본 연구에서는 광염성 송사리 Oryzias dancena 성체 및 자어의 염분도 변화에 대한 내성 및 생존 능력을 평가하고자 다양한 염분도 변화 처리를 수행하였다. 담수로부터 고 염분도 조건으로의 급격한 염분도 증가 노출 처리에 대하여 O. dancena 성체는 $40^{\circ}/_{\circ\circ}$염분도 변화 폭까지 생존의 장애 없이 빠르게 적응할 수 있는 것으로 관찰되었으며, 단계적인 순치를 통할 경우 최대 $75^{\circ}/_{\circ\circ}$의 염분도 조건까지 생존이 가능하였다. 염분도의 감소 처리에서 O. dancena 성체는 $60^{\circ}/_{\circ\circ}$ 이상의 급격한 감소 폭에서도 우수한 생존율을 나타내였다. 성체와 달리 O. dancena 자어는 급격한 염분도 증가에 대한 삼투압 조절 능력 (hyper-osmoregulation)이 유의적으로 낮아 약 $15^{\circ}/_{\circ\circ}$ 이상의 염분도 증가에서는 생존에 큰 장애를 겪는 것으로 나타났다. 그러나 초기 발달 단계에 있는 자어의 염분도 변화에 대한 내성은 최초 염분도 처리 농도에 따라 염분도 변화에 대한 내성 폭이 크게 영향을 받는 것으로 관찰되었다. 초기 발달 단계에서 O. dancena 자어는 염분도 증가 보다는 염분도 감소 시 삼투압 조정 능력 (hypo-osmoregulation)이 더 높은 것으로 나타나 $40^{\circ}/_{\circ\circ}$에서 완전 담수로의 염분도 변화에서도 우수한 생존 능력을 보였다.
본 연구에서는 어류병원바이러스 (infectious pancreatic necrosis virus (IPNV), viral hemorrhagic septicemia virus (VHSV), hirame rhabdovirus (HIRRV), infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV), lymphocystis disease virus (LCDV))를 대상으로 바다 송사리 Oryzias dancena의 감수성을 조사하였다. 감염실험 결과, IPNV (실험조건: $15^{\circ}C$ 해수), VHSV ($15^{\circ}C$ 해수) 및 HIRRV ($15^{\circ}C$ 담수)에 침지된 송사리는 각각 30%, 40%, 60%의 누적폐사율이 관찰되었다. 이에 반해 IPNV ($15^{\circ}C$ 담수, $18^{\circ}C$ 해수 및 담수), VHSV ($15^{\circ}C$ 담수, $18^{\circ}C$ 해수 및 담수), HIRRV ($15^{\circ}C$ 해수), IHNV ($15^{\circ}C$ 해수 및 담수), LCDV ($15^{\circ}C$와 $18^{\circ}C$ 해수 및 담수) 침지 실험구 및 대조구에서는 10% 이하의 누적 폐사율이 확인되었다. 생존어와 폐사어를 대상으로 한 바이러스 분리 결과에서는 IPNV, VHSV 및 HIRRV에서 폐사된 개체로부터 바이러스가 분리되었으며, 또한 IPNV와 HIRRV에서 생존한 개체로부터도 바이러스가 분리되었다. 이상의 결과로 바다 송사리는 IPNV, VHSV 및 HIRRV에 감수성이 있음이 확인되었다.
Although the efforts to establish fish embryonic stem cells (ESCs) have been made for a long time, derivation of authentic ESCs that possess pluripotency is still difficult suggesting a need for the stepwise optimization of the methods to establish fish ESCs. Primary culture of the blastomeres from the embryos at blastula stage is a critical step for establishing continuous ESC lines. Here, we evaluated the effects of temperatures and basal media on primary culture of blastula embryo-derived blastomeres in marine medaka (Oryzias dancena). The blastomeres were isolated from the blastula embryos and cultured in various conditions designed by the combination of 4 temperatures including $28^{\circ}C$, $31^{\circ}C$, $34^{\circ}C$, and $37^{\circ}C$ and 2 basal media including Dulbecco's modified eagle's medium (DMEM) and Leibovitz's L-15 medium (L15). With the exception of a case cultured in L15 at $31^{\circ}C$, the rate of primary cell adherence reached 100% when the blastomeres were cultured over $31^{\circ}C$. The period for primary adherence was significantly shorter in the groups cultured in $34^{\circ}C$ and $37^{\circ}C$ than in the ones in $28^{\circ}C$ and $31^{\circ}C$. The proportion of subculture was significantly high in the group cultured in DMEM at $31^{\circ}C$ compared to the other groups. Collectively, we demonstrated that the culture in DMEM at $31^{\circ}C$ was effective to primary culture of the blastomeres derived from blastula embryos.
