상황버섯의 지방소화효소 억제와 항산화 활성을 구명하기 위해 상황버섯 메탄올 추출물의 췌장 lipase 억제 활성과 항산화 활성을 in vitro에서 측정하고, 흰쥐에 고지방식이와 함께 상황버섯 분말을 투여하여 지방소화효소 활성 저해를 통한 지방 흡수 억제와 항산화 효과를 in vivo에서 관찰하였다. 메탄올 추출물의 췌장 지방소화효소 활성 저해능과 DPPH 라디칼 소거능을 측정한 결과, $IC_{50}$가 각각 $36.3\;{\mu}g/mL$와 $20.1\;{\mu}g/mL$로 나타났으며, DPPH 소거능은 비타민 C의 $IC_{50}$인 $18.3\;{\mu}g/mL$와 비슷하였다. 상황버섯 분말을 고지방식이에 각각 2%와 5% 첨가한 식이를 공급하고 8주간 사육한 결과, 상황버섯 첨가로 인해 식이섭취량은 증가하였으나 체중과 체지방량에는 차이가 없었으며 따라서 식이효율은 낮았지만 유의적이지는 않았다. 그러나 상황버섯 섭취로 인해 지질의 흡수가 감소되어 분변으로의 지질 배설량이 증가한 것으로 조사되었다. 혈장 지질의 경우, 상황버섯 첨가군에서 혈장 총 콜레스테롤과 LDL 콜레스테롤, 간의 총 지질과 총 콜레스테롤 함량이 대조군에 비해 낮아진 것으로 조사되었다. 혈장 GPT 활성은 상황버섯 2%와 5% 첨가군에서 각각 대조군에 비해 43%와 45% 감소하였다. 혈장, 적혈구 및 간의 항산화 효소 활성을 측정한 결과, 상황버섯의 첨가로 T-SOD 활성은 영향을 받지 않았으나, GSH-Px는 간과 혈장에서 활성이 증가하였다. 실험식이를 공급하고 2주, 4주 및 8주에 림프구를 분리하여 DNA 손상 정도를 측정한 결과, 상황버섯을 2주간 섭취한 후의 림프구 DNA 손상이 대조군에 비해 큰 것으로 조사되었으나, 4주간 섭취한 군에서는 차이가 없었고, 8주에서는 DNA 손상이 억제되었으며 2% 첨가군에서 DNA 손상 억제 정도가 가장 크게 나타났다. 림프구에 $H_2O_2$로 산화스트레스를 가하고 DNA 손상 정도를 측정한 결과, 상황버섯 첨가군의 DNA 손상이 대조군에 비해 식이섭취기간에 비례해서 낮아졌고, 5% 첨가보다는 2% 첨가군에서 억제 효과가 더 높은 것으로 조사되었다. 이상의 결과들로부터, 상황버섯은 생체 내 항산화 효소계의 활성유도와 산화스트레스로 인해 생성된 라디칼의 활발한 소거를 통해 세포의 산화적 손상을 억제하는 효과가 있는 것으로 생각된다.
Cholesterol esterase(pCEH, pancreas cholesterol ester hydrolase, E.C.3.1.1.13) which is secreted from pancreas has been known as an important lipase for cholesterol uptake. cholesteryl acyl esters from a diet must be hydrolyzed to free cholesterol and fatty acid by cholesterol esterase before the absorption in small intestine. For the development of inhibitory substances from natural source, we screened many extracts of oriental herbs for the inhibition of cholesterol esterase in vitro. The ethanol extract of Ephedra herba showed strong inhibitory activity. Solvent fractionation and silica gel column chromatography with the extract lead to the purification of the inhibitory principle in Ephedra herba. Crystallized inhibitor was identified as ( ) ephedrine by using UV, FT IR, 1H NMR, 13C NMR and GC/Mass. These results suggest that ( ) ephedrine can be used as a potential lead compound for the development of inhibitor for cholesterol uptake by cholesterol esterase inhibition.
고압처리가 발아벼 추출물의 성인병관련 예방효과에 미치는 영향을 살펴보기 위하여 발아기간 및 고압처리 시간에 따른 효소저해활성을 살펴보았다. 발아기간은 6일로 하였고, 30 MPa의 압력 하에서 24시간 및 48시간 동안 처리하였다. ${\alpha}$-Glucosidase 저해활성은 발아초기에 대조구에 비해 고압처리 시 높은 범위의 저해활성을 나타내었으며, ${\alpha}$-amylase 저해활성은 발아기간 및 고압처리시간이 증가함에 따라 유의적으로 증가하였다. ACE 및 lipase 저해활성은 ${\alpha}$-glucosidase 저해활성과 유사하였으며, 고압처리가 대조구보다 높은 저해활성을 나타내었으며, 48시간 고압처리한 2일차 발아벼에서 가장 높은 저해활성을 나타내었다. Xanthine oxidase 저해활성은 발아초기에는 대조구보다 고압처리시 높았지만 발아가 진행됨에 따라 감소하였다. 이상의 결과로 부터 발아와 고압처리를 병행한 벼는 무발아 및 발아벼에 비하여 활용가치가 높을 것으로 판단되며, 성인병 예방을 위한 기능성식품소재로써 이용이 가능할 것으로 판단된다.
