국내 도축장 및 도축장 출하 닭을 대상으로 NDV 오염 실태를 조사하였다. 조사결과, 닭출하농장, 닭수송용차량, 도축장 현수실, 도축장 냉각수에서 각각 조사 대상건수의 13.0%, 13.3%, 16.0%, 10.8%에서 NDV가 분리되었다. 시기별로 보면 차량, 현수실, 냉각수 모두에서 7월에 가장 많이 바이러스가 분리되었다. Pathotyping RT-PCR을 실시한 결과, 이들 분리된 NDV 분리주는 모두 저병원성 NDV 양성 반응을 나타내었으며, F 단백질 분절 부위에 모두 $^{112}GKQGR/L^{117}$ motif를 가지고 있었다. 본 연구에서 분리된 NDV 분리주의 F 단백질 유전자를 분석하여 보았을 때, 조사한 NDV 분리주 25주 중 24주가 NDV V4주와 같은 유전적 cluster를 형성하였으며, 나머지 1주는 NDV Ulster 2C주와 같은 유전적 cluster를 형성하였다. 이와 같은 연구 결과로 보아 국내에서는 출하 닭, 수송 차량, 현수실, 냉각수 등 생산에서 도축 단계까지 일련의 과정에서 높은 빈도로 저병원성 NDV 오염이 이루어지고 있음을 알 수 있었다.
Han, Mi Na;Byeon, Hyeon Seop;Lee, Cho Yeon;Jo, Nam Sin;Lee, Jong Hwa;Jang, Rae Hoon;Kim, Chang Seop;Na, Ki Jeong
한국동물위생학회지
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제42권4호
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pp.245-250
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2019
Newcastle disease (ND) is an infectious poultry disease that caused high mortality and reduced egg production. NDVs are regularly present in the domestic duck population. And ducks play a possible role in the maintenance and transmission of NDVs. While we were monitoring the Avian Influenza, NDVs were isolated from field samples by accident. So we analysed the biological and genetic characteristics of these viruses. Lentogenic NDVs were isolated from two farms among twenty breeder duck farms. The ages of ducks were 39 weeks old in the 'A' farm and 3~72 weeks old in the 'B' farm. And they were not inoculated with the NDVs vaccine. In the biological characteristics, the both viruses which separated from the farm 'A' and 'B' were thermostable. The amino acid sequence of a site from 112 to 119 in the fusion (F) protein was 'GKQGRLIG' which has monobasic motif in the samples of both farms. And this means the separated NDVs are lentogenic. Phylogenetic analysis was performed by entire nucleotide sequence of F protein. The virus strains from the A farm (MN095239) and the B farm (MN095240) belonged to class II genotype I. Using the analysis of whole F protein nucleic acid sequence, the MN095239 (GenBank) had homology with Ulster strain about 99.95% and the MN095239 (GenBank) had homology with KR/CK/KU_LBM255/09 strain about 99.89%. NDV surveillance is needed to investigate epidemiological relationship of domestic breeder duck isolates in Korea.
뉴캣슬병 바이러스가 발견된지 50여년이 지난 오늘에도 그 발생은 전 세계적으로 광범위하다. NDV가 분리됨으로 백신개발이 이루어져 1930년대말부터 완전하지는 못했으나 그런대로 방역을 맡았으며 그후 개량발전된 백신으로 각국에서 예방접종하고 있으나 여전히 발생하고 있다. NDV는 Paramyxovirus로서 RNA를 가지고 있으며 크기는 $100\~600{\mu}m$ 범위의 크기와 lipoprotein envelope로 쌓여 있다. 분리동정에 이용되는 혈구응집소, neuraminidase의 작용, 용혈성 등 모두 envelope와 관련이 있으며 이와 관련된 연구가 많이 진행되고 있다. NDV가 세포에 침투하는 과정에서 특이한 receptor에 부착하여 envelope의 용해 및 nucleocapsid의 세포속에 침투 등이 밝혀지고 있으며 NDV의 Virion은 RNA의존 RNA 복합체를 가지고 있고 보족 RNA는 바이러스 단백질 및 RNA를 산생하기 위해서 숙주에 의하여 전환을 한다. 1 일령추의 뇌내접종, 정맥내 접종 및 계태 아치사시간 등의 방법으로 Velogenic, Mesogenic Lentogenic type으로 분류하고 감염력에 따라 Virulent 또는 avirulent로 구분된다. 국내에서 분리된 NDV는 현재 Velogenic형으로 분류되고 있으나 앞으로 지역별, 계절별, 감염된 숙주별로 광범위하게 분리하여 국내에서 유행하고 있는 NDV의 성상조사와 특성을 파악 할 필요성이 요청된다.
