Genistein is a product of naturally occurring isoflavones at relatively high levels in soybeans. The harmful effects of ethanol are attributed to the induction of biological processes which lead to an increase in the generation of reactive oxygen species in fetuses. In this study, we investigated the effects of genistein ($1{\times}10^{-8}$ and $1{\times}10^{-7}\;{\mu}g$/ml) on gene expressions of the representative cellular antioxidative enzymes in ethanol (1 ${\mu}l$/ml)-treated mouse fetuses during the critical period (embryonic days 8.5~10.5) of organogenesis using a semi-quantitative RT-PCR analysis. The mRNA levels of cytosolic glutathione peroxidase (GPx), phospholipid hydroperoxide GPx, cytosolic CU,Zn-superoxide dismutase (SOD), and mitochondrial SOD were significantly decreased in ethanol-treated fetuses. However, the mRNA levels of ethanol plus genistein-treated fetuses were significantly higher than those of ethanol alone fetuses. These results indicate that genistein can up-regulate the expressions of GPx and SOD mRNAs reduced by the ethanol treatment in fetuses.
It is well known that phenytoin (PHT), a commonly prescribed anticonvulsant, has teratogenicity in experimental animals and human. The major malformation induced by PHT in mouse is cleft palate. The mechanisms of the embryotoxic effects of PHT are unknown. However, PHT and synthetic glucocorticoids share several features with respect to their teratogenicity, and it was known that PHT increased maternal corticosterone level. Therefore PHT-induced cleft palate may be mediated indirectly by elevated maternal corticosterone. Recently it was reported that secalonic acid Dinduced cleft palate and elevated endogenous corticosterone level, and that such effects were antagonized by DMSO. The purpose of this work was to investigate whether the elevated maternal corticosterone is associated with the teratogenicity of PHT in the ICR mouse fetuses by treatment with PHT or PHT plus DMSO. PHT (74mg/kg, BW) was daily administered intraperitoneally on day 10~12 of gestation with and without DMSO(2ml/kg, BW), and the fetal malformation was observed on day 18. Maternal serum corticosterone and fetal PHT levels were determined by HPLC. The results are summarized as follows. 1)The percentage of cleft palate incidense in fetuses following treatment with PHT on day 10~12 of gestation was 51.7%. 2)There was a significant decrement in the cleft palate incidence in fetuses to 30.8% in the group treated with PHT plus DMSO compared with 51.7% in that with PHT alone. 3) Maternal serum corticosterone levels following treatment with PHT on day 10~12 of gestation increased by 116~343% compared with that of vehicle control. Such effect was antagonized by DMSO. 4)PHT concentration in the fetuses was not affected by DMSO. These results suggest that PHT-induced cleft-palate in fetuses seems to be closely associated with the elevation of maternal corticosterone level.
This study was conducted to observe the bone and cartilage formation of mouse fetuses. Mouse litters were sacrificed at pregnant 14th and 18th day and examined for gross skeletal formation using cartilage and bone staining. We identified well developed cartilage formation at the 14th pregnant day in mouse fetus. However mouse fetus at the 14th pregnant day did not show any part of bone formation. At 18th pregnant day, mouse fetus showed well developed body shape and bone and cartilage formation. This results will provide basic information for the evaluation of mouse malfromation and impairment of skeleton formation. Further study will be needed for exact explanation of bone formation from cartilage portion.
2-Bromopropane has been implicated to be the reason for the mass intoxication of workers at an electronic company in Korea. 2-Bromopropane deposition and pattern of DNA replication in mouse fetuses were analyzed after intravenous injection of 2-bromopropane. Injections were administered to pregnant ICR mice in order to cytogenetically evaluate transplacental 2-bromopropane. The results are summarized as follows; 1. A dose-dependent effect on DNA replication was observed equally in the lung, liver and kideneys of fetuses has been exposed to 2-bromopropane transplacentally as reductions of the labeling index. 2. Deposition of transplacentally administred 2-bromopropane in the fetus was lower than placenta.
