In solid culture of Endomycopsis fibuliger No.55, Eudomuopsis javanensis No.112 and Candida tropicalis No.340, the conditions of enzyme (protease, anylase and cellulase) production and the influence of addition of $(NH_4)_2;SO_4$ were examined, and the results obtained were as follows. 10 Wheat bran medium is found to be the best on the enzyme production in case of simple material. The optimum conditions ; are water content added 100 to 120%, temperature 25 to $80^{\circ}C$ and incubation times 2 to 3 days. 2) The cellulase production was scarely produced in the case of Endomyopsis fibuliger No.55, as well as, the amylase production was scarely producted in the case of Endomycopsis javanensis No.112 and Candida tropicalis No.340. 3) The enzyme production was remarkably increased when 5% of$(NH_4)_2;SO_4$ as inorganic nitrogen sources was admixed to wheat bran. 4) When 5% of $(NH_4)_2;SO_4$ was admixed to medium, the ratio of protein increase was 10.2 to 17.7% in wheat bran medium and 10.6 to 17.9% in sweet potato cake medium.
Leaf mesophyll protoplasts from five cultivars of tobacco (N. tabacum L.) were cultured. The protoplasts did not survive in culture medium containing Murashige and Skoog inorganic salts for over 6 days. NH4NO3 and FeSO4.Na2EDTA concentration of Murashige and Skoog medium were toxic in tobacco leaf mesophyll protoplast culture. Therefore we investigated optimum condition in Murashige and Skoog medium. High plating efficiency was obtained by reducing the concentrations of NH4NO3 and FeSO4.Na2EDTA to 1/3 and 1/10, respectively, on the supplemented with 5$\mu$M IAA, 0.5 $\mu$M 2.4-D 5 $\mu$M BAP. Plants were regenerated from protoplast-derived calluses.
This experiment was carried out to improve in vitro development of rabbit one-cell embryos to the blastocyst stage. One-cell rabbit embryos were collected at 19\ulcorner20hr after superovulation induction and incubated at 39\ulcorner in 5% CO2 for 72hr. In order to find optimum conditions in medium that affects the rabbit embryo's development in vitro, RDH medium which mixed with RPMI1640, DMEM and Ham's F10 was compared with the previously reported mediums (Ham's F10 and RD) for embryo development and cell numbers. Three additives (BSA, taurine and glucose) were tested for the development of rabbit one-cell embryos in vitro. When the embryos were cultured in RDH medium, their development was markedly promoted as compared with Ham's F-10 or RD alone. Glucose exhibited no significant effects on embryo development and cell numbers. BSA a, pp.ared to promote transition from morula to blastocyst stage and taurine increased cell numbers of cultured embryos markedly regardless of medium. BSA and taurine together in RDH medium showed the additive effects on embryos development and cell number.
세 가지 액체배지를 사용하여 Berkeley대학 Dr. Bjeldanes Lab에서 isolate된 F. moniliforme을 생육시킨 결과 Czapek-Dox medium에서 Fusarin C생성량이 가장 높았으며 옥수수에 비하면 약 1/10정도의 양인 것으로 나타났다. 그리고 Czapek-Dox medium의 경우 $28^{\circ}C$에서 2주간 배양한 때에 Fusarin C의 생성량이 가장 많았으며 옥수수의 경우는 28$^{\circ}C$에서 1주간 배양한 때에 가장 높았다. 또한 Czapek-Dox medium의 initial PH가 6.5인 때에 Fusarin C의 생성량이 최대이었으며 6.3, 5.9인 때도 다른 PH보다 월등히 높은 양이 생성됨을 확인할 수 있었다.
본 연구는 non-O157 EHEC의 혈청형별 증균 및 선택배지에서의 분리 조건 및 비교 시험을 하여 최적의 검출 방법을 제시하고자 하였다. EC medium with MUG broth, BRILA broth, mTSB broth with novobiocin 3종의 증균배지 성능 및 배양 조건의 비교 결과 EC-MUG 증균배지를 $42^{\circ}C$에서 24시간 배양하면 EHEC의 효율적인 증균이 이루어질 수 있을 것이라 생각된다. ENDO agar, Chromocult agar, TBX agar, CHROMagar$^{TM}$ STEC medium 4종의 선택배지에 가장 효과적인 배지를 확인결과 TBX agar가 검출율이 가장 높았으나 1종의 배지를 사용했을 경우 다양한 EHEC 혈청형 균를 검출 하기는 어렵다고 생각된다. 그러므로 EHEC를 효과적으로 검출하고자 할 경우 TBX agar와 보완이 가능한 그 외의 배지를 사용하여야 효과적인 검출이 가능할 것으로 생각된다. 또한, 각 배지가 혈청형에 따른 분리효율이 다르므로 본 연구 결과를 참조하여 가장 적합한 배지를 선택 해야 할 것으로 보인다. 향후 non-O157 EHEC의 적절한 기질을 사용하여 다양한 혈청형을 모두 검출 할 수 있는 효율적인 배지의 개발이 필요하다고 생각된다.
