• 한국수정란이식학회지
• /
• 제9권1호
• /
• pp.7-14
• /
• 1994

The present experiments on cryopreservation were designed to examine the effects of solution toxicity, equilibration time and cell stages on the post-thaw survival of bovine IVF embryos. The oocytes were matured in vitro(IVM) for 24 hrs. in TCM-199 supplemented with 35 $\mu$g /ml FSH, 10 $\mu$g /ml LH, 1 $\mu$g /ml estradiol-17$\beta$ and granulosa cells at 39$^{\circ}C$ under 5% $CO_2$ in air. They were fertilized in vitro(IVF) by epididymal spermatozoa treated with heparin for 24 hrs., and then the zygotes were co-cultured in vitro(IVC) with bovine oviductal epithelial cells for 7 to 9 days. The bovine IVF embryos were exposed to the EFS solution in one step at room temperature, kept in the EFS solution during different period for toxicity test, vitrified in liquid nitrogen, and thawed rapidly. 1. after the bovine blastocysts were exposed to EFS solution for 2 min. at room temperature and then they were washed in 0.5 M sucrose solution and TCM-199, they were cultured to examined cryoprotectant induced injury during exposure, Most of the embryos(95.0%) developed to reexpanded blastocoels. However, when the exposure time was extended to 5 and 10 min, these development rates dropped dramatically in 5 min. (69.5%) and 10 min. (47.4%), respectively, 2. When the bovine IVF embryos were vitrified in EFS solution after the equilibration for 1 and 2 min. exposure, The embryos to have reexpanded blastocoels following thawing, washing and culture processes were found to he 82.6 and 73.9%, respectively. However, when the exposure time was extended to 3 min, this survival rate dropped to 18.2%. The optimal time for equilibration of bovine IVF blastocysts in EFS solution seemed to he 1~2 min. 3. When the bovine IVF embryos were equilibrated for 1 min. the significantly (P<0. 05) higher post-thaw survival rates were obtained from the embryos of blastocyst stage(81.3%) than morulae stage(5. 1%). The optimal cell stage for viterification with EFS solution proven to he blastocyst stage in bovine IVF embryos. 4. The number of blastomeres of blastocyst stage was examined with nuclear staining with Hoechst 33342 during 7 to 9 days post-insemination. The cell counts of frozen bovine IVF embryos were found significantly(P$\geq$7.5 and those of the fresh embryos 76.6$\geq$7. 1, which were cultured in the sarne period and conditions as frozen embryos.

• 한국가축번식학회지
• /
• 제16권2호
• /
• pp.117-123
• /
• 1992

This Study was carried out ot investigate the effects of concentration and equilibration time of cryoprotective aagents on survival rate of slowly and ultrarapidly frozen porcine embryos. The porcine embryos following dehydration by cryoprotective agents and 0.25M sucrose were slowly freezed(from 2$0^{\circ}C$ to -7$^{\circ}C$/-1$^{\circ}C$/min., from -7$^{\circ}C$ to -35$^{\circ}C$/-0.2$^{\circ}C$/min., from -35$^{\circ}C$ to -38$^{\circ}C$/-0.3$^{\circ}C$/min.) by Cell Freezer and directly plunged into liquid nitrogen and thawed in 38$^{\circ}C$ water bath. Survival rate was defined as development rate to the morula and blastocyst stage after in vitro culture or by FDA test. The results are summarized as follows : 1. The survival rates of porcine embryos after slow frozen-thawing in the freezing medium of 0.25M sucrose added 2.0M glycerol, 3.0M DMSO, 2.0M propanediol or 2.0M glycerol＋2.0M propanediol was 80.6, 84.7, 75.0 or 78.8%, respectively. 2. The survival rates of porcine embryos after slow frozen-thawing in the freezing medium of 0.50M sucrose added 2.0M glycerol, 3.0M DMSO, 2.0M propanediol or 2.0M glycerol＋2.0M propanediol was 80.9, 82.4, 73.1 or 77.1%, respectively. 3. The survival rates of porcine embryos after ultrarapid frozen-thawing in the freezing medium of 0.25M sucroese added 2.0M glycerol, 3.0M DMSO, 2.0M propanediol or 2.0M glycerol＋2.0M propanediol was 65.3, 68.6, 63.2 or 59.9%, respectively. 4. The survival rates of porcine embryos after ultrapid frozen-thawing in the freezing medium of 0.50M sucrose added 2.0M glycerol, 3.0M DMSO, 2.0 propanediol or 2.0M glycerol＋2.0M propanediol was 67.5, 62.9, 56.9, or 62.8%, respectively. 5. The higher survival rate of porcine embryos was attained at the short period ofequilibration time(5min.) in the freezing medium added 0.25M sucrose and 3.0 DMSO compared to those of 10 or 20min. equilibration time in the same condition.

