Rhodococcus sp. JDC-11, capable of utilizing di-n-butyl phthalate (DBP) as the sole source of carbon and energy, was isolated from sewage sludge and confirmed mainly based on 16S rRNA gene sequence analysis. The optimum pH, temperature, and agitation rate for DBP degradation by Rhodococcus sp. JDC-11 were 8.0, $30^{\circ}C$, and 175 rpm, respectively. In addition, low concentrations of glucose were found to inhibit the degradation of DBP, whereas high concentrations of glucose increased its degradation. Meanwhile, a substrate utilization test showed that JDC-11 was also able to utilize other phthalates. The major metabolites of DBP degradation were identified as monobutyl phthalate and phthalic acid by gas chromatography-mass spectrometry, allowing speculation on the tentative metabolic pathway of DBP degradation by Rhodococcus sp. JDC-11. Using a set of new degenerate primers, a partial sequence of the 3,4-phthalate dioxygenase gene was obtained from JDC-11. Moreover, a sequence analysis revealed that the phthalate dioxygenase gene of JDC-11 was highly homologous to the large subunit of the phthalate dioxygenase from Rhodococcus coprophilus strain G9.
Poblete-Castro, Ignacio;Rodriguez, Andre Luis;Lam, Carolyn Ming Chi;Kessler, Wolfgang
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제24권1호
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pp.59-69
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2014
One of the major challenges in metabolic engineering for enhanced synthesis of value-added chemicals is to design and develop new strains that can be translated into well-controlled fermentation processes using bioreactors. The aim of this study was to assess the influence of various fed-batch strategies in the performance of metabolically engineered Pseudomonas putida strains, ${\Delta}gcd$ and ${\Delta}gcd-pgl$, for improving production of medium-chain-length polyhydroxyalkanoates (mcl-PHAs) using glucose as the only carbon source. First we developed a fed-batch process that comprised an initial phase of biomass accumulation based on an exponential feeding carbon-limited strategy. For the mcl-PHA accumulation stage, three induction techniques were tested under nitrogen limitation. The substrate-pulse feeding was more efficient than the constant-feeding approach to promote the accumulation of the desirable product. Nonetheless, the most efficient approach for maximum PHA synthesis was the application of a dissolved-oxygen-stat feeding strategy (DO-stat), where P. putida ${\Delta}gcd$ mutant strain showed a final PHA content and specific PHA productivity of 67% and $0.83g{\cdot}l^{-1}{\cdot}h^{-1}$, respectively. To our knowledge, this mcl-PHA titer is the highest value that has been ever reported using glucose as the sole carbon and energy source. Our results also highlighted the effect of different fed-batch strategies upon the extent of realization of the intended metabolic modification of the mutant strains.
Venugopalan, Vijayalatha;Tripathi, Subhash K.;Nahar, Pradip;Saradhi, P. Pardha;Das, Rakha H.;Gautam, Hemant K.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제23권2호
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pp.237-245
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2013
Canthaxanthin (cx) is a potent antioxidant that is chemically synthesized at the industrial scale and has imperative applications in the cosmetic and feed industries. An orange pigmented mesophilic bacterium, designated as K44, was isolated from soil samples of Kargil, India. Biochemical tests, 16S rRNA gene sequencing, and FAME analysis of the bacterium indicated it to belong in the genus Dietzia and is distinct from human isolates. The strain showed 98% 16S rRNA gene sequence homology with Dietzia maris DSM 43102. High-performance liquid chromatography profile of the pigments isolated from K44 showed two major peaks absorbing at 465.3 and 475 nm. The liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) analysis of both these peaks revealed their m/z to be 564. The molecular weights, LC-MS/MS fragmentation patterns, and ${\lambda}_{max}$ of these fractions corresponded to all-trans- (475 nm) and 9-cis-(465.3 nm) cx isomers. The antioxidant activities of cis- and trans-cx isomers isolated from this bacterium were found to differ, where the cis-isomer showed higher free radical, superoxide radical, and reactive oxygen species scavenging activities than the alltrans- isomer, suggesting that 9-cis-cx is more effective as an antioxidant than the all-trans-cx.
Cordyceps militaris, a member of Ascomycota, a mushroom referred to as caterpillar Dong-chung-ha-cho, is commercially valuable because of its high content of bioactive substances, including cordycepin, and its potential for artificial cultivation. Cordycepin (3'-deoxyadenosine) is highly associated with the pharmacological effects of C. militaris. C. militaris is heterothallic in that two mating-type loci, idiomorph MAT1-1 and MAT1-2, exist discretely in two different spores. In this study, nine C. militaris strains were mated with each other to prepare newly bred strains that produced a larger amount of cordycepin than the parent strains. Nine strains of C. militaris were identified by comparing the internal transcribed spacer sequence, and a total of 12 single spores were isolated from the nine strains of C. militaris. After the MAT idiomorph was confirmed by PCR, 36 mating combinations were performed with six single spores with MAT1-1 and the others with MAT1-2. Eight mating combinations were successfully mated, producing stroma with perithecia. Cordycepin content analysis of all strains by high-performance liquid chromatography revealed that the KASP4-bred strain produced the maximum cordycepin among all strains, regardless of the medium and stroma parts. Finally, universal rice primer-PCR was performed to demonstrate that the bred strains were genetically different from the parental strains and new C. militaris strains. These results may be related to the recombination of genes during mating. The newly produced strains can be used to meet the industrial demand for cordycepin. In addition, breeding through mating suggests the possibility of producing numerous cordycepin-producing C. militaris strains.