서류 및 각종 퇴비를 분리원으로 하여 전분 이용성이 좋은 균주는 분리하였고 이 균주를 이용하여 균체 및 지방질을 가장 많이 얻기 위한 최적 배양조건을 구명한 결과는 다음과 같다. 1. 선발된 우수 균주는 Mucor plumbeus로 동정되었다. 2. 이 균주는 전분을 탄소원으로 이용하여 그 함량이 21%일 경우 배양 20일 째에 균체량은 배지 50$m\ell$당 2.09$\pm$0.24g이고 지방질량은 건조 균체 당 37.43%이었다. 3. 질소원으로서는 질산나트륨, 질산칼륨, 질산마그네슘, 요소, 및 초산암모늄 중 요소를 이용하는 경우 균체 및 지방질 생산량이 가장 높았고 그 최적 농도는 2.14g/$\ell$으로 배양25일에서 균체량은 배지 50$m\ell$당 2.39$\pm$0.07g 지방질 함량은 건조균체당 50.73%이었다. 4. 무기질원으로 황산아연. 황산마그네슘, 인산이수소나트륨. 황산칼륨 및 염화제 2 철은 모두Mucor plumbeus FRI 0007 생장에 필요하나 필수적으로 요구되지는 않으며 황산칼륨을 0.44g/$\ell$ 혹은 황산마그네슘을 5.00g/$\ell$ 만을 첨가하는 경우에 소비 전분량에 대한 지방질 생산률은 14.96 및 15.37, 균체 생산률은 31.12 및 26.10으로 다른 처리구 보다 높았다.
버섯 갈변병 유발세균인 P. tolaasii에 길항성을 나타내는 P. fluorescens를 분리하였으며, 대량배양을 위하여 최적 배지조성 및 배양의 최적조건을 확립하였다. 세포성장에 있어서 carbon및 energy source인 glucose의 경우 30g/L일 때 세포농도가 가장 높았으며, yeast extract의 농도가 10g/L까지 증가함에 따라 세포농도도 증가하였다. 질소원인 $NH_4Cl$과 $(NH_4)_2SO_4$는 각각 1.0g/L와 0.1g/L일 때 세포성장이 가장 좋게 나타났고, sulfur source인 $MgSO_4{\cdot}7H_2O$의 최적농도는 1.0g/L였다. 그리고 $KH_2PO_4$와 $CaCl_2$는 각각 1.0g/L와 0.1g/L일 때 세포농도가 가장 좋았고 온도 $30^{\circ}C$, pH6.0그리고 초기 D.O를 68로 유지시켰을 때 세포성장이 가장 높았으며, 균체 비증식속도($\mu$)와 생산성도 높았다.
항암 능력이 높다고 알려진 진흙버섯속(Phellinus)은 단 다년생인 백색부후균이며 여기에 속하는 10개 균주의 최적 배양조건을 조사하였다. 그 결과 진흙버섯속 균사체 배양에 적절한 영양원으로는 $25^{\circ}C$ 배양상에서 PDA 배지였으며, 최적 pH는 $6.0{\sim}8.0$로 조사되었고 pH 4.0에서는 모든 균주가 느린 생장속도를 나타냈다. 배양온도는 $25{\sim}30^{\circ}C$에서 대부분의 균주가 양호한 생장을 보여주었다. Phellinus biscuspidatus는 실험 균주 중 가장 빠른 생장속도를 나타냈으며 pH 5.0에서 최적의 성장속도를 보여주었으나 pH $6{\sim}8$에서도 양호한 생장을 한 것과 균사밀도를 고려했을 때 최적pH는 $6.0{\sim}7.0$이라 할 수 있겠다. P. biscuspidatus, P. johnsonianus와 P. lloydii는 $30^{\circ}C$와 $35^{\circ}C$ 사이에서 균사생장이 활발한 고온성 균임을 알 수 있다.
토양에서 분리된 Alkaline Protease생산균주는 Bacills subtilis로 동정되었다. 본 균주의 최적배양온도는 최적 배지조건에서 $35^{\circ}C$이며, 초기 배지 pH는 10.5였다. 효소역가는 Casein-Folin법으로 약 2,300 Unit/ml로 나타났다. 배양액에 일련의 정제과정을 실시한 결과 정제배수 9.2, 회수율 14%의 정제효소를 얻었으며, 분자량은 19,000이었다. 정제효소의 반응최적온도는 $70^{\circ}C$, 최적 PH는 12였다. $Fe^{++}$에 의해 활성이 저하되었으며, 또한 serine protease inhibitor인 PMSF에 의해 활성이 저해되었다. 이것으로 부터 본 효소는 활성부위에 serine을 갖는 serine protease의 일종임을 알 수 있었다.
토양으로부터 분리한 균주 중 항진균 활성이 우수한 균주를 선발하여 B-1이라 명명하였다. B-1의 항균성 물질 생산에 대한 배양조건을 검토하기 위해 최적배지, 탄소원, 질소원, pH, 온도별로의 영향을 조사하였다. PDB 배지에서 항균력이 우수하였으며 탄소원$.$질소원에는 별다른 영향이 없었다. pH와 온도에서는 각각 pH 5.0, 28$^{\circ}C$에서 항균력이 우수하였다. 항균 활성은 진균에서 강하게 나타났으며 일부 세균에서도 항균력을 나타내었다. 항진균성 물질은 산, 알칼리 처리 후 잔존 활성은 70∼80%로 나타났으며 열처리시 완전히 실활되어 열에 대해 상당히 불안정하다는 것을 확인하였다. 항균성 물질위 용매 전용성을 위해 TLC를 통하여 분석하였으며 plate assy를 실시하여 항균성물질을 확인하였다. 항진균성 물질의 대량생산을 위해 기본배지인 PDB를 직접 실험실 내에서 제조하였으며 시판의 PDB와 비교하였을때 항균성 물질 생산면에서나 가격면에서 더 나은 결과를 보였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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