• 한국가축번식학회지
• /
• 제16권2호
• /
• pp.125-131
• /
• 1992

This study was carried out to investigate the effects of concentration and equilibration time of cryoprotective agents on the survival rate of slowly and ultrarapidly frozen porcine embryos. The porcine embryos following dehydration by cryoprotective agents and a various concentration of sucrose were directly plunged into liquid nitrogen and thawed in 38$^{\circ}C$ water bath. Survival rate was defined as development rat to the morula and blastocyst stage after in vitro culture or by FDA test. The results are summarized as follows : 1. The survival rates of porcine embryos after ultrarapid frozen-thawing in the freezing medium of 0.25M sucrose added 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, or 4.0M glycerol was 65.3, 61.8, 64.3, 59.4 or 39.4%, respectively. Addition of 0.25M sucrose into the freezing medium containing 2.0M glycerol showed higher survival rate than those of 2.5~4.0M glycerol. 2. The survival rates of porcine embryos after ultraradpid frozen-thawing in the freezing medium of 0.25M sucroese added 2.0, 2.5, 3.0, 3.5 or 4.0M DMSO was 65.6, 67.6, 68.6, 60.6 or 23.6%, respectively. However, addition of 0.25M sucrose into the freezing medium containing 3.0M DMSO showed higher survival rate than those of 2.0, 2.5, 3.5 or 4.0M DMSO. 3. The survival rates of porcine embryos after ultrapid frozen-thawing in the freezing medium of 0.25M sucrose added 2.0, 2.5, 3.0, 3.5 or 4.0M propanediol was 63.2, 60.3, 62.1, 52.3 or 24.3%, respectively. Addition of 0.25M sucroese into the freezing medium containing 2.0M propanediol showed higher survival rate than those of 2.5~4.0M glycerol. 4. The survival rates of porcine embryos after ultrarapid frozen-thawing the freezing medium of 2.0M glycerol added 0.10, 0.25, 0.50 or 0.75M sucrose was 61.8, 70.8, 67.6 or 52.2%, respectively. Addition of 2.0M glycerol into the freezing medium containing 0.25M sucreose showed higher survival rate than that those of 0.10, 0.50 or 0.75M sucrose. 5. The higher suvival rate of porcine embryos were attained at short period of equilibration time 92.5~5min.) in the freezing medium added 0.25M sucreose and 3.0M compared to those of 10 or 20min. equilibration time in the same condition.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제40권5호
• /
• pp.365-368
• /
• 1997

한국전통간장의 제조기간 단축 및 대량배양을 위한 기초자료를 조사하기 위하여 Bacillus subtilis var. globigii G8과 Bacillus subtilis C1균주를 종균(starter culture)으로 하여 만든 메주로 간장을 사입하여 간장덧의 숙성기간, 숙성온도, 사입염수의 염농도 및 사입염수의 급수 비율이 간장의 질소성분 함량, pH 및 색도에 미치는 영향을 조사하였다. 메주와 20% 소금물을 1 : 4의 비율로 사입하여 $30^{\circ}C$에서 숙성시켰을 때 5일 이내에 약 90%의 질소성분과 간장색소가 간장으로 분해 용출 되었다. $5^{\circ}C{\sim}30^{\circ}$의 온도 범위에서 5일간 숙성한 결과 숙성온도는 간장의 질소성분함량에 크게 영향을 미치지 않았다. 질소성분과 간장색 용출에 가장 알맞은 사입소금물 농도는 $15{\sim}20%$이었으며, 간장의 질소함랑(0.7%>)을 충족시키는 메주에 대한 염수의 비율은 1 : 5이하였다.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제43권3호
• /
• pp.163-168
• /
• 2000