Glycosyltransferases (GTs) from microbes are an emerging and rich source for efficient glycol-transformation of natural/unnatural compounds. Here, we probed the catalytic capability and substrate promiscuity of BmmGT1 from marine-derived Bacillus methylotrophicus B-9987. The regioselectivity of BmmGT1 on macrolactin A (1) was explored by optimization of the reaction conditions, in which a series of O-glycosylated macrolactins (1a-1e) were generated, including two new di/tri-O-glucosyl analogs (1b and 1e). Furthermore, BmmGT1 was able to catalyze the glycosylation of the thiol (S-) or amine (N-) sites of phenolic compounds (2 and 3), leading to the generation of N- (2a) or S-glycosides (3a and 3b). The present study demonstrates that BmmGT1 could serve as a potential enzyme tool for O-, N-, or S-glycosyl structural diversification of compounds for drug discovery.
횡방향철근은 기둥의 소성힌지구간에 충분한 구속효과, 축방향철근의 좌굴방지와 연성거동을 확보하기 위해 적용된다. 기둥에서 사각형 후프 띠철근과 보강 띠철근의 조립 및 배근방법은 시공이 까다롭고 많은 횡방향철근량이 요구된다. 본 논문에서, 이러한 문제점들을 해결하기 위하여 장방형 단면과 플레어 기둥의 횡구속을 위한 장방형 후프 띠철근을 사용한 새로운 횡구속 방법이 제안되었다. 개발된 장방형 후프 띠철근 상세는 장방형 단면과 플레어 기둥의 시공성과 경제성을 향상시켜줄 수 있는 하나의 대안으로서 적용 가능한 것으로 판단된다. 본 연구의 최종목적은 철근콘크리트 교각의 시공성 향상을 위한 장방형 후프 띠철근 상세의 제시와 실험적 기초자료의 제공과 함께 하중단계별 성능 및 손상평가를 위한 정량적 수치와 경향을 제공하기 위한 것이며, 극한변위, 극한드리프트비율, 변위연성도, 응답수정계수, 등가점성감쇠비, 잔류변형지수, 유효강성 등의 주요 내진성능평가 변수들에 대한 분석결과를 나타내었다.
For reliable determination of mechanical characteristics of adhesively bonded joints used e.g. as input data for computer-aided design of complex components, the thick-adherend tensile-shear test according to ISO 11003-2 is the most important material testing method. Although the total displacement of the joint is measured across the polymer layer directly in the overlap zone in order to minimize the influence of the stepped adherends, the substrate deformation must be taken into account within the framework of the evaluation of the shear modulus and the maximum shear strain, at least when high-strength adhesives are applied. In the standard ISO 11003-2 version of 1993, it was prescribed to perform the substrate deformation correction by means of testing a one-piece reference specimen. The authors, however, pointed to the excessive demands on the measuring accuracy of the extensometers connected with this technique in industrial practice and alternatively proposed a numerical deformation analysis of a dummy specimen. This idea of a mathematical correction was included in the revised ISO 11003-2 version of 2001 but in the simplified form of an analytical method based on Hooke's law of elasticity for small strains. In the present work, it is shown that both calculation techniques yield considerably discordant results. As experimental assessment would require high-precision distance determination (e.g. laser extensometer), finite element analyses of the deformation behavior of the bonded joint are performed in order to estimate the accuracy of the obtained substrate deformation corrections. These simulations reveal that the numerical correction technique based on the finite element deformation modeling of the reference specimen leads to considerably more realistic results.
본 연구에서는 시멘트풀 및 모르타르의 초기재령 변형률 거동을 측정할 수 있는 경제적인 매입형 링센서를 고안하였고, 이를 활용하여 시멘트 풀 및 모르타르의 응결시간을 편리하게 측정할 수 있는 방법을 제안하고자 하였다. W/C가 0.30, 0.35, 0.40, 0.45인 배합들에 대하여 실험 연구를 수행하였다. 기존의 비카침과 관입저항침에 의해 측정된 응결시간과 제안된 방법에 의한 응결시간을 비교하였다. 실험결과에 따르면 개발된 링센서는 초기의 팽창거동이 수축거동으로 변화하는 수축의 시작시점을 정확하게 측정할 수 있었다. 또한, 수축 시작 시점을 응결에 대한 합리적인 기준으로 간주할 수 있었으며, 이는 기존 방법의 초결시간과 유사한 것으로 평가되었다.
최근 인터넷 사용자 수의 증가에 따른 백본망의 트레픽 증가와 다양한 어플리케이션의 등장으로 많은 대역폭을 요구 하게 되었고 그에 따른 고속의 백본 네트워크가 필요하게 되었다. 이러한 요구를 수용하기 위한 차세대 인터넷으로 고려되고 있는 MPLS(MultiProtocol Label Switching)와 사용자 서비스를 위해 네트워크 자원을 효율적으로 사용하기 위한 멀티캐스트 기술이 요구된다. 그러나 기존의 IP Multicast 기술은 품질 보장 서비스를 지원하는데 한계가 있기 때문에, 고품질 멀티 캐스트 서비스를 위하여 QoS및 Traffic Engineering을 보장하는 MPLS 기술을 확장하는 노력이 이루어지고 있다. 그리고 MPLS 환경에서 멀티캐스트 서비스 제공은 MPLS 레이블 수의 부족과 멀티캐스트 고유의 속성인 확장성 문제가 발생하게된다. 이를 위한 개선책으로 LDP에 멀티캐스트 필드를 추가하여 중간노드에서 동일한 LSP 멀티캐스트 패킷에 동일한 레이블을 할당하는 Label Aggregation 알고리즘을 제안하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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