Kim, Dong-Ik;Park, Hee-Jung;Eo, Hyun-Seoun;Suh, Soo-Won;Hong, Ji-Hee;Lee, Min-Jae;Kim, Jong-Sung;Jang, In-Sung;Kim, Byung-Soo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제14권4호
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pp.707-714
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2004
How to improve the cell culture method on scaffolds is important in the tissue engineering fileld. In this study, we optimized seeding and culture methods to vascular smooth muscle cells (VSMCs) on biodegradable polymer scaffold. The primary culture of VSMCs obtained from canine external jugular vein was accomplished by applying the explant-derived method. The primary cultured VSMCs were seeded into scaffolds and then cultured by using various different methods; static or dynamic seeding, static or dynamic culture. The difference in proliferative response of VSMCs was analyzed with an alamar blue assay. Cell-polymer construct was examined by histochemical method and scanning electron microscopy. Mesh type scaffold ($10 \times 10 \times0.4 mm$) was made of polyglycolic acid (PGA) suture thread. The PGA mesh type scaffold was 45% in porosity, and 0.03 g in weight. The primary cultured VSMCs were confirmed with immunohistochemical staining using monoclonal anti-$\alpha$-smooth muscle actin. The density and distribution of proliferated VSMCs within the scaffold and cellular adherence on the surface of the scaffold showed better results in the static seeding condition than in the dynamic condition. Under the same condition of seeding method as the static condition, the dynamic culture condition showed enhanced proliferation rates of the VSMCs when compared to the static culture condition. In conclusion, to improve the VSMCs proliferation in vitro, static seeding is better than the dynamic condition. In the culture condition, however, culture under the dynamic status is better than the static condition. This was a pilot study to manufacture artificial vascular vessel by tissue engineering.
The limitations of food production caused by global warming, consumption of soil fertility, and land shortage have demanded the development of alternative foods. Their market has been increasing, and in particular, there is an urgent need for an alternative meat. Among them, the non-slaughtered cell-cultured meat that can be manufactured in the laboratory, that is, cultured meat, is in the spotlight, which can solve the problem of meat consumption while including the advantages of meat. It is classified into minced cultured meat and structured one with a structure similar to that of real meat. The latter is currently facing limitations related scaffolds, cells, and the multiplicative problems, and many attempts are being made to solve them. The complex problem is related to secure texture and taste as well as structural similarity to actual meat. To solve the problems, it is necessary to lay emphasis on cells, there are fat cells and vascular cells, and the most fundamental cells, muscle cells. These are the main cells that control the texture and nutrients of meat, and unlike other cells, they grow in the form of fibers. A myofibril (also known as a muscle fibril) is a basic rod-like organelle of a muscle cell, which is a quantitatively major component of meat, and one of the tissues that maintain the appearance of the body and bones. In this review article, we focused on the growth of muscle cells into long, tubular cells known as muscle fibers using the fabricated fibrous scaffold, and reviewed not only research results for muscle tissue engineering but also various results in the related fields for the last five years.
The purpose of this study is to analyze the spine stability by comparing muscle activation in various scaffold working conditions. The independent working conditions were designed by two levels of working height, existence and absence of safety handrail, and the two levels of expertise. The corresponding activities of the agonist and antagonist muscles of spine were simultaneously recorded by using EMG. As results, novice worker showed increased muscle activity while doing the task on the 2nd floor, absence of handrail. And expert showed the increase of co-contraction while working on the 2nd floor without handrail. Such co-contraction was found to increase the spine stability when the working condition become risky. On the other hand, the co-contraction was prolonged, the spine muscle fatique and disc pressure could be increased, which would increase the risk of musculo-skeletal disorder. The results of co-contraction in this study indicates that the motor control system responds to maintain the stability of the spine particularly when workers cognitively recognize the danger of falling or imbalance. This study also quantitatively accounted for the biomechanical cause of LBP among workers who has to prevent themselves from falling. Therefore, if can be said that safe environment preventing falling can also prevent workers from MSDs as well. Such knowledge can be applied to design ergonomic workplace environment as well as movable scaffold.
