Protein affinity membrane was prepared via the coating of chitosan gel on the porous flat polysulfone membrane surface, followed by the immobilization f the reactive dye (Cibacron Blue 3GA) to the chitonsan gel. The maximum protein binding capacity of affinity membrane was about 70${\mu}g/cm^2$ determined by the batch adsorption experiments of human serum albumin (HSA). Using module of this membrane, the characteristics of protein chromatography were investigated through the experiments of elution and frontal chromatography of HSA. This membrane module promises as a chromatography column, since it represented a lower pressure drop and a greater reproducibility. The protein separation ratio was significantly influenced by the flow rate of mobile phase and the injection quantity of HSA. The dynamic protein binding capacity of module decreased from the equilibrium binding capacity with increasing flow rate and approached the value of 15 - 20 ${\mu}g/cm^2$ for flow rates above 6 mL/min.
바이러스는 생물 의약 산업에서 다양한 응용 분야를 가지고 있다. 그들은 살충제 생산, 백신 생산, 유전자 전달, 암 치료제 등에 사용된다. 바이러스의 하류 처리는 그들의 생물학적 및 의약적 응용을 위한 필수 단계이다. 다양한 과정 중에서 바이러스의 정제는 매우 중요하다. 막 크로마토그래피는 이 과정에서 중요한 역할을 한다. 이온 교환 막 크로마토그래피는 주로 사용되는 방법이지만 크기 배제 및 불충분한 정제에 관한 다양한 제한을 가지고 있다. 또한, 이는 인플루엔자와 같은 빠르게 변화하는 바이러스의 균주에 적용될 수 없다. 이 검토는 막 크로마토그래피의 다양한 개선된 방법 또는 대안을 검토한다. 이는 정제, 바이러스 회수율 및 방법의 확장성에 초점을 맞추고 있다.
현재 바이오 분야에서 분리에 대한 수요가 급증함에 따라, 투과율 및 결합능 측면에서 높은 성능을 띠는 막크로마토그래피가 수지 크로마토그래피의 대체 분리 공정으로 부상하고 있다. 실증을 기반으로 하여 막 소재가 결정되는 기존 분리막 공정과 달리, 막크로마토그래피의 경우 분리하고자 하는 목표 물질에 적합한 분리 메커니즘 이해 그리고 이를 기반한 공정 설계가 필요하다. 본 논문에서는 생특이성을 활용하여 선택적으로 거대 분자를 포집하는 친화성 작용, 전하를 활용하여 생분자와 결합하는 이온 교환 작용 그리고 소수성을 활용하여 생분자와 결합하는 소수성 작용과 같은 막크로마토그래피 주요 분리 메커니즘들에 대해 다루고자 한다. 또한 본 논문에서는 단계적 측면에서 또는 소재 측면에 막크로마토그래피 기술설계 시 고려해야할 변인들에 대해서 다루고자 한다.
바이오산업의 발전으로 의약품, 식품 등의 생산 과정의 분리/정제 공정에 사용되어 왔던 기존의 컬럼 크로마토그래피를 대체하여 더 높은 처리효율을 갖는 막 크로마토그래피가 부상하고 있다. 본 연구에서는 서로 다른 기공 크기의 두 가지 상용 셀룰로오스 아세테이트(Cellulose acetate, CA) 분리막을 탈아세틸화 과정을 통해, 리간드의 개질이 용이한 다공성 재생 셀룰로오스 지지체를(Regenerated cellulose, RC) 제조하였다. 음이온 교환능을 부여하고자 grafting을 수행하였으며, 구체적으로는 UV 중합법을 통해 4차 암모늄을 포함하는 음이온 교환 리간드(MAPTAC)를 부착하여 음이온 교환용 흡착막을 제조하였다. 단백질 흡착 용량은 정적 흡착 용량(Static binding capacity, SBC)시험을 통해 총 단백질 흡착 용량을 측정했고, 동적 흡착 용량(Dynamic binding capacity, DBC)을 측정하여 상용막과 비교 평가하였다. 성능 평가 결과 단백질 흡착량은 넓은 표면적에 의해 리간드 밀도가 높은, 기공 크기가 작은 순서로 높게 측정되었고, 상용 CA분리막을 탈아세틸화하고 리간드를 부착시킨 분리막(RC 0.8 + MAPTAC 43.69 mg/ml, RC 3.0 + MAPTAC 36.33 mg/ml)이 상용 막 크로마토그래피 제품(28.38 mg/ml) 대비 높은 흡착 용량을 보였다.