본 연구는 해수담수화 부산물인 고염해수에 대한 어류의 단기적인 영향을 평가하기 위하여 해양생태독성평가용 표준시험종인 송사리(Oryzias latipes)를 이용하여 급성독성평가 및 행동패턴의 변화를 관찰하였다. 30.0 psu 해수에 순치된 송사리를 7일 동안 고염수에 노출하여 급성독성평가를 수행한 결과, 40.0~80.0 psu에 노출된 송사리의 사망률은 농도-반응의 선형관계가 뚜렷하였다. 반면 40.0 psu 이하의 염분에서는 송사리의 독성반응이 관찰되지 않았으나 50.0 psu 보다 높은 농도에서는 뚜렷한 독성 반응이 나타났다(7-day $LC_{50}$=514 psu). 송사리의 행동 변화 분석은 카메라를 통해 투시된 실시간 배정 영상을 추출하여 현재의 프레임과 차영상을 추출하는 기법을 이용하였다. 고염수 노출에 따른 송사리의 행동변화를 분석한 결과, 40.0 psu와 50.0 psu에 노출되고, 각각 3.1시간과 4.6시간 동안 초기 염분 스트레스를 받은 후에는 안정된 활동패턴을 보였다. 그러나 60.0 psu 보다 높은 농도에 노출된 송사리의 활동량은 염분노출 초기에 급격히 증가하였으며, 50% 가량 사망하였다. 70.0 psu 보다 높은 농도에서 실험생물의 활동량은 노출 후 급격히 증가하였으며, 행동패턴은 심각하게 교란되었고, 12시간 이내에 모든 개체가 사망하였다. 본 연구 결과, 고염해수에 대한 급성독성평가와 행동변화 모니터링 결과는 유의한 연관성이 나타났으며, 따라서 해수담수화에 따른 고염해수의 해양배출은 확산후 최종농도가 50.0 psu 이하로 배출될 수 있도록 조절하여야한다. 또한 카메라 관찰을 통한 영상 분석 기법은 시험생물의 행동변화에 따른 영향을 실시간으로 모니터링할 수 있으므로 조기 경보시스템으로 활용 가지가 높은 것으로 판단된다.
광염성 송사리 Oryzias dancena를 대상으로 서로 다른 염분도 조건이 산란, 발생 및 초기 생존 형질에 미치는 영향을 평가하고자 하였다. 송사리는 본 연구에서 설정한 모든 염분도 조건 (0~70$^{\circ}/_{\circ\circ}$)에서 산란이 가능하였으나 암컷의 산란 참여 빈도 및 산란 주기는 염분도 별로 차이가 관찰되어 담수 (0$^{\circ}/_{\circ\circ}$) 및 70$^{\circ}/_{\circ\circ}$에서 다른 염분도 그룹 (10~50$^{\circ}/_{\circ\circ}$)에 비해 낮은 값을 나타내었다. 조사한 염분도 조건 중 0~30$^{\circ}/_{\circ\circ}$ 구간에서만 수정률의 저하가 없었으며 염분도가 그 이상 높아질 경우 수정률의 유의적인 감소가 관찰되었다. O. dancena 수정란은 본 연구의 0, 15, 30, 45 및 60$^{\circ}/_{\circ\circ}$ 부화조건에서 모두 발생이 가능하였으나 염분도가 상승 할수록 배(embryo)의 생존율과 부화율이 저하되는 경향을 나타내었고, 특히 고염분의 조건에서는 기형 유발과 부화의 지연이 관찰되었다. 부화 자어 대상으로 다양한 염분도 조건에서 부화 후 7 일째까지의 초기 생존율을 관찰한 결과, 45$^{\circ}/_{\circ\circ}$ 이상의 염분도에서 초기 발달 과정 중 유의적인 폐사가 관찰되었으나 이후 안정화되는 경향을 나타내었다.
Optimizing the conditions for stem cell culture is an essential prerequisite for the efficient utilization of stem cells. In the culture of fish embryonic stem cells (ESCs) or ESC-like cells, embryo extracts are important for stable growth, but there is no rule for determining the developmental stage of the embryos used to obtain extracts. Therefore, this study investigated the effects of the developmental stage of extract donor embryos on the culture of Oryzias dancena ESC-like cells. O. dancena ESC-like cells were cultured in different media containing each of four types of embryo extract depending on the developmental stage of the extract donor embryos. Growth, morphology, colony-forming ability, alkaline phosphatase (AP) activity, and embryoid body (EB) formation of the cells were investigated. While the developmental stage of the extract donor embryos did not influence the growth, morphology, AP activity, or EB formation of ESC-like cells, colony-forming ability was affected and the pattern of the effects differed completely between the two ESC-like cells investigated. These results suggest that the developmental stage of extract donor embryos should be selected carefully for the culture of ESC-like cells, according to the research purpose and type of cell line.
