Objective : The purpose of this study was to evaluate the different patterns of bone loss between the lumbar spine and the femur after ovariectomy in rats. Methods : Twenty-four female Sprague-Dawley rats underwent a sham operation (the sham group) or bilateral ovariectomy (the ovariectomized group). Four and eight weeks after operation, six rats from each of the two groups were euthanized. Serum biochemical markers of bone turnover including osteocalcin and alkaline phosphatase (ALP), which are sensitive biochemical markers of bone formation, and the telopeptide fragment of type I collagen C-terminus (CTX), which is a sensitive biochemical marker of bone resorption, were analyzed. Bone histomorphometric parameters of the 4th lumbar vertebrae and femur were determined by micro-computed tomography. Results : Ovariectomized rats were found to have higher osteocalcin, ALP and CTX levels than sham controls. Additionally, 8 weeks after ovariectomy in the OVX group, serum levels of osteocalcin, ALP and CTX were significantly higher than those of 4 weeks after ovariectomy. Bone loss after ovariectomy was more extensive in the 4th lumbar spine compared to the femur. Bone loss in the 4th lumbar spine was mainly caused by trabecular thinning, but in the femur, it was mainly caused by trabecular elimination. Conclusion : The present study demonstrates different patterns of bone loss between the 4th lumbar spine and the femur in ovariectomized rats. Therefore, when considering animal models of osteoporosis, it is important that bone sites should be taken into account.
This study explored the effect of calcium levels and/or ovariectomy on bone composition and its related factors using the female Sprague-Dawley rats which achieved peak bone mass in normal(0.5%) calcium intake during growth period. The rats were randomly divided into six groups and fed 0.1%, 0.5% and 1.5% calcium diets for 8 weeks after ovariectomized and sham operation. The results indicated that body weight gain was higher in ovariectomized groups than sham groups, regardless of dietary calcium levels and food intakes. Serum Ca and P concentrations were normal level regardless of dietary calcium levels and operation. Estrogen concentration was decreased in ovariectomized rat groups. Serum alkaline phosphatase activity and urinary hydroxyproline were increased in ovariectomized groups. When rats were fed normal Ca diet during growing period, weight, length and breaking force of femur were not significantly different in all groups but increased the same level. Generally, lipid contents in lumbar and femur were lower in low calcium groups and this effect was more pronounced in femur. In case of femur, the significant decrease in Ca contents of bone was observed in a relatively short period of feeding low Ca diet, even though it appeared th desirable peak bone mass had achieved through the growing period by supplementing the adequate amount of calcium. The marked decrease of estrogen levels after ovariectomy did not seem to influence greatly bone parameters measured except bone wet weight. Therefore, this study indicated that lower intake of Ca might be more important determinating factor against osteoporosis than postmenopausal state stimulated by ovariectomy in female rats. With normal or high intake of Ca it appears possible to prevent bone loss in postmenopausal period, and this might apply only in case of achieving peak bone mass in the growing with the adequate intake of calcium. (Korean J Nutrition 34(5) : 532∼540, 2001)
폐경과 더불어 시작되는 폐경기의 에스트로겐 변화로 발생되는 건강 문제 중 심혈관계질환이 문제점으로 대두되고 있다. 그러므로 본 연구는 갱년기 장애 시 유발되는 체내 지질 함량 증가에 있어서 김 추출물이 미치는 영향을 조사하기 위해 인위적 폐경을 유발시킬 수 있는 난소 절제 쥐에서 김 추출물의 혈 중 지질 함량 변화에 미치는 영향을 검토하였다. 그 결과 난소 절제에 의한 total-cholesterol의 증가가 김 추출물을 투여함으로써 감소하는 경향을 보였다. 특히 김 추출물 50 mg/kg bw/day에서 유의적으로 감소하였다. 혈 중성 지방에서는 김 추출물 농도별 투여한 OVX-PT50, OVX-PT200 모든 군에서 난소를 절제하지 않은 Sham군과 비슷한 수준으로 감소하는 경향을 보였고, 또한 혈 중 HDL-cholesterol은 김 추출물 투여로 인해 난소 절제한 군과 비교해서 높은 경향을 나타내었다. 이상의 결과는 갱년기 장애 시 유발되는 지질 대사 이상으로 오는 심혈관계질환에 김의 섭취가 유익한 결과를 줄 것으로 사료되며, 또한 잘못된 식습관으로 오는 비만이나 심혈관계 질환에도 유익한 효과를 가져다 줄 것으로 기대된다.