착상전기(着床前期}의 태아(胎兒)는 방사선(放射線)을 비롯한 많은 환경요인(環境要因)에 대하여 감수성(感受性)이 높은 개체(個體)임에도 불구하고 특히 이 시기는 임신부(姙娠婦)가 자각(自覺)적으로 임신을 감지할 수 없는 시기이기에 이러한 여러 환경유해요인으로부터 의도적으로 피할 수가 없다. 그러므로 착상전기의 영향을 충분히 검토한 후에 의료행위를 취할 것이며 이에 대한 방어(防禦)대책도 검토할 필요가 있다. 종래 까지 방사선에 대한 태아영향에 관한 많은 연구결과에 의하면 방사선 및 그 외의 유해요인에 대한 착상전기의 영향은 배사망(胚死亡)(유산(流産))만이 일어나며 기형(奇形)은 유발(誘發)하지 않는다고 하여 발생학(發生學)등 여러 교과서에서 기형은 기관형성기(器官形戚期)만이 국한(局限)해서 일어나는 영향이라고 단정되어 왔었다. 그러나 이 연구결과 착상전기에 있어서도 기형이 유발하여 오히려 기관형성기((器官形成期)보다도 감수성이 높다는 것이다. 또한 착상전기에서도 기형유발의 시기특이성을 가지며 여러 종류의 기형이 발생한다는 것이 본 연구로부터 밝혀졌다. 실험동물은 ICR Mouse를 사용했다. ICR Mouse는 일반적으로 태아사망 및 기형실험에 널리 사용되는 것이다. 사육조건은 Conventional 한 조건하에서 사육했으며 Mating 방법(方法)은 Female 마우스의 발정기(Sexual Excitement period)에 있는 mouse 질(膣)을 육안 적으로 관찰하여 $AM 6:00{\sim}AM 9:00$시까지 3시간만 mate시켰다. AM9:00시에 Vaginal Plug를 관찰하여 임신을 확인했다. Plug가 확인 된 마우스는 AM8:00시에 수정(Conception)된 것으로 가정하고 이 시점을 임신 0일 0시로 수정 난의 태아연령을 산정했다. 방사선조사는 $^{135}Cs\;{\gamma}-$선을 사용하였으며 임신 마우스의 전신조사를 실시하고 조사한 시기는 각 2, 48, 72, 96hpc이며 조사한 방사선 선량 군은 $0.1{\sim}2.5Gy$이다. 태아영향 관찰지표는 태아 연령은 mate일 오전 8:00시를 임신 0일 0시로 환산하여 태아연령 18일에 임신마우스를 Cervical vertebral dislocation에 의해 도살했다. 도살 후 해부하여 각 임신 마우스별로 관찰했다. 착상 율을 관찰하기 위하여 황체수를 세었고, 태아사망과 생존태아를 구별했다. 자궁 내 사망의 분류는 태아사망을 1) preimplantation death 2) Embryonic death 3) Fetal death로 분류했다. 착상전사망은 수정후 $0{\sim}4.5$일(1세포기${\sim}$배반포후기 부화까지)까지의 사망으로써 난소의 황체수(배란 수)와 착상태아(생존태아, 착상흔, 태반유잔, 흡수태아, 침연태아의 합계)로부터 구할 수 있다. Embonic death는 수정 후 $4.5{\sim}13$일까지의 사망으로써 Implantation sites, Placental remnants, Resorption of fetus로 관찰된 것이다. Fetal death는 수정후 $14{\sim}18$일까지의 사망으로써 Maceration of fetus로 관찰되는 것이다. 통계학적 분석은 각 Group의 착상 을과 자궁 내 사망 율을 산출할 때에는 각 임신마우스에 따라 발생빈도가 크게 다르기 때문에 통계처리에는 Non parametric 검정인 Kluskal Wallis 검정을 사용하여 분석하였다. 또한 개체 Level 영향인 착상을, 태아사망, 기형의 threshold dose의 산정에 대해서는 SAS-Logistic 검정에 따라 통계 분석을 하여 $5%(Ld_5,\;ED_5)$ 및 $10%{\times}2/3$점을 threshold dose로 판단했다. 태아체 중에 대해서는 parametric검정인 t-test검정에 의하여 분석했다. 그 결과 착상전기에서도 기형이 유발하며 특히 시기에 따라 일어나는 때와 일어나지 않는 때가 있음을 본 연구로부터 밝혀졌다. 또한 착상전기의 영향으로써 유발되는 기형은 여러 종류의 기형이 발생함이 밝혀졌다. 특히 이시기는 착상전 사망 및 배(胚)사망은 방사선 선량에 따라 크게 일어나나 태아사망(Fetal death) 및 태아체중은 유의차(有意差)가 없었다.
These experiments were carried out to examine the development capacity of mouse blastomers separated from 2 to 8-cell stage mouse embryos. The female ICR and C3H mice were subjected to supervolution by intraperitoneal injection of PMSG and HCG and then mated with males of the same strain. Embryos were flushed from oviducts and uteri on a proper time after injection of HCG. After removal of zona pellucida with 0.5% pronase, each embryos were separated into 1/2, 1/4, 2/4, 1/8, 2/8 and 4/8 embryos by pipetting or a fine glass needle in Ca2+$.$Mg-2+ free Hoppe& Pitts medium containing 0.02% EDTA. Splitted embryos were cultured in Hoppe & Pitts medium for 48h to 72h. The embryos developed to blastocyst were transferred to recipients on 2 or 3 days of pseudopregnancy. On the other hand, a monozygotic pairs of 1/2 embryos developed to blastocyst after 48h in vitro culture were transferred to recipients on 2 days of pseudopregnancy or pregnancy. The results obtained were summarized as follows. 1. Success rates of separation of blastomeres from 2-, 4- and 8-cell embryos were 91.7%, 68.5-92.4% and 60.8-90.6%, respectively. 2. Development rates of various type of blastomeres to blastocyst after 72h in vitro culture were ranged 64.7-87.1%. 3. Blastocysts obtained after 48h in vitro culture were transferred to recipients on 2 or 3 days of pseudopregnancy. The production rates of live fetuses after transfer on 2 days, only 1/2, 2/4 and 4/8 embryos, were 13.2%, 13.5% and 17.2%, respectively and those of embryos transferred on 3 days were 11.8%, 9.6% and 11.5%, respectively. However, the production rates of live fetuses 1/2 embryos following 72h in vitro culture and transfer to recipients on 2 or 3 days of pseudopregnancy were 7.7% and 12.5%, respectively. 4. From 29 and 31 pairs of 1/2 embryos transferred to recipients on 2 days of pseudopregnancy or pregnancy, 4 sets of monozygotic twins were produced from only pregnant recipients.