본 연구에서는 저온 플라즈마를 활용하여 phloridzin을 20, 40 및 60분 동안 처리하여 얻어진 결과물에 대하여 DPPH 라디칼 소거, ${\alpha}$-glucosidase 및 pancreatic lipase 저해활성을 평가하였다. 그 결과, DPPH 라디칼 소거활성은 플라즈마로 처리하지 않은 phloridzin의 $IC_{50}$ 값이 $500{\mu}g/mL$ 이상이었으며, 이와 비교하여 플라즈마 60분 처리 반응물의 경우 $IC_{50}$ 값이 $100.5{\pm}2.9{\mu}g/mL$ 나타내어 항산화 활성이 상승한 것을 확인하였다. 또한 ${\alpha}$-glucosidase 저해활성은 60 분 동안 플라즈마 처리한 phloridzin의 $IC_{50}$ 값이 $43.5{\pm}2.2{\mu}g/mL$의 가장 우수한 저해활성을 나타내었으며 이 활성은 양성대조군인 acarbose의 $IC_{50}$ 값인 $541.3{\pm}1.9{\mu}g/mL$ 보다 10배 이상 강한 활성이었다. Pancreatic lipase 저해활성은 60분 플라즈마를 처리한 phloridzin의 $IC_{50}$ 값이 $29.8{\pm}2.0{\mu}g/mL$로 가장 우수한 활성을 나타내었다. 향후 이들 반응을 통하여 생성된 화합물의 대량생산을 통한 물질 분리 및 구조 동정을 통하여 DPPH 라디칼 소거활성, ${\alpha}$-glucosidase 및 pancreatic lipase 저해활성 메커니즘 검증을 수행할 필요성이 있다고 사료된다.
Objectives : The aim of this study is to search Korean Medicine with the superior inhibitory effect of pancreatic lipase including a possibility as a well-matched sauce material with pork. Methods : We chose 5 samples which have the potent inhibitory effect of pancreatic lipase enzyme among 9 samples. 5 samples were Glycyrrhizae rhizoma, Cinnamomi cortex, Ganoderma lucidum, Syzygium aromaticum, and Schisandra chinensis. Animals were divided into eight groups (n=7). The experimental groups except for normal group were fed 60% high-fat diet. 5 samples were orally administered at a dose of 200 mg/kg body weight and orlistat were orally administrated at a dose of 60 mg/kg body weight for 7 days. Biochemical anaylses of 5 samples were executed based on lipid parameters such as triglyceride (TG) and total cholesterol (TC). Results : Korean Medicines with $IC_{50}$ of below $1mg/m{\ell}$ were Glycyrrhizae rhizoma, Cinnamomi cortex, Ganoderma lucidum, Syzygium aromaticum, and Schisandra chinensis. Body weight change of all drug-treated groups except Glycyrrhizae rhizoma reduced significantly during the experimental period. Orlistat treatment reduced significantly both TG and TC in serum. The significant emission of TG in fece showed in Cinnamomi cortex treatment, whereas Ganoderma lucidum and Syzygium aromaticum showed a tendency to increase without a significance. Besides, Ganoderma lucidum and Schisandra chinensis emitted significantly TC to fece. Conclusions : In conclusion, Cinnamomi cortex may exert anti-obesity effect by directly inhibiting pancreatic lipase, which would prevent the absorption of lipid from the small intestine. Accordingly, Cinnamomi cortex may suggest a high possibility as a well-matched sauce material with pork.
본 연구에서는 발아기간 및 부위별 벼 추출물에 대한 다양한 효소활성 저해효과를 조사하였다. 발아기간은 6일까지로 하였고, 발아된 벼는 왕겨+싹 부위와 현미로 나누어 80% ethanol로 환류 추출하였다. ${\alpha}$-Glucosidase 저해활성은 왕겨+싹 추출물에서 발아 전 26.32%에서 발아 5일차 39.38%로 증가하였으며, ${\alpha}$-amylase 저해활성은 왕겨+싹 추출물에서 발아 전 59.98%에서 발아 5일차 75.32%로 증가하였고, DPP-4 저해활성 또한 왕겨+싹 추출물에서 발아 전 38.80%에서 발아 5일차 47.77%로 증가하여 발아에 의해 효소활성 저해가 증가하였다. ACE 저해활성은 왕겨+싹 추출물에서 가장 높았으며 발아에 의해 증가하였다. Xanthine oxidase 저해활성은 발아가 진행됨에 따라 감소하였다. Lipase 저해활성은 발아 4일차 왕겨+싹 추출물이 36.78%로 무발아 31.72%에 비하여 증가하였다. 본 연구결과 벼를 발아시킬 경우 왕겨+싹에서 성인병 관료 효소를 억제하는 성분이 증가함을 알 수 있었으며, 추후에 어떠한 성분에 의한 것인지에 대한 연구가 수행되어야 할 것으로 판단된다.
