Objectives : The gnarl of Pinus densiflora, called Songjeol in Korea, has been used as a medicinal herb for the treatment of inflammatory-related diseases such as arthralgia, myalgia and bruise. However, the molecular actions and mechanisms have not been clearly investigated. The aim of this study was to clarify the anti-inflammatory activity of Pinus densiflora gnarl pharmacopuncture (PDGP) in lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW264.7 cells. Methods : Cytotoxicity was assessed by XTT assay. The amount of nitric oxide (NO) production was determined by nitrite assay. The mRNA expressions of interleukin-$1{\beta}$ (IL-$1{\beta}$), interleukin-6 (IL-6), cyclooxygenase-2 (COX-2) and heme oxygenase-1 (HO-1) were analyzed by RT-PCR. Reactive oxidative species (ROS) generation was measured using the fluorescence microscopy. In addition, inducible nitric oxide synthase (iNOS) and redox factor-1 (Ref-1) protein expressions were detected by Western blotting. Results : PDGP inhibited NO production and ROS generation in LPS-stimulated RAW264.7 cells. At the mRNA level, PDGP suppressed IL-$1{\beta}$, IL-6 and COX-2 expression. On the other hand, PDGP induced HO-1 mRNA expression. Furthermore, PDGP suppressed iNOS and Ref-1 protein expression. Conclusions : This result suggests that PDGP can act as a suppressor agent on NO and iNOS through induction of HO-1, and play an useful role in blocking inflammatory responses.
The effect of nitric oxide (NO) on antioxidant system and protective mechanism against oxidative stress under UV-B radiation was investigated in leaves of maize (Zea mays L.) seedlings during 3 days growth period. UV-B irradiation caused a decrease of leaf biomass including leaf length, width and weight during growth. Application of NO donor, sodium nitroprusside (SNP), significantly alleviated UV-B stress induced growth suppression. NO donor permitted the survival of more green leaf tissue preventing chlorophyll content reduction and of higher quantum yield for photosystem II than in non-treated controls under UV-B stress, suggesting that NO has protective effect on chloroplast membrane in maize leaves. Flavonoids and anthocyanin, UV-B absorbing compounds, were significantly accumulated in the maize leaves upon UV-B exposure. Moreover, the increase of these compounds was intensified in the NO treated seedlings. UV-B treatment resulted in lipid peroxidation and induced accumulation of hydrogen peroxide ($H_2O_2$) in maize leaves, while NO donor prevented UV-B induced increase in the contents of malondialdehyde (MDA) and $H_2O_2$. These results demonstrate that NO serves as antioxidant agent able to scavenge $H_2O_2$ to protect plant cells from oxidative damage. The activities of two antioxidant enzymes that scavenge reactive oxygen species, catalase (CAT) and ascorbate peroxidase (APX) in maize leaves in the presence of NO donor under UV-B stress were higher than those under UV-B stress alone. Application of 2-(4-carboxyphenyl)-4, 4, 5, 5-tetramethylimidazoline-1-oxyl-3- oxide (PTIO), a specific NO scavenger, to the maize leaves arrested NO donor mediated protective effect on leaf growth, photosynthetic pigment and free radical scavenging activity. However, PTIO had little effect on maize leaves under UV-B stress compared with that of UV-B stress alone. $N^{\omega}$-nitro-L-arginine (LNNA), an inhibitor of nitric oxide synthase (NOS), significantly increased $H_2O_2$ and MDA accumulation and decreased antioxidant enzyme activities in maize leaves under UV-B stress. This demonstrates that NOS inhibitor LNNA has opposite effects on oxidative resistance. From these results it is suggested that NO might act as a signal in activating active oxygen scavenging system that protects plants from oxidative stress induced by UV-B radiation and thus confer UV-B tolerance.
NO는 대식세포의 면역조절에서 중요한 역할을 하며 iNOS의 과발현시 NO가 다량으로 발생을 하며 결과적으로 NO의 증가는 다양한 염증성 질환을 유발한다. 이에 본 연구에서는 식용 및 약용버섯인 상황, 차가, 능이, 노루궁뎅이 그리고 청버섯을 이용하여 RAW264.7 세포에 LPS로 유도 된 NO의 생성에 억제 활성을 통한 항염증 효능 및 그 기작을 분석하였다. 5종의 버섯 중 노루궁뎅이버섯 열수 추출물의 NO 저해 활성이 가장 우수함을 확인하였다. 노루궁뎅이버섯 열수 추출물은 또한 LPS로 유도된 iNOS, COX-2 등 염증유발 인자의 발현량을 감소시켰다. 이러한 결과는 버섯류의 생리활성을 구체적으로 제시한 것으로, 버섯류를 이용한 생리 기능성 바이오 소재 개발 및 조리연구를 위한 기초자료로 널리 활용되리라 사료된다.
