear yet. In acute nucleolar hypertrophy of rat liver, treated with thioacetamide, there was observed an increase of not only protein B23 but also B23-like protein p45 when anti-B23 monoclonal antibody (MAb) was used for identification. On the basis of the large B23 specific epitope structure composed of 68 amino acids, a hypothesis was formulated to examine that p45 is the pre-B23 resulting from excessive production of B23. In an attempt to investigate the precursor of B23, we analyzed the subcellular fractions and microsomal subfractions. Subsequently, we analyzed the finger printings of B23-like proteins using the tryptic peptide mapping. The results are summarized: 1) Using B23 MAb, we observed the presence of B23-like proteins in nucleolar fraction, nucleoplasmic fraction and microsomal fraction. 2) In the further microsomal subfractionation, we could partially purify B23-like protein in 2M layer of sucrose gradient. 3) When ion exchange chromatography was employed, there were protein species 80kDa(p80), 65kDa(p65) and 60kDa(p60). 4) Based on the tryptic map analysis of $^{125}I$ labeled proteins, the similarity between B23 and p80 was found only in 9 out of 14(B23) and 21(p80) peptides, and difference was found in the remaining peptides. p80 and p60 had 18 common peptides, and all the peptides of p60 were similar to those of p80. From these results, it is proposed that p45 is an abnormal metabolite resulting from carcinogenesis by thioacetamide, and it is not the precursor of B23. In addition, we suggest that p80 may be a precursor of p45.