PCBs and DDE were determined in the soil samples and the Korean striped field mice, Apodemus agrarius, collected at six localities in Changwon and one locality in Gaduck Island from August 1997 to May 1998. The residual level of PCBs in soils, in which the concentrations of high chlorinated compounds were much higher than those of low chlorinated ones, was highest in the industrial area(IA) in Changwon(60.7 ng/g in average), whereas those of DDE in soils was highest in Gaduck Island(331.9 ng/g in average). However, the levels of each compound detected from soils in the respective remaining places were relatively low. The similar tendency as in the soils was observed in the mice, indicating that the concentration of pollutants in the mice could denote the status of pollution in the terrestrial environment. The composition of PCB congeners in the mice, however, was different from that of soils, but similar to those of other mammals. Moreover, the residual levels of PCBs and DDE in pregnant females from which fetuses were removed were lower than those of males and non-pregnant females. It suggests that these compounds accumulated in pregnant females might have been transferred to the fetuses through placenta as in other mammals. Judging from the above facts, it is suggested that the striped field mouse can be an useful biological index to evaluate the contamination in mammals inhabiting terrestrial environment.
Embryos and fetuses are more sensitive to various environmental agents than adults of children biological effects following the exposure, such as intrauterin, malformation, have intimate conception with the prenatal exposure. There have been many studies on radiation and other agent. However, imformation about the ultrasound effects is limited. It is very important to study the effect of ultrasound with these kinds of fatera in consideration of ultrasound protection and safty. In this study, embryonic and fefal effects of ICR mouse embryos irradiated on 24, 48, 12 and 192 hpc of preimplantation and organogenesis period at the intensity of $0.5{\sim}3\;W/cm^2$ were investigated. Many type of external malformation observed in mouse irradiated on 72 hpc and 192 hpc. However, the embryos irradiated on 24 hpc and 48 hpc, at witch embryos had less then 6 cells and were pre-compaction stage, had no sensitivity for external malformation. The threshold doses of external malformation in mouse irradiated on 72 hpc and 192 hpc, at which embryos were consisted of $16{\sim}32$ cells and neural formation stage, were $1\;W/cm^2$ and $0.5\;W/cm^2$.
본 연구는 2-, 4- 또는 8-세포기 생쥐 수정란으로부터 분리된 단일 할구의 발달 및 완만동결 후 생존능력을 조사하기 위하여 실시하였다. 2-, 4-또는 8-세포기 생쥐 수정란에서 각각 223개, 60개, 188개의 할구를 분리하여 96시간 배양하였는데 이중 2-세포기 수정란으로부터 분리된 할구는 111개(49.8%)가 배반포기까지 발육하였으며, 4-세포기와 8-세포기 수정란으로부터 분리된 할구는 각각 12개(20.0%)와 31개(16.5%)가 배반포기까지 발육하였다. 분리된 할구를 완만 동결한 후 융해하여 배양했을 때 배반포기까지의 발육율은 2-세포기 할구는 27.1%(16/50), 4-세포기 할구는 36.4%(4/11) 그리고 8-세포기 할구는 17.6%(3/17)였으며, 융해 후 할구 회수율은 각각 54.2%(65/120), 46.4%(13/28), 24.3%(17/70)을 나타냈다. 2-세포기 할구를 동결 융해한 후 동기화시킨 생쥐 자궁에 이식하여 정상적으로 발달한 태아를 생산하였다. 본 실험의 결과로 완만동결방법이 생쥐의 할구를 동결 보존하는데 이용될 수 있음을 확인하였다.
The effects of Magnetic resonance imaging (MRI) on mouse embryos at the early stage of organogenesis were investigated. Pregnant ICR mice were exposed on day 8 of gestation to MRI at 0.5 T for 0.5 hour to 3 hours. The mortality rates of embryos or fetuses, the incidence of external malformations, fetal body weight and sex ratio were observed at day 18 of gestation. A significant increase in embryonic mortality was observed after exposure to either 0.5 T MRI for 0.5 hour or 2 hours. However, the exposure to MRI for 1 hour or 3 hours did not induce any significant increase in embryonic mortality when compared with control. External malformations such as exencephaly, cleft palate and anomalies of tail were observed in all experimental groups exposed to each MRI. A statistically significant increase of external malformations was observed in all groups treated with 0.5 T MRI for 0.5 hour and 3 hours. The incidence of external malformations in the mice group exposed to 0.5 T MRI for 0.5-hour was found to be higher than those of mice group exposed to 0.5 T MRI for 2 hours. The effects of MRI on the external malformations might not to be dose-dependent. There was no statistically significant difference in fetal body weight and sex ratio among each MRI exposure groups.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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