Nordihydroguaiaretic acid (NDGA), an inhibitor of lipoxygenase, inhibits the secretion of proteins and causes the redistribution of resident Golgi proteins into the endoplasmic reticulum (ER). In this study, the effect of NDGA on lipoprotein lipase (LPL) secretion was investigated in 3T3-L1 adipocytes, and compared with those of brefeldin A (BFA), a well-known fungal metabolite that exhibits similar ER-Golgi redistribution. Both BFA and NDGA blocked secretions of LPL. In the presence of BFA, the active and dimeric LPL was accumulated in adipocytes. After endoglycosidase H (endo H) digestion, the proportion of LPL subunits with partially endo H-sensitive oligosaccharide was significantly increased with BFA. However, in the presence of NDGA, the cellular LPL became inactive, and only the endo H-sensitive fraction of the LPL subunit was observed. An increase of the aggregated forms was observed in the fractions of the sucrose-density gradient ultracentrifugation. These properties of LPL in the NDGA-treated cells were similar to those of LPL that is retained in ER, and the effects of NDGA could not be reversed by BFA. These results indicate that the inhibitory mechanism of NDGA on the LPL secretion is functionally different from the ER-Golgi redistribution that is induced by BFA.
Sugar esters are valuable compounds composed of various sugars and fatty acids that can be used as antibacterial agents and emulsifiers in toothpaste and canned foods. For example, fructose fatty acid esters suppress growth of Streptococcus mutans, a typical pathogenic bacterium causing dental caries. In this study, fructose laurate ester was chosen as a target material and was synthesized by a transesterification reaction using Candida antarctica lipase B. We performed a solvent screening experiment and found that a t-butanol/dimethyl sulfoxide mixture was the best solvent to dissolve fructose and methyl laurate. Fructose laurate was synthesized by transesterification of fructose (100 mM) with methyl laurate (30 mM) in t-butanol containing 20% dimethyl sulfoxide. The conversion yield was about 90%, which was calculated based on the quantity of methyl laurate using high-performance liquid chromatography. Fructose monolaurate (Mr 361) was detected in the reaction mixture by high-resolution mass spectrometry. The inhibitory effect of fructose laurate on growth of oral or food spoilage microorganisms, including S. mutans, Bacillus coagulans, and Geobacillus stearothermophilus, was evaluated.
The present study was investigated on in vitro anti-obesity effect of 4-hydroxybenzyl alcohol from Cudrania tricuspidata. We isolated various compounds from Cudrania tricuspidata. Among these compounds, anti-obesity effects of 4-hydroxybenzyl alcohol was examined by lipase activity assay, cyclic adenosine monophosphate (cAMP)-specific phosphodiesterase type IV (PDE4) activity assay, and citrate synthase activity assay. 4-hydroxybenzyl alcohol and Cudrania tricuspidata extracts inhibited the enzymatic activities of lipase, PDE4, and citrate synthase. Lipase is known to mediate the hydrolysis of triacylglycerol in adipose tissue and cholesterol esters in other tissue or cells. Also, PDE4 hydrolyses cAMP, a crucial secondary messenger for in metabolic pathways including glucose and lipid metabolism, lipolysis, and thermogenic function. 4-hydroxybenzyl alcohol and Cudrania tricuspidata extracts induced the inhibitory effect against each enzymatic activity on several specific substrates as observed by detection at 405 or 412 nm. These findings might be attributable to the inhibition of adipogenesis, and partial prevention of obesity. In conclusion, these results show that 4-hydroxybenzyl alcohol and Cudrania tricuspidata may be a critical candidate as a natural anti-obesity source.
사람 췌장 리파아제는 췌장에서 합성되어 소장으로 분비된 후, 음식물속의 지방을 가수분해하는 소화효소이다. 췌장 리파아제 단백질은 촉매활성도메인과 코리파아제 결합도메인의 2개의 도메인으로 구성되어 있다 본 연구에서는 리파아제 전체단백질과 촉매활성도메인 및 코리파아제 결함도메인 유전자를 PCR 방법으로 증폭하여 발현벡터에 넣은 후, 대장균에서 발현시켜 얻은 3가지 재조합 단백질을 산란계에 3차례 주사하여 면역반응을 유도하였다. 난황단백질을 분리하여 항체가를 측정한 결과, 코리파아제 결합도메인의 항원성이 가장 높은 것으로 밝혀졌다. 또한, 돼지 췌장 리파아제의 활성저해 실험에서도 코리파아제 결합도메인에 의해 만들어진 난황항체가 지방분해활성 저해작용이 가장 큰 것으로 밝혀졌다. 코리파아제 결합도메인 난황항체가 첨가된 지방을 실험동물에게 급여하고 혈중 주요 성분을 분석한 결과, 코리파아제 결합도메인에 의한 난황항체를 섭취한 경우에 혈중 중성지방의 수치가 대조군에 비해서 유의적으로 감소했음을 화인하였다. 결론적으로 코리파아제 결합도메인을 항원단백질로 사용하여 얻은 난황항체가 생체 내에서 췌장 리파아제의 활성을 억제할 수 있으며 비만억제제로의 개발 가능성이 있음을 보여주었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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