대한약학회 2002년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2
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pp.248.3-249
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2002
Nitric oxide (NO) has been shown to play an important role in the regulation of vascular tone. platelet function. neurotransmission. and immune function. NO is synthesized from the L-arginine by NO synthase (NOS). Three distinct isoforms of NOS have been identified: calcium/calmodulin-dependent endothelial (eNOS) and neuronal (nNOS) isoforms which are constitutive and produce small quantities of NO, and an inducible isoform (iNOS) which is markedly induced in response to lipopolysaccharide (LPS) or inflammatory cytokines. (omitted)
Kim, Hyang-Rim;Jeong, Yeon-Hee;Min, Hye-Young;Park, Go-Woo-Ni;Lee, Sang-Kook;Seo, Eun-Kyoung
대한약학회:학술대회논문집
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대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2-2
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pp.194.4-195
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2003
Two phenolic flavonoids were isolated from the traditional medicine of Eastern Asia, Caesalpinia sappan L (Leguminosae). Brazilin (1) showed a significant inhibitory activity against inducible Nitric Oxide Synthase (iNOS) in lipopolysaccharides (LPS)-induced macrophage RAW 264.7 cells with an IC$\sub$50/ value of 1.68 mg/ml, which is more potent than the positive control, L-N$\^$6/-(1-iminoethyl)lysine (IC$\sub$50/ 3.49 mM). On the other hand, caesalpine J (2) was found to be inactive in the present iNOS assay system despite of their structural similarities. (omitted)
This study was conducted to determine whether L-arginine (Arg) supplementation could improve intestinal function in weaned pigs after an Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS) challenge. Treatments included: i) non-challenged control (CONTR, pigs fed a control diet and injected with sterile saline); ii) LPS-challenged control (LPS, pigs fed the same control diet and challenged by injection with Escherichia coli LPS); iii) LPS+0.5% Arg (pigs fed a 0.5% Arg diet and challenged with LPS); and iv) LPS+1.0% Arg (pigs fed a 1.0% Arg diet and challenged with LPS). On d 16, pigs were administrated with LPS or sterile saline. D-xylose was orally administrated at 2 h following LPS challenge, and blood samples were collected at 3 h following LPS challenge. At 6 h post-challenge, pigs were sacrificed and intestinal mucosa samples were collected. Supplementation of Arg attenuated LPS-induced damage in gut digestive and barrier functions, as indicated by an increase in ileal lactase activity, and duodenal and ileal diamine oxidase activities (p<0.05). Arg administration also prevented the increase of jejunal malondialdehyde content and the decrease of ileal superoxide dismutase activity by LPS challenge (p<0.05). Furthermore, the jejunal nitric oxide level and inducible nitric oxide synthase activity were also improved after Arg supplementation (p<0.05). These results indicate that Arg supplementation has beneficial effects in alleviating the impairment of gut function induced by LPS challenge.
In the present study, ten herbal extracts, Citrus unshiu Markovich, root and stem of Berberis koreana, Morus alba, Dendrobium moniliforme, Aster gramineus, A. scabar, Alisma canaliculatum, Fallopia japonica and Origanum (O.) vulgare were determined to examine anti-mycoplasmal activity. Among them, O. vulgare extract (OVE) showed strong anti-mycoplasmal activity and was analyzed by gaschromatography/ mass spectrometry (GC/MS). As the results, OVE was consisted of carvacrol (68.78%), o-cymene (9.80%), terpinene (7.61%) and thymol (4.03%) as main ingredients. To investigate inflammatory activity by intact pathogenic Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyo) at 30 $\mu$g/ml, we examined induced transcription of proinflammatory cytokines such as cyclooxygenase-2, tumor necrosis factor-a, interleukin (IL)-1, IL-6 and inducible nitric oxide synthase in RAW 264.7 cells. With the above results, we further investigated whether OVE could reduce inflammation induced by M. hyo at minimal inhibitory concentration. The result showed that 32 $\mu$g/ml of OVE inhibited nitric oxide production by 60%. This study also evaluated the combination of OVE with antibacterials against M. hyo for application. Based on these results, it could be concluded that M. hyo induces inflammation in RAW 264.7 cells and OVE protects this inflammation, indicating that OVE may be useful for industrial animals.