조직공학 기술은 in vitro와 in vivo에서 초기 세포 부착과 차후의 조직형성을 위해 3차원적인 지지체로서 다공성의 생분해성 담체의 사용이 필수적이다. 소장점막하조직(small intestinal submucosa, SIS)은 고유의 인장력과 생체적합성 때문에 생체물질로서 사용될 잠재력을 가지고 있는 콜라겐 조직이다. 근육유래 줄기세포는 배양조건에 따라 골세포, 연골세포, 및 근육세포 등으로 분화가 가능하다고 알려져 있다. 본 연구에서는 SIS를 함유한 락타이드-글리콜라이드 공중합체(PLGA) 다공성 지지체를 용매캐스팅/염추출법으로 제조하였고, 전자주사현미경 및 수은다공측정계를 이용하여 특성을 결정하였다 세포의 생존율과 성장률은 MTT(3-(4,5-dimethylthiazole-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium-bromide) 분석 방법을 이용하였고 골로 분화된 세포를 알칼라인 포스파테이즈(ALP) 활성을 측정하여 확인하였다. SIS가 함유된 지지체와 SIS가 함유되지 않은 지지체를 면역결핍 쥐의 피하에 삽입하여 이들의 골형성 정도를 비교하여 보았다. 조직을 파라핀으로 고정시켜 슬라이드를 제조한 후 hematoxylin과 eosin, 트라이크롬 및 본쿠사 염색을 실시하였다. 천연/합성 하이브리드 담체로서의 SIS/PLGA 담체가 PLGA 단독으로 사용하였을 때와 비교하여 볼 때 골형성이 우수하였는데 이는 SIS 내에 함유하고 있는 여러 생체활성분자에 기인한 것으로 추측되었다.
direct bone apposition during bone remodelling. To address these problem, we developed a new ceramic, calcium metaphosphate(CMP), and report herein the biologic response to CMP in subcutaneous tissue, muscle and bone. Porous CMP blocks were prepared by condensation of anhydrous $Ca(H_2PO_4)_2$ to form non-crystalline $Ca(PO_3)_2$. Macroporous scaffolds were made using a polyurethane sponge method. CMP block possesses a macroporous structure with approximate pore size range of 0.3-1mm. CMP blocks were implanted in 8mm sized calvarial defect, subcutaneous tissue and muscle of 6 Newzealand White rabbits and histologic observation were performed at 4 and 6 weeks later. CMP blocks in subcutaneous tissue and muscle were well adapted without any adverse tissue reaction and resorbed slowly and spontaneously. Histologic observation of calvarial defect at 4 and 6 weeks revealed that CMP matrix were mingled with and directly apposed to new bone without any intervention of fibrous connective tissue. CMP blocks didn't show any adverse tissue reaction and resorbed spontaneously also in calvarial defect. This result revealed that CMP had a high affinity for bone and was very biocompatible. From this preliminary result, it was suggested that CMP was a promising ceramic as a bone substitute and tissue engineering scaffold for bone formation.
The object of this study is to investigate the effects of intermittent cyclic stretching on the smooth muscle cells (SMCs) seeded onto aligned multi-layered fibrous scaffold. To make multi-layered fibrous scaffold, polyurethane (PU) and poly(ethylene oxide) (PEO) were electrospun alternatively, then were immersed into distilled water to extract PEO. Various types of scaffolds were fabricated depending on fiber directions, i.e., aligned or randomly oriented. The direction of stretching was either parallel or vertical to the fiber direction for the aligned scaffolds. The stretching was also applied to the randomly aligned scaffolds. The duration of stretching was 2 min with 15 min resting period. During the stretching, the maximum and minimum strain was adjusted to be 10 and 7%, respectively with the frequency of 1 Hz. The bioactivities of cells on the scaffolds were assessed by quantifying DNA, collagen, and glycosaminoglycan (GAG) levels. And the cell morphology was observed by staining F-actin. SMCs under parallel stretching to the fiber direction responded more positively than those in other conditions. From the results, we could explain the morphological effect of a substrate on cellular activities. In addition the synergistic effects of substrate and mechanical stimuli effects were confirmed.
