Selvamani, Vidhya;Ganesh, Irisappan;Chae, Sowon;Maruthamuthu, Murali kannan;Hong, Soon Ho
한국미생물·생명공학회지
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제48권1호
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pp.24-31
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2020
Five genes (mxbDM, mxcQE and mxaB) are responsible for the transcription of methanol oxidation genes in Methylobacterium strains. Among these, MxbDM and MxcQE constitute the two-component system (TCS) regulating methanol metabolism. In this study, we integrated the methanol-sensing domain of MxbD and MxcQ with the EnvZ/OmpR from Escherichia coli. The domain-swapping strategy resulted in chimeric histidine kinases (HK's) MxbDZ and MxcQZ AM1 containing recombinant E. coli. Real-time quantitative PCR was used to monitor OmpC expression mediated by the chimeric HK and response regulator (RR) OmpR. Further, an ompC promoter based fluorescent biosensor for sensing methanol was developed. GFP fluorescence was studied both qualitatively and quantitatively in response to environmental methanol. GFP measurement also confirmed ompC expression. Maximum fluorescence was observed at 0.05% methanol and 0.01% methanol using MxbDZ and MxcQZ AM1, respectively. Thus the chimeric HK containing E. coli were found to be highly sensitive to methanol, resulting in a rapid response making them an ideal sensor.
Objective: The aim of this study was to investigate antioxidant activities of cinnamon (Cinnamomum cassia) extracts (extracted with different solvents) at various concentrations and to determine product quality of raw chicken patties added with different levels of cinnamon powder (CP) and oyster mushroon powder (OMP) during storage. Methods: After cinnamon was made into oven dried CP and extracted with water and different levels (50%, 80%, and 100%) of ethanol, antioxidant activities of these extracts were determined. CP and OMP were combined at different levels and added to raw chicken patties. Physicochemical properties and microbial counts were measured during refrigerated storage. Results: Cinnamon ethanol (80%) extract showed the highest (p<0.05) by 2,2-diphenyl-1picrylhydrazyl-radical scavenging activity and reducing power. Cinnamon water extract (CWE) had the highest iron chelating ability (p<0.05), while CP 100% ethanol extract had the highest content of total phenolic compound. Then, CP and OMP were applied to chicken patties at different levels (0.1% to 0.2%). After the addition of CPs, pH, L* (lightness), 2-thiobarbituric acid reactive substance, and volatile basic nitrogen values were decreased, whereas a* (redness) and b* (yellowness) values were increased. Microbial counts of total bacteria and Enterobacteriaceace were decreased with the addition of CP 0.2% regardless of the OMP level. Conclusion: The addition of CP in combination with OMP can increase the shelf-life of chicken patties during storage.
본 연구에서는 병원성 Pasteurella multocida D:4 외막 단백질 H의 방어적 면역성과 백신으로서의 가능성을 검정하고자, 외막 단백질 H 유전자를 대장균에서 발현, Trx와 융합된 형태의 재조합 외막 단백질 H를 분리하여 면역화와 백신 실험에 항원으로 사용하였다. 면역 실험에서 재조합 외막 단백질 H는 높은 역가의 항체를 유도하였으며, 불활화한 사균 백신과 유사한 수준의 백신 효과를 나타내었다.
축산물을 이용하여 생산된 특이항체는 세균성감염에 의한 설사병 치료와 충치예방에 효과가 있고, 특히 계란을 이용한 IgY (Immunoglobulin Yolk)는 비교적 산과 열에 안정하다는 실험결과가 보고되어[22] 있다. 식품분야에 특이항체를 식품소재로 산업화에 활용한 빈도는 아직 미미한 상태에 있으나, 최근 면역학, 단백질공학, 생명공학 등의 발전과 기술 향상으로 식품 소제로써의 활용성이 점차 높아질 것으로 기대된다. 본 연구에서는 H. pylori의 감염을 예방하고 치료보조제로 사용할 목적으로 포유동물을 통한 피동면역용 항체를 생산하고자 하였다. H. pylori로부터 항원을 분리하고, 분리된 항원에 대한 항체생산 및 H. pylori의 응집정도를 알아보았다. H. pylori로부터 분리된 주요 항원 단백질은 WC, OMP, crude urease, LPS 각각 12개, 7개, 3개, 1개 종류의 band를 확인할 수 있었다. 분리된 항원의 IgG 항체 생성은 동일한 항원농도인 $20{\mu}g/100{\mu}l$에서 각각 WC (L) $77.9{\pm}6.4{\mu}g/ml$, OMP $84.9{\pm}6.4{\mu}g/ml$, crude urease $123.8{\pm}2.9{\mu}g/ml$로 crude urease 항원이 가장 많은 것으로 나타났다. 그리고 IgA 항체 생성은 WC (L) $2.5{\pm}0.32{\mu}g/ml$, OMP $2.0{\pm}0.43{\mu}g/ml$, crude urease $1.3{\pm}0.25{\mu}g/ml$로 IgA 항체 생성은 WC (L) 항원이 가장 많은 것으로 나타났다 Western blotting을 통하여 항원 단백질의 면역원성 알아본 결과 WC 10종류, OMP 6종류, crude urease 3종류의 주요 항원성 물질을 확인할 수 있었다. 항체의 H. pylori에 대한 응집정도를 나타내는 응집가는 anti-WC (H), anti-WC (L), anti-OMP, anti-crude urease 항혈청에서 각각 $2^5,\;2^5,\;2^6\;and\;2^7$으로 나타났으며, 상대적으로 anti-crude urease 항혈청이 가장 높은 응집가를 나타내었다. 각 항원에 의해 생성된 항혈청의 urease활성 억제에 대한 흡광도(OD=550 nm)는 WC (H) $0.14{\pm}0.01$, WC (L) $0.16{\pm}0.01$, OMP $0.18{\pm}0.03$, Urease $0.18{\pm}0.04$로 대조구 $0.26{\pm}0.02$와 비교할 때 유의적인 억제효과가 있는 것으로 나타났다. 이상의 결과를 종합해 볼 때 H. pylori 항원의 분리와 분리된 항원의 항체 생성능, H. pylori의 응집가, urease 활성억제측면에서 WC 및 crude urease항원 모두 높은 항체 역가를 나타내었다.