Objective : Ssangwha-tang is a traditional medicine formula widely prescribed for a decrease of fatigue after an illness in Korea. The aim of this study is to investigate the effect of Ssangwha-tang fermented by Lactobacillus fermentum (SF) on osteoclast differentiation in vitro and on bone metabolism of an ovariectomized rat in vivo. Methods : Tartrate-resistant acid phosphatase activity and staining were applied to evaluate the formation of osteoclasts. Ovariectomized rats were orally administrated with SF (30 ml/kg/day) for 12 weeks. Serum aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase, alkaline phosphatase, total cholesterol, high-density lipoprotein-cholesterol, low-density lipoprotein-cholesterol, triglyceride, phosphate, calcium levels were determined. Effect of SF on bone loss were studied by histological analysis and the measurement of bone mineral density. Results : SF significantly inhibited tartrate-resistant acid phosphatase activity and formation of osteoclasts in RAW264.7 cells stimulated by receptor activator for nuclear factor ${\kappa}B$ (NF-${\kappa}B$) ligand (RANKL). In addition, SF significantly decreased the level of triglyceride and increased the level of low-density lipoprotein. Moreover, the decrease of trabeculae of the femur was partially prevented in ovariectomized rats administrated with SF. Conclusions : SF treatment could prevent ovariectomy induced bone loss and its effects could be medicated by the inhibition of osteoclastogenesis.
연구 목적: 본 연구의 목적은 실험용 쥐의 초기 골 재생 과정에서 혈소판 농축 혈장 (platelet-rich plasma; PRP)이 난소호르몬 분비 유무에 따라 각각 어떤 효과를 나타내는지 확인 비교해 보는 것이다. 연구 재료 및 방법: 실험용 쥐 40마리 중 20마리에는 난소절제술 (ovariectomy; OVX)을 시행하여 골다공증을 유발시킨 상태에서 골 이식을 하였고, 나머지 20마리에는 난소절제술 없이 골 이식을 하였다. 또, 난소절제술을 시행한 쥐 중 10마리와 난소절제술을 시행하지 않은 쥐 중 10마리에는 골 이식 시 골전도성 합성골 이식재인 $MBCP^{TM}$ (Micro-& macro-porous biphasic calcium phosphate)에 혈소판 농축 혈장을 첨가하여 적용하고, 아래와 같은 실험군으로 구분하였다. A군; 10마리의 non-OVX 쥐/골 이식재 ($MBCP^{TM}$). B군; 10마리의 non-OVX 쥐/골 이식재($MBCP^{TM}$)+PRP. C군; 10마리의OVX 쥐/골 이식재($MBCP^{TM}$). D군; 10마리의OVX 쥐/골 이식재($MBCP^{TM}$)+PRP. 모든 실험동물의 두 개관 정중부에 직경 8 mm 원형의 임계 크기 결함을 한 개씩 인위적으로 형성한 후, 임계 크기 결함 내부에 골 이식재 및 혈소판 농축 혈장을 적용하여 골 이식술을 실시하였다. 골이식 시행 4주 후에 실험 동물을 희생시켜 표본을 제작한 후, 광학현미경상을 관찰하고 기존에 형성한 임계 크기 결함 내부에 새롭게 침착된 신생골의 면적을 측정하여 그 측정값을 통계 분석하였다. 결과: 신생골 면적 측정값을 각 군 간 비교하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 난소절제술이 시행되지 않은 정상 쥐에서는 혈소판 농축 혈장의 사용이 골 재생에 유의한 효과를 나타내지는 않았다 (p>.05). 2. 난소절제술이 시행된 골다공증 유발 쥐에서는 혈소판 농축 혈장의 사용이 골 재생에 유의한 효과를 나타내었다 (P<.05). 3. 혈소판 농축 혈장이 사용되지 않은 경우, 난소절제술이 시행된 골다공증 유발 쥐는 정상 쥐보다 골 재생 능력이 유의할 만큼 감소하였다 (P<.05). 4. 혈소판 농축 혈장이 사용된 경우, 난소절제술이 시행된 골다공증 유발 쥐라고 하더라도 정상 쥐보다 골 재생 능력이 유의할 만큼 감소하지는 않았다 (P>.05). 결론: 이상의 결과를 토대로, 골전도성 합성골 이식재와 함께 쓰인 혈소판 농축 혈장은 정상 쥐에서보다 난소절제술이 시행된 골다공증 유발 쥐에서 골 재생 및 치유에 더 큰 효과가 있음을 알 수 있었다.