From the outer membrane portion of Gram-negative Klebsiella pneumoniae, the activity of 2-furaldehyde dehydrogenase depending upon beta-nicotinamide adenine dinucleotide was detected. Cytoplasmic membrane was preferentially extracted from crude membrane with $Mg^{2+}$ and Triton X-100, and then outer membrane was collected by ultracentrifugation. The crude enzyme was obtained by solubilization of outer membrane with lysozyme, ethylene diamine tetraacetate and Triton X-100. Thereafter 2-furaldehyde dehydrogenase was partially purified through column chromatography on QAE-Sephadex Q-50 and Sephadex G-150 and the enzyme activity was analyzed by means of high performance liquid chromatography. The optimal pH for the activity of the enzyme was about 9.5 and the optimal temperature was about $85^{\circ}C$. The partially purified enzyme retained tis activity at $85^{\circ}C$ for 5 hours. The optimal concentration of Triton X-100 for the activity of the enzyme was about 1.5% in the reaction mixture.
Light membrane vesicles were isolated from the zucchini hypocotyl by floatation on ficoll density gradients and the proteins were solubilized with Triton X100. Three ATP-hydrolyzing enzymes were partially purified by ion-exchange and gel filtration chromatography and isoelectric focusing. There are plasma membrane-type ATPase whose activity was inhibited by vanadate but not by nitrate, tonoplast-type ATPase which was sensitive to nitrate but insensitive to vanadate and one having a phosphatase activity with a pI value different from that of an acid phosphatase. A fraction was obtained after DEAE-ion-exchange chromatography crossreacting with polyclonal antibodies against Ca2+ -ATPase from human erythrocytes.
열처리된 Salmonella typhimurium 항원을 모델 분석물질로 선택하여 단지 시료만을 첨가함으로써 측정을 수행할 수 있는 1단계 immuno--chromatogra phy 분석시스템이 개발되었다. 개발된 시스템은 분 석물질 특정항체(감지항체)-gold 중합체가 건조된 상태로 축적된 glass fiber membrane(하단), 분석 물질의 다른 epltope를 인지하는 항체(포획항체)와 항 감지항체 특정항체들이 공간적으로 분리되어 고정화된 nitrocellulose membrane(중단) 그리고 흡수대로 선택된 cellulose membrane ( 상단)들로 구성된다. 이와 같은 구성성분들은 분석물질을 포함한 시료수용액이 모세관현상에 의해 연속적으로 이동되도록 부분척으로 포개어 배열되었다. 분석시스템의 성능을 조절하는 변수들은 포획항체의 농도 및 membrane 상의 고정화 위치, membrane 표면처리 와 시료운반용액에 샤용된 비반응성 단백질의 종류, 그리고 중합체의 농도로써 확인되었다. 최적조건하 에서, 시스템의 하부로부터 시료수용액을 흡수 후 15분 이내에 포획항체가 고정화된 membrane 상의 지역에 샌드위치 형상의 항원 항체 면역결합체가 형성되었고 이로부터 발생된 발색신호는 분석물질의 농도에 비례하는 것으로 나타났다. 분석물질의 측정 하한농도는 $1{\times}106$ Salmonella cells/mL인 것으로 나타났다.
Liquid chromatography mass spectrometry is widely employed in proteomics studies. One of such instruments is the Liquid Chromatography (LC)-Matrix-assisted laser desorption ionisation (MALDI)-Time of flight (TOF) or LC-MALDI-TOF/TOF. In this study, this instrument was used to identify the membrane proteins of a protozoan parasite namely Entamoeba histolytica. It causes amoebiasis in human. The E. histolytica trophozoites were cultured prior to the membrane protein extraction using the conventional method, $ProteoPrep^{(R)}$ and $ProteoExtract^{(R)}$ kits. Then, the membrane protein extracts were trypticdigested and analysed by LC-MALDI-TOF/TOF. Approximately, 194 proteins were identified and 27.8% (54) were predicted as membrane proteins having 1 to 15 transmembrane regions and signal peptides by combining all three extraction methods. Also, this study has discovered 3 unique proteins as compared to our previous study which merit further investigation.
Kv 4.2 ion channel protein has an ability to open at subthreshold membrane potentials and to recover quickly from inactivation. That is very important for neuronal signal transmission in vertebrate brain. In order to purify Kv 4.2 protein, the novel purification methods were experimented. The purification procedure utilized chromatography on DE-52 ion exchange column and affinity chromatography on a WGA-Sepharose 4B, and Kv 4.2 affinity column chromatography. It was found that 0.5% (wt./vol.) Triton X-100 detergent in lysis buffer worked well for Kv 4.2 protein solubilization from rat brain membrane. Protein quantitative determination was conducted by BCA method at 562 nm for each purification step to avoid determination interference of protein at 280 nm by detergent. The confirmation of Kv 4.2 existence and amount is performed using by SDS-PAGE/immunoblotting or 96-well dot blotting. The Kv 4.2 without interacting protein that contains carbohydrate, was purified from novel biochemical 3-steps purification method for further research.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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