Natural products, which have been used for the treatment of hypertension, diuresis and nephritis in traditional oriental medicine, were selected for the screening of nitric oxide (NO) production in endothelial cells and kidney tissues in vitro as well as in vivo by measuring the conversion of [$\^$14/C]-L-arginine to [$\^$14/C]-L-citrulline, a coproduct of the enzyme reaction with NO. Confluent monolayer of endothelial cells were used for the screening of 16 natural products. Among the natural products, Zizyphus jujuba and Codonopsis pilosula stimulated endothelial NO synthase activity. Thus, both confluent monolayer of endothelial cells and kidney homogenates (glomeruli, cortical tubules, meudllae) were treated with Zizyphus jujuba and Codonopsis pilosula (final concentration 10 $\mu\textrm{g}$/$m\ell$) and NO releases were compared with those by receptor - dependent agonists, bradykinin and ADP and receptor - independent calcium ionophore A23187 in vitro. In rat experiment, NO releases in glomeruli, cortical tubules and medullae and plasma renin activity were assessed after intraperitoneal injection of Zizyphus jujuba and Codonopsis pilosula (10 mg/kg/day for 4 days). As a result, both Zizyphus jujuba and Codonopsis pilosula significantly increased NO releases in cultured endothelial cells, kidney tissues in vitro as well as in vivo. Stimulation of NO releases by Zizyphus jujuba and Codonopsis pilosula was similar to those by receptor - dependent agonists, bradykinin and ADP and receptor - independent calcium ionophore A23187 in cultured endothelial cells. However, plasma renin activity was not influenced by these two natural products. In conclusion, stimulatory effects of Zizyphus jujuba and Codonopsis pilosula on NO release in kidney may contribute their hypotensive effects and antinephritic action possibly by increasing renal blood flow.
Background and Objective: Coptidis Rhizoma is a medicinal herb known for its antioxidant and anti-inflammatory effect. The purpose of this study was to examine the effects of CR on the experimental burn elicitation in vitro and in vivo. Material and Methods: In order to know the antioxidant effect on skin cell of mice after burn elicitation, superoxide dismutase (SOD) activity was measured. In vitro, the RAW 264.7 macrophage cells were treated with lipopolysaccharides for experimental inflammation. iNOS mRNA expression was observed after CR-treatment. In order to know effects on the skin regeneration in the burned mice, we counted the nitric oxide (NO) in blood. We also observed the histological structure in the epidermal basal layer and the dermal section, and we studied changes of angiogenesis in the capillaries surrounding the basal layer and dermal papilla. The changes of transcription of iNOS mRNA (inducible nitric oxide synthase mRNA) and changes of NF-${\kappa}$B (nuclear factor ${\kappa}$B) p65 positive reaction were also observed to investigate the changes of the stress in the skin. Results: The results indicated that CR has significant effects on the antioxidant effect on skin cells of mice after burn elicitation by increasing SOD activity in the in vitro test. It seemed that CR decreased the amount of NF-${\kappa}$B which induced the iNOS mRNA dose-dependently and suppress activating NO and angiogenesis. Furthermore, CR facilitated the process of skin recovery after experimental burn. Conclusion: CR can be applied for burned skin via antioxidant effect and skin regeneration.
Background: Panax ginseng Meyer (Araliaceae) is a highly valued medicinal plant in Asian regions, especially in Korea, China, and Japan. Chemical and biological studies on P. ginseng have focused primarily on its roots, whereas the seeds remain poorly understood. This study explores the phytochemical and biological properties of compounds from P. ginseng seeds. Methods: P. ginseng seeds were extracted with methanol, and 16 compounds were isolated using various chromatographic methods. The chemical structures of the isolates were determined by spectroscopic data. Antiinflammatory activities were evaluated for triterpene and steroidal saponins using lipopolysaccharide-stimulated RAW264.7 macrophages and THP-1 monocyte leukemia cells. Results: Phytochemical investigation of P. ginseng seeds led to the isolation of a novel triterpene saponin, pseudoginsenoside RT8, along with 15 known compounds. Pseudoginsenoside RT8 exhibited more potent antiinflammatory activity than the other saponins, attenuating lipopolysaccharide-mediated induction of proinflammatory genes such as interleukin-1β, interleukin-6, inducible nitric oxide synthase, cyclooxygenase-2, and matrix metalloproteinase-9, and suppressed reactive oxygen species and nitric oxide generation in a dose-dependent manner. Conclusion: These findings indicate that pseudoginsenoside RT8 has a pharmaceutical potential as an antiinflammatory agent and that P. ginseng seeds are a good natural source for discovering novel bioactive molecules.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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