토양 및 수계에 집적, 유입되어 있는 과다한 인산의 제거에 이용 가능한 미생물 자원을 확보하기 위하여 활성오니에서 분리된 Acinetobacter lwoffi PO8의 배양조건 및 외부환경조건에 따른 인산흡수 양상을 조사하였다. 배양액 내 초기 pH가 $7.5{\sim}8.5$ 범위에서 균생육과 인산흡수율이 가장 높았으며, 탄소원으로 glycerol 및 arabinose을 첨가하였을 경우 각각 약 93 및 91%의 높은 인산 흡수율을 보였다. 질소원 형태에 따른 인산흡수양상은 아미노태 보다 암모늄염이 효과적이었으며, 특히, $NH_4NO_3$,와 $(NH_4)_2SO_4$가 각각 95와 96%의 인산흡수율을 나타냈다. 금속이온 중에서 $Co^{2+}$ 첨가 시 균생육이 제해되었으나, 이외의 다른 금속이온은 균의 성장 및 인산흡수에 큰영향을 미치지 않았다. 아미노산 중 arginine, methionine 및 lysine 등은 아미노산을 첨가하지 않은 경우보다 $10{\sim}20%$ 더 높은 인산흡수율을 나타냈었으며, 이때 배양기간 중 glucose의 공급으로 배지 중 잔존 인산이 완전히 제거되었다. 또한 $^{32}P$를 사용하여 균의 인산 분포를 조사한 결과로 세포내 흡수된 인산은 대부분 세포의 원형질 내에 polyphosphate의 형태로 분포되어 있었다.

• 한국균학회지
• /
• 제38권2호
• /
• pp.152-159
• /
• 2010

본 연구는 옻나무의 allergy유발성분으로 알려진 urushiol이 장수버섯(Fomitella fraxinea)의 laccase유도에 미치는 영향을 살펴보고 laccase isoenzyme을 분리 정제하여 그 특성을 살펴보았다. 장수버섯의 laccase활성과 균체생산량은 배양 10일째 최대치를 나타내었으며 urushiol첨가에 의해서 효소활성은 2.45배, 균체량은 1.5배 높아졌다. Laccase생산용 배지에서 Cu와 Mn이온을 결핍시켰을 경우 효소활성은 3.8-9.2배 낮아졌으나 균체생산에는 영향이 비교적 적었다. Anion exchange, hydrophobic interaction 및 gel filtration chromatography를 통하여 2종의 laccase isoenzyme(Lac1, Lac2)을 정제하였다. 이 효소는 단량체로 각각 67 kDa(Lac1)과 66 kDa(Lac2)의 분자량을 가지고 있었으며, 등전점은 3.67과 3.81이었다. 두 효소 모두 pH 4.5-5.0, $30-35^{\circ}C$에서 최대 활성을 보였으며, $Fe^{2+}$, $Mg^{2+}$, $Na^+$에 의해서 저해를 받았다. 또한, EDTA와 sodium azide에 의해서도 효소활성이 강하게 저해 받았다.

• 미생물학회지
• /
• 제42권2호
• /
• pp.160-163
• /
• 2006

현미는 백미에 비하여 식품영양학적 가치 및 식이섬유의 함유량이 높은 쌀겨 및 배아를 포함하고 있으나 소화가 잘되지 않는 단점 이 있다. 따라서 발효현미는 소화력을 높임과 동시에 좋은 영양 공급원이 될 수 있으므로 높은 amylase와 pretense의 활성으로 현미를 발효할 수 있는 미생물을 선별하였다. 2.5%(w/v)의 현미분말을 유일한 영양원으로 한 액체배지를 생장배지로 사용하여 생장능력과 효소 생산능력을 조사하였다. 조사한 8종의 Bacillus 와 11종의 유산균 중에서 모든 Bacillus 균주와 두 종의 유산균이 생장과 효소활성을 보였다. 생균수는 $10^7CFU/mL$을 초과하였으며 Bacillus sp. Bacillus sp. B2, Bacillus sp. B11, Leuconostoc gelidum, Pediococcus pentosaceus 가 생산하는 최고 amylase 활성은 각각 17.85, 17.50, 17.10, 17.10, 3.24 U/ml이었고, 최고 pretense 활성은 각각 22.48, 22.04, 23.76, 12.13, 3.80 U/ml이었다. 따라서 이 균주들은 발효 현미 제조를 위한 접종균주로서 이용이 가능하리라 사료된다.