본 연구는 구기자와 구기엽 추출물이 난소를 절제한 흰쥐의 체중 증가, 골밀도, 에스트로겐 수용체의 발현에 미치는 영향을 밝히고자 시행하였다. 실험군은 흰쥐 24마리를 가장수술군(Sham군), 난소를 절제한 대조군(OVX군), 난소절제 후 구기자 추출액을 투여한 군(LCF군), 난소절제 후 구기엽 추출액을 투여한 군(LCL군)으로 구분하였다. 8주 후 난소를 절제한 OVX군($330{\pm}5.39g$), LCF군($315{\pm}2.99g$) 및 LCL군($318{\pm}2.06g$)의 체중은 Sham군($281{\pm}1.71g$)에 비하여 증가하였다. 혈청 osteocalcin 활성은 OVX군($107{\pm}3.52ng/mL$)에 비하여 LCF군($444.6{\pm}26.9ng/mL$)과 LCL군($407{\pm}18.9ng/mL$)에서 증가하였다. Alkaline phosphatase의 활성은 OVX군($95{\pm}2.9U/L$)에 비하여 LCF군($108{\pm}2.7U/L$)과 LCL군($407{\pm}18.9ng/mL$)에서 증가하였다. 8주 후 넙다리뼈를 실체현미경으로 관찰한 결과 뼈 기질밀도는 난소절제군에서 감소하였으나, 구기자와 구기엽을 추출액을 투여한 군에서는 뚜렷이 회복되었다. 에스트로겐 수용체의 mRNA 발현은 OVX군에서는 거의 발현되지 않았으나, LCF군과 LCL군에서 뚜렷이 증가하였다. 이상의 결과로 보아 구기자와 구기엽 물추출물이 난소절제에 의하여 유발된 흰쥐의 뼈 기질 회복 또는 손실 지연에 효과가 있다고 할 수 있을 것이다.
홍화씨 yoghurt가 골다공증에 미치는 영향을 조사하기 위하여 sham-operation되어 6주간 정상식이한 군을 대조구로 하였고, 난소 절제하여 6주간 저칼슘식이한 군을 정상식이군(G I), yoghurt를 첨가하여 사육한 군(G II) 및 1%${\sim}$4%홍화씨yoghurt를 첨가하여 사육한 군(GIII${\sim}$GVI)으로 구분하여 실험식이를 급여하였다. 사료섭취량, 체중 증가량 및 사료효율을 알아보았고, 왼쪽 대퇴골의 무게, 밀도, 길이, 강도, 회분 및 무기질 함량을 조사하였다. 또한 오른쪽 대퇴골의 조직을 SEM으로 관찰하였다. 사료섭취량은 대구조와 실험구간 유의적인 차이는 없었다. 사료효율 및 체중 증가량은 홍화씨 yoghurt 식이구가 유의적으로(P < 0.05) 높았으며, 특히 GV와 GVI구가 높게 나타났다. 왼쪽 대퇴골의 밀도, 강도, 회분 및 미네랄 함량은 대조구와 G I간에 유사한 경향을 나타내었고, 홍화씨 첨가수준이 높을수록 유의적으로 높게 나타났다. 반면 무게와 길이는 전 실험구에 있어서 거의 일정하게 나타났다. 전자현미경으로 측정한 결과 4% 홍화씨 yoghurt 식이구(GVI)가 가장 골다공증 치유효과가 높은 것으로 나타났다. 이상의 결과 홍화씨 yoghurt 식이가 난소 절제 및 저칼슘식이를 한 rat의 골다공증에 미치는 효과에 있어서 정상식이 및 yoghurt 식이구보다 홍화씨 yoghurt 식이구가 높은 치유효과를 보였으며 가장 우수한 것으로 나타났다.
본 연구는 골다공증유발 rat에 녹용추출물의 투여가 예방 및 치료효과에 미치는 영향을 구명하고자, 양측 난소를 적출한 후 골다공증이 유발된 rat에 암, 수녹용 추출물 525, 1,250 mg/kg을 투여했을 때 체중, 대퇴골의 중량, 장기중량, 골회분량의 측정 및 조직학적, 전자현미경적 검사 등을 실시하였다. 1. 골다공증유발 rat에 암, 수녹용 추출물을 투여했을 때 체중은 정상대조군에 비하여 유의한 증가를 나타냈다 (p<0.05). 2. 골다공증유발 rat에 암, 수녹용 추출물을 투여했을 때 우측, 좌측의 femur 중량은 정상대조군에 비하여 감소하였다. 3. 골다공증유발 rat에 암, 수녹용 추출물을 투여했을 때 골회분량은 정상대조군에 비하여 약간 감소된 치를 나타냈으나 유의성은 인정되지 않았다. 4. 골다공증유발 rat에 암, 수녹용 추출물을 투여했을 때 간과 비장 및 신장의 각각 정상대조군에 비하여 감소된 치를 나타냈다. 5. 골다공증유발 rat에 암, 수녹용 추출물을 투여했을 때 조직학적 및 전자현미경적 소견은 정상대조군에서는 소주골간의 연결이 비교적 잘 유지되어 있고 골소실을 발견할 수 없었으나 난소적출군은 정상군에 비하여 소주골이 가늘어졌거나 소주골간 연결부분의 대다수가 끊어져 골양이 많이 소실되었음이 관찰되었으며, 녹용처리군에서는 소주골의 형태가 굵고 연결부분이 잘 유지되어 정상군과 유사한 소견이 관찰되었다. 위의 결과들에서 암, 수녹용 추출액은 난소제거후의 골소설을 억제하므로 골다공증의 예방과 치료에 효과가 있는 것으로 판단된다.