Objective: The purpose of this study is to compare the workload level at each lower limbs posture and suggest the ergonomic workstation guideline for working period by evaluating the imbalanced lower limbs postures from the physiological and psychophysical points of view. Background: Many workers like welders are working in various imbalanced lower limbs postures either due to the narrow working conditions or other environmental conditions. Method: Ten male subjects participated in this experiment. Subjects were asked to maintain 3 different lower limbs postures(standing, squatting and bending) with 3 different working conditions(balanced floor with no scaffold, imbalanced floor with 10cm height of scaffold, and imbalanced floor with 20cm height of scaffold). EMG data for the 4 muscle groups(Retus Femoris, Vastus Lateralis, Tibialis Anterior, Gastrocnemius) from each lower limbs posture were collected for 20 seconds every 2 minutes during the 8 minutes sustaining task. Subjects were also asked to report their discomfort ratings of body parts such as waist, upper legs, lower legs, and ankle. Results: The ANOVA results showed that the EMG root mean square(RMS) values and the discomfort ratings(CR-10 Rating Scale) were significantly affected by lower limbs postures and working time(p<0.05). The correlation was analyzed between the EMG data and the discomfort ratings. Also, prediction models for the discomfort rating for each posture were developed using physical condition, working time, and scaffold height. Conclusion: We strongly recommend that one should not work more than 6 minutes in a standing or squatting postures and should not work more than 4 minutes in a bending posture. Application: The results of this study could be used to design and assess working environments and methods. Furthermore, these results could be used to suggest ergonomic guidelines for the lower limbs postures such as squatting and bending in the working fields in order to prevent fatigue and pain in the lower limbs body.
배경: 혈관질환의 수술에 사용되는 인공 도관의 막힘과 문합부위의 좁아짐 등을 개선하기 위한 방법으로 조직공학적인 방법과 자가 세포를 이용한 인공혈관의 제작이 대안으로 대두되고 있다. 저자들은, 생흡수성이 있는 고분자 폴리머 지지체와 자가 골수세포를 이용한 인공혈관으로 생체실험을 시행하였다. 대상 및 방법: 생분해성 고분자 재료인 poly (lactide-co-${\varepsilon}$-caprolactone) (PLCL)과 poly(glycolic acid) (PGA) fiber로 혈관용 지지체를 제작한 후, 피실험 동물의 골수를 채취하여 혈관 내피 세포와 평활근 세포로 분열시켜 배양한 후 혈관 지지체위에 이식하였다. 만들어진 인공 혈관을 잡견의 복부대동맥에 이식한 후 3주 후에 혈관 조영술을 시행하고, 안락사 후에 혈관을 제거하여 조직학적 검사를 시행하였다. 결과: 6마리의 잡견 중 2마리에서 수술 후 10일에 혈관 지지체의 균열에 의한 대량 출혈로 사망하였다. 나머지 4마리의 잡견은 수술 후 3주까지 생존하였으며, 혈관 조영술상 혈관의 막힘이나 좁아짐은 발견되지 않았다. 인공 혈관의 내면은 작은 혈전들이 붙어 있었으며, 조직학 검사에서 정상 혈관과 유사한 3층의 구조를 나타내었다. 또한 면역화학 검사에서 혈관 내피세포와 혈관 평활근 세포가 재생된 것을 확인하였다. 결론: 고분자 폴리머와 자가 골수세포를 이용한 인공혈관은 생체 내에서 정상혈관과 유사한 모양으로 재생이 가능함을 보여주었다. 그러나, 동맥압력에 견디기 위해 혈관 지지체의 물성에 대한 개량과 충분한 양의 혈관 세포를 얻기 위한 연구가 더 필요할 것으로 생각된다.
The object of this study is to investigate the potential of dual-electrospun polymer based structure for vascular tissue engineering, especially for the medium or small sue blood vessels. Polyurethane(PU), which is known to be biocompatible in this area, was electrospun with poly(ethylene oxide) (PEO). Concentration of PU was fixed at 20wt%, while that of PEO was set from 15 to 35wt%. Morphological features were observed by SEM image and measurement of porosity and cellular responses were tested before and after extracting PEO from the hybrid scaffolds by immersing the scaffolds into distilled water. The diameter of PEO fibers were ranged from 200nm to 500nm. The lower concentration of PEO tended to show beads. The porosity of the scaffolds after extracting PEO was highly increased with higher concentration of PEO as expected. Also, higher proliferation rate of smooth muscle cells was observed at higher concentration of PEO than at the lower concentration and without PEO. As conclusions, this dual electrospinning technique combined with PU and PEO is expected to overcome the current barrier of cell penetration by providing more space for cells to proliferation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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