Type I signal peptidase cleaves the signal sequence from the amino terminus of membrane and secreted proteins afters these protein insert across the membrane. This enzyme serves as a potential target for the development of novel antibacterial agents due to its unique physiological and biochemical properties. Despite considerable research, the signal peptidase assay still remains improvement to provide further understanding of the mechanism and high-throughput inhibitor screening of this enzyme. In this paper, three known signal peptidase assays are tested with an E. coli D276A mutant signal peptidase to distinguish the sensitivity of each assays. In vitro assay using the procoat synthesized by in vitro transcription translation shows that the D276A signal peptidase I was inactive while in vivo processing of pro-OmpA expressed in the temperature-sensitive E. coli strain IT41 as well as in vitro assay using pro-OmpA nuclease A substrate show that D276A signal peptidase I has activity like wild-type signal peptidase. These results suggest that in vitro assay using the pro-OmpA nuclease A and in vivo pro-OmpA processing assay are more sensitive monitors than in vitro assay using the pro-coat. In conculsion, caution should be used when interpreting the in vitro results using the procoat.
Leya, Mwense;Kim, Won Kyong;Ochirkhuyag, Enkhsaikhan;Yu, Eun-Chae;Kim, Young-Jee;Yeo, Yoonhwan;Yang, Myeon-Sik;Han, Sang-Seop;Lee, John Hwa;Tark, Dongseob;Hur, Jin;Kim, Bumseok
Journal of Veterinary Science
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제22권2호
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pp.15.1-15.13
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2021
Background: Attenuated Salmonella strain can be used as a vector to transport immunogens to the host antigen-binding sites. Objectives: The study aimed to determine the protective efficacy of attenuated Salmonella strain expressing highly conserved Brucella immunogens in goats. Methods: Goats were vaccinated with Salmonella vector expressing individually lipoprotein outer-membrane protein 19 (Omp19), Brucella lumazine synthase (BLS), proline racemase subunit A (PrpA), Cu/Zn superoxide dismutase (SOD) at 5 × 109 CFU/mL and challenge of all groups was done at 6 weeks after vaccination. Results: Among these vaccines inoculated at 5 × 109 CFU/mL in 1 mL, Omp19 or SOD showed significantly higher serum immunoglobulin G titers at (2, 4, and 6) weeks post-vaccination, compared to the vector control. Interferon-γ production in response to individual antigens was significantly higher in SOD, Omp19, PrpA, and BLS individual groups, compared to that in the vector control (all p < 0.05). Brucella colonization rate at 8 weeks post-challenge showed that most vaccine-treated groups exhibited significantly increased protection by demonstrating reduced numbers of Brucella in tissues collected from vaccinated groups. Real-time polymerase chain reaction revealed that Brucella antigen expression levels were reduced in the spleen, kidney, and parotid lymph node of vaccinated goats, compared to the non-vaccinated goats. Besides, treatment with vaccine expressing individual antigens ameliorated brucellosis-related histopathological lesions. Conclusions: These results delineated that BLS, Omp19, PrpA, and SOD proteins achieved a definite level of protection, indicating that Salmonella Typhimurium successfully delivered Brucella antigens, and that individual vaccines could differentially elicit an antigen-specific immune response.