• 미생물학회지
• /
• 제34권4호
• /
• pp.212-218
• /
• 1998

세포외 다당류를 분비하는 새로운 methylotrophic bacteria를 분리하여 세균의 특징과 그 세균이 생산하는 세포외 다당류의 물리 화학적 특성을 조사하였다. 분리균주는 그람음성의 간균으로 편모가 없는 비운동성 세균이며, DNA의 G+C 함량은 53-56%이었고, plasmid를 가지고 있지 않았다. 메탄올과 메틸아민만을 기질로 이용하였으며, 탄소동화경로로는 ribulose monophosphate pathway를 이용하는 절대 methylotrophic bacteria이었다. 성장을 위한 최적온도와 pH는 각각 $35^{\circ}C$와 6.5이었고, 0.5%(v/v)의 메탄올이 포함된 배지에서 가장 빨리 성장하였다(세대시간=2.4시간). 분리균주는 절대 호기성 세균으로 질소원과 산소가 결핍된 조건에서 다량의 세포외 다당류를 분비하였다. 다당류 생산을 위한 최적온도와 pH는 각각 $30^{\circ}C$와 6.5이었고, 1.0%(v/v)의 메탄올이 포함된 배지에서 배지내의 탄소 대질소비가 57.4일 때 가장 많이 생산되었다. 정제된 다당류는 포도당과 galactose로 이루어져 있었다. 에탄올 처리전의 다당류는 낮은 pH에서 더 높은 점도를 보였고, 온도와 염류농도의 변화에도 비교적 안정하였다. 에탄올 처리후의 다당류는 xanthan gum보다 높은 점도를 나타내었고, pH, 온도, 염류농도의 변화에 대해 점도변화가 크지 않았다. 냉동건조된 다당류를 전자현미경을 이용하여 관찰하였을 때, 에탄올 처리전의 다당류는 얇은 막이 겹친 구조를 하고 있었고, 에탄올 처리후의 다당류는 굵은 섬유상의 모습을 띠고 있었다.

• 식물조직배양학회지
• /
• 제28권2호
• /
• pp.103-108
• /
• 2001

카사바 (Manihot esculenta Crantz cv. MColl 22)의 마디절편을 제아틴 0.01%가 첨가된 MS 기본배지에서 2주간 현탁배양하여 경엽부 길이가 1.5∼2.5 cm로 생장된 유식물의 부정근을(1) 1∼l.5 cm길이만 남기고 짧게 전정, (2) 1∼2 mm 이내로 제거, (3)뿌리 발생부 전체를 절단한 후 마사토를 담은 유리병에 이식하여 비무균조건에서 순화생장시켰다. 그 결과 이식 7∼10일경부터 각 조건에서 새 뿌리가 발생되기 시작하여 6주 후에는 조건에 따라 73∼93%의 생존율을 나타냈다. 기내 발생 뿌리 가운데 손상 없이 토양에 이식된 것은 그대로 생존을 계속하여 유식물 생장에 도움을 주었으며, 제거된 부정근은 이식 후 신장이 중단되고 새로 뿌리가 발생되었다. 그러나 간혹 전정되고 남은 부분에 측근이 발생된 것이 관찰되었다. 각 조건에서 새로 발생된 기외 뿌리의 수와 길이 및 경엽부 길이와 마디 수에서는 서로 유의성 있는 차이를 나타내지 않았으나, 생체중에서는 전정>제거>절단의 순으로 약간의 차이를 보였다. 미세증식된 카사바의 기내발생 부정근을 적절히 전정 또는 제거한 후 이식하여 순화시키는 것은, 작업을 간편하게 할 뿐만 아니라 유식물의 생존율이 높고 생장에도 지장이 거의 없으므로 경제적인 미세증식 방법으로 유용하게 이용될 수 있다.

• 한국식품과학회지
• /
• 제45권1호
• /
• pp.77-83
• /
• 2013

본 연구에서는 인삼의 뿌리보다 활성성분의 함량 및 종류가 많은 것으로 알려지고 있는 인삼열매를 7증7포 증숙처리 후 확보한 열수추출물에 대한 발효에 적합한 발효균주의 선발과 발효의 조건을 탐색하여 효능이 개선된 기능성소재로서의 가능성을 확인하고자 하였다. 연구결과 5종의 생체친화형 세균(L. fermentarum, L. plantarum, L. brevis, L. casei, B. subtillis) 중 L. plantarum에서 우수한 발효능이 있는 것으로 확인하였으며, 특히 L. plantarum 으로 증포인삼열매 추출물을 발효 시 효과적인 항산화활성이 관찰되었다. 더욱이, L. plantarum으로 발효 시 인삼의 중요 활성성분인 진세노사이드의 함량 및 성분의 변화가 관찰되었고 비발효시 관찰되지 않았던 높은 수준의 Rg3를 포함한 Rh1, Rg2, Rd, 및 Rh2가 관찰되어 발효물의 약리학적 적용도 가능할 것으로 사료된다. 이와 같은 결과를 토대로, 증포인삼열매추출물은 L. plantarum에 의해 효과적으로 발효가 되며, 발효 후 나타나는 항산화활성 및 진세노사이드의 성분/함량의 변화가 치료적 수준에 적합한 후보물질로의 개발이 가능 할 것으로 판단된다.