본 연구는 온도 변화에 따른 해산송사리, Oryzias dancena의 마취 효과 및 생리적 스트레스 반응을 평가하고, 고온 및 저온에서 최적의 마취 수온을 구명하였다. 해산송사리에서 고온 실험($36{\sim}42^{\circ}C$)과 저온 실험($4{\sim}10^{\circ}C$)을 통해 마취 효과를 조사하였으며, 각 마취수온에서 전어체의 cortisol과 glucose를 측정하였다. 각 수온 마취 실험 후, 전개체는 모두 생존하였으며, 해산송사리의 마취시간은 고온 실험에서 고온 일수록, 저온 실험에서는 저온 일수록 유의적으로 빨랐다(P<0.05). 회복 시간은 유의하게 고온 실험에서 수온이 감소할수록, 저온 실험에서는 수온이 증가할수록 유의적으로 느렸다(P<0.05). 아가미 운동수는, 고온 실험에서 수온이 증가함에 따라 빨랐으며, 저온 실험에서는 수온이 감소할때 빨랐다(P<0.05). 수온이 $38^{\circ}C$ 나 $8^{\circ}C$ 일때의 마취 조건에서 실험직후 전어체 cortisol이 최대치로, 실험후 6시간까지 점진적으로 감소한 반면, 전어체 glucose는 실험후 1시간에 최고치를 보이고 실험후 2시간까지는 감소하였다. 기존의 마취제를 쓰지 않은 본 연구로 인해, 해산송사리의 여타 연구에서 샘플 및 사용자가 보다 더 안전하고 용이한 샘플 취급이 가능할 것으로 사료된다.
The biological effects of carcinogenic polycyclic aromatic hydrocarbons (cPAHs) including benzo[a]pyrene (BaP), dibenzo[a,h]anthracene (DBA), benzo[a]anthracene (BaA), benzo[b] fluoranthene (BbF), benzo[k]fluoranthene (BkF), and indeno[1,2,3-c, d]pyrene (InP) on transcriptomic changes were determined in the liver of Oryzias latipes. Differentially expressed genes (DEGs) by binary exposure to cPAHs (BaP+BaA, BaP+BbF, BaP+BkF, BaP+DbA, BaP+InP) were screened by annealing control primers-based polymerase chain reaction followed by sequence analysis and BLAST searching. The results showed that four DEGs were commonly expressed by cPAHs and they were identified as ribosomal protein S4, coagulation factor II, elongation factor 1 beta, and a predicted protein similar to human immunodeficiency virus type I enhancer binding protein 3. This finding suggests that binary exposure to cPAHs interferes protein synthesis required for fundamental liver functions in fish.
본 연구에서는 비스페놀 A를 사용하여 바다 송사리 Oryzias dancena와 자바 송사리 O. javanicus의 잡종군(ODJ)의 성전환을 유도하였다. 부화 직후의 ODJ에 비스페놀 A를 2.5 mg/L, 5.0 mg/L와 10.0 mg/L의 농도로 56일간 처리한 결과 대조군의 경우 평균 전장이 $18.0{\pm}1.2$ mm로 나타났고 비스페놀 A 처리군에서는 2.5 mg/L로 처리한 경우 $15.0{\pm}2.0$ mm, 5.0 mg/L 처리군은 $13.7{\pm}2.5$ mm, 10.0 mg/L 처리군에서는 $12.8{\pm}2.5$ mm로 나타나 대조군과 비스페놀 A 처리군에서 성장 차이가 관찰되었다. 또한, 처리군 간에서도 비스페놀 A의 농도가 높을수록 성장이 느린 것으로 나타났다. 기형률을 조사한 결과 대조군은 13.6%였고, 비스페놀 A 처리군의 경우 2.5 mg/L는 65.4%로 대조군에 비해 매우 높게 나타났으며, 이보다 농도가 높은 5.0 mg/L와 10.0 mg/L에서는 각각 81.3%와 98.1%로 처리 농도가 높아질수록 기형률이 높게 나타났다. 성전환율을 분석하기 위하여 조직학적 분석을 한 결과 대조군에서 사용된 ODJ 50마리 중 정상 수컷이 47마리였으나, 3마리가 간성(intersex)을 나타내었으며, 비스페놀 A 농도가 2.5 mg/L인 그룹에서 76.9%인 40마리가 간성으로 나타났으며, 23.1%인 12마리가 수컷으로 나타났다. 비스페놀 A 농도 5.0 mg/L와 10.0 mg/L인 그룹에서는 52마리 중 수컷은 한 마리도 나타나지 않았으며, 모든 개체에서 간성이 나타났다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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