본 논문에서는 일반화된 공간천이변조시스템에서 신호 복원 성능의 개선을 위하여 병렬 직교매칭퍼슛 기술을 이용한 신호 검출기법을 제안하고 그 성능을 분석한다. 일반화된 공간천이변조 시스템에서 수신신호의 복원은 압축 센싱에서 성긴신호 복원과 매우 유사하다. 성긴 신호 복원에서 자주 사용되는 직교매칭퍼슛 기법은 매 반복과정에서 수신 신호와 채널 행렬과의 상관도가 높은 인덱스를 송신신호의 Nonzero 인덱스로 1개씩 선택한다. 반면 제안된 POMP기법에서는 수신신호를 이용하여 첫 번째 반복과정에서 채널행렬과의 상관도가 높은 인덱스를 복수(M)개 선택한 후, 선택된 M개의 인덱스를 초기 인덱스로 하는 M개의 OMP과정을 병렬적으로 수행한다. 최종적으로 각 OMP과정에서 복원된 신호 중 수신된 신호와 복원신호사이의 잔차 (Residual)가 가장 작은 후보 신호를 최종 복원 신호로 선택한다. 본 논문에서는 POMP기법에 양자화기법을 결합한 알고리즘도 함께 제안한다. 제안된 POMP알고리즘은 OMP대비 M배의 복잡도를 갖지만 신호 복원 성능은 매우 탁월하다.
Yersinia enterocolitica causes various diseases in humans, including enteritis. The onset of such diseases is closely related with the expression of important virulence factors, particularly outer membrane proteins (OMPs). The expression of OMPs depends on several factors, including temperature, and origin, biotype and serotype of the bacteria. Recently, concerns over food safety have increased along with the demand for the development of sensitive, rapid, and pathogen-specific detection methods. To develop a suitable detection method for Y. enterocolitica isolated from Korean moutainspring water and pig feces, the OMP expression patterns were analyzed phenotypically and immunologically using 12 representative strains from 51 Y. enterocolitica Korean isolates. A 38-kDa OMP was commonly observed in all strains. However, additional OMPs were also observed in different biotypes and serotypes as well as bacterial origins, by incubating Y. enterocolitica at a low temperature. The specificity of the 38-kDa OMP was confirmed by a Western blot analysis with antisera against Y. enterocolitica and Brucella abortus. The results, therefore, indicate that the 38-kDa OMP could be used as a marker for detecting Y. enterocolitica in the environment or for seromonitoring.
Orthogonal matching pursuit (OMP) 알고리듬은 underdetermined 시스템에서 희소 신호를 복구하는 대표적인 greedy 알고리듬으로 많은 관심을 받고 있다. 본 논문에서는 OMP 알고리듬의 반복과정에서 후보 support 집합들을 구성하여 마지막 반복과정에서 최소 잔차를 이용하는 multiple candidate matching pursuit (MuCaMP) 기법을 제안한다. MuCaMP 가 완벽한 신호 복원을 보장하기 위한 restricted isometry property (RIP)를 이용한 충분조건, ${\delta}_{N+K}<\frac{\sqrt{N}}{\sqrt{K}+3\sqrt{N}}$을 제시한다. 실험을 통해 후보 support 집합들의 크기에 따른 성능과 MuCaMP의 복원 성능이 기존의 기법들에 비해 우수함을 확인하였다.
참외과피추출물의 천연갈변저해제로서의 가능성을 확인하기 위하여 참외과피추출물 및 ascorbic acid를 적용한 양송이의 저장 중 품질변화를 확인하였다. 양송이를 각 처리구별 PP film으로 포장하여 4 및 $15^{\circ}C$에서 저장하면서 포장 내 기체조성, 경도, 표면 색 및 관능평가를 관찰하였다. 그 결과 기체조성 또는 경도의 변화에 있어서는 처리구별 큰 차이 없이 저장온도 또는 포장재에 따른 영향을 받았으나, 갈변저해효과에 있어서는 참외과피추출물을 처리하였을 때 양성대조군으로 사용한 ascorbic acid 보다 표면 색 유지에 효과적이었다. 또한 관능평가에서도 참외과피추출물을 적용한 처리구(OMP, OMP+AA)에서 저장기간 동안 높은 점수를 유지하였다. 참외과피에 함유되어있는 총 페놀과 플라보노이드의 함량을 조사한 결과, 참외과피추출물의 총 페놀함량은 플라보노이드 함량보다 4배 정도 높게 나타났다. 참외과피추출물의 항산화 및 항갈변 활성은 DPPH 라디칼 소거활성과 PPO 저해활성이 낮은 농도에서도 높은 활성을 나타냈으나 ABTS 라디칼 소거활성과 구리킬레이트 활성에서는 비교적 높은 농도에서 활성을 보였다. 이에 따라 참외과피추출물을 천연갈변저해제로서 양송이에 적용하였을 때 효과적으로 양송이의 갈변을 저해할 수 있음을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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