임신직후 자궁조직은 난소 스테로이드 호르몬에 의하여 분화한다. 착상전 여러 단계에 있는 자궁조직내의 cAMP의 함량을 측정함으로서 cAMP와 호르몬과의 관계를 규명할 목적으로 흰쥐를 재료로 해서 본 실험을 행하였다. 임신제 2일에 난소를 제거하고 즉시, 제3, 또는 제 4일에 estradiol과 progesterone 을 각각 혹은 동시에 주사한 뒤 대조군인 정상임신군, 난소제거군, 난소제거후 호르몬주사군의 자궁조직에서 cAMP농도를 competitive protein-binding assay로 측정하여 이를 각각 비교하였다. 본 연구결과는 다음과 같았다. 정상임신군인 경우 자궁조직이 분화해 갈수록 자궁조직내 cAMP의 농도는 낮아지고 있다. 난소제거군에서는 임신기간이 길수록 자궁조직내의 cAMP농도가 높아진다. 난소제거후 progesterone 혹은 progesterone 과 estradiol을 주사한 실험군에서는 임신 제 6일이 되면 cAMP 농도가 정상임신군과 난소제거군의 중간수치를 보여준다. 한편, estradiol 단독주사인 경우는 임신제3, 제6일의 자궁조직내의 cAMP의 농도는 크게 감소한다. 이처럼 estradiol의 영향아래 세포분열등 분화가 왕성한 자궁조직에서는 cAMP 농도가 크게 낮아지지만 자궁조직의 분화가 억제된 상태에서는 cAMP의 농도가 반대로 높아진다. 난자, 배아 또는 여러 형태의 세포에서처럼 cAMP의 농도는 세포의 대사에 크게 영향을 주고 있다는 것을 알 수 있었다.
폐경을 앞둔 여성에게는 폐경을 전후하여 지속되는 골 손실 가속화 등의 문제점을 가지고 있다. 그러므로 본 연구에서는 인위적 폐경을 유발시킨 난소 절제 쥐에서의 골 손실의 유무를 결합조직 중의 collagen 함량 변화를 통하여 그 효과를 검토하였다. 그 결과 생화학적 골 대사 지표인 혈 중 ALP 활성은 난소 절제(OVX-control)로 인하여 증가하는 반면, 난소 절제 후 다시마 추출물 투여(OVX-ST50, OVX-ST200)로 혈중 ALP 활성은 감소하는 경향을 보여 골 흡수를 저하시킬 수 있는 가능성을 나타내었다. 한편 난소 절제 후 collagen 함량이 감소하였으나, 다시마 추출물 투여에 의해 피부조직과 골.연골 조직에서 collagen 함량이 증가하는 경향을 보였고, 특히 OVX-ST200군은 각 조직 모두 OVX-control에 비하여 유의적으로 증가하였다(p<0.05). Collagen의 성숙 가교물질인 pyridinoline 함량 또한 난소 절제 후 골, 연골 조직 중에서 감소하였으나 다시마 추출물을 투여한 군에서 증가하는 경향을 나타내었다. 골에서의 deoxypylidinoline 함량은 난소를 절제하지 않은 Sham군이 OVX-control군에 비해서 유의적으로 높은 값을 나타냈고(p<0.05), 난소 절제 후 다시마 추출물을 농도별로 투여한 군(OVX-ST50 및 OVX-ST200)에서 유의 적으로 높은 값을 나타내어(p<0.05), 난소 절제 시 합성이 감소되는 deoxypyridinoline 생성량을증가시켰다. 에스트로겐 감소로 인한 결합조직 중 collagen 함량 저하가 다시마 추출물 투여에 의해 증가된 본 실험 결과로 미루어 보아 다시마 중의 phytoestrogen이 에스트로겐 유사효과를 나타냄을 알 수 있었다. 이상과 같이 폐경으로 인한 장애를 감소시키기 위하여 에스트로겐의 장기간 복용에 의한 부작용을 다시마 중의 phytoestrogen이 estrogen 대체 작용을 함으로써 그 부작용을 감소시켜 줄 것으로 사료되며, 이들의 구조 및 기전에 대해서는 앞으로 연구가 더 필요 한 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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