This study was conducted to investigate enhancement of anti-tumor effects of the lentogenic Newcastle disease virus Clone30 strain (NDV rClone30) expressing cytosine deaminase (CD) gene against tumor cells and in murine groin tumor-bearing models. Cytotoxic effects of the rClone30-CD/5-FC on the HepG2 cell line were examined by an MTT method. Anti-tumor activity of rClone30-CD/5-FC was examined in H22 tumor-bearing mice. Compared to the rClone30-CD virus treatment alone, NDV rClone30-CD/5-FC at 0.1 and 1 MOIs exerted significant cytotoxic effects (P<0.05) on HepG2 cells. For treatment of H22 tumor-bearing mice, recombinant NDV was injected together with 5-FC given by either intra-tumor injection or tail vein injection. When 5-FC was administered by intra-tumor injection, survival for the rClone30-CD/5-FC-treated mice was 4/6 for 80 days period vs 1/6, 0/6 and 0/6 for the mice treated with rClone30-CD, 5-FC and saline alone, respectively. When 5-FC was given by tail vein injection, survival for the rClone30-CD/5-FC-treated mice was 3/6 vs 2/6, 0/6 and 0/6 for the mice treated with rClone30-CD, 5-FC or saline alone, respectively. In this study, NDV was used for the first time to deliver the suicide gene for cancer therapy. Incorporation of the CD gene in the lentogenic NDV genome together with 5-FC significantly enhances cell death of HepG2 tumor cells in vitro, decreases tumor volume and increases survival of H22 tumor-bearing mice in vivo.
본 연구를 통하여 Vero 세포에서 강독형 NDV인 Kr005주를 55대 연속 계대하여 Vero 세포에 적응된 Kr005/V 주를 작성하였다. Kr005/V 주는 Vero 세포에서 $10^{7.8}/mL$의 높은 바이러스 증식성을 보였으며, 감염세포는 cell rounding과 같은 CPE를 형성하였다. 또한 이열성(heat labile) NDV Kr005주와 달리 NDV Kr005/V 주는 내열성(thermostable)을 보였다. 계태아에서 평균 치사 시간(MDT)를 측정한 결과, 강독형인 Kr005주(49.6시간의 MDT)와 달리 Kr005/V 주는 120시간이상의 MDT를 보여 약독형 바이러스(lentogenic virus)로 분류되었다. Kr005/V 주의 HN 단백질과 F 단백질의 염기서열을 분석한 결과, HN 단백질의 443번째 아미노산에서만 변이(T에서 S)가 관찰되었다. Kr005/V 주와 Vero 세포를 사용하여 야외 닭 혈청을 대상으로 혈청중화 항체가를 측정한 결과, Kr005주와 CEF 세포를 사용하여 측정한 혈청중화 항체가와 97%의 상관성을 나타내었다.
Chung Ok Choi;Chung Gil Lee;Sung Man Cho;Jin Soo Na;Soo Hwan An;Joon Hun Kwon
한국가금학회지
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제15권3호
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pp.207-210
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1988
뉴켓슬병바이러스(NDV)인 LaSota 주를 SPF 발육난의 요막강내에 증식시켜 순수 정제한 것을 BALB/c 흰쥐에 면역시킨 후 추출한 비강세포와 흰쥐 골수암세포와의 융합방법에 의하여 NDV에 특이하게 작용하는 단크론성항체(MCA)를 생산하는 3주의 Hybridoma틀 작성하였다. 이 3주의 MCA는 모두 IgG형에 속하였으며 흰쥐 복강 내에 접종하여 생산된 복수항체의 항체가는 간접형광항체법으로 $10^3$-$10^6$에 달하였고 약독 및 강독 NDV에 모두 동일한 수준으로 작용하였다. 중화능은 인정되지 않았고 3주중 1주만이 별구응집 억제능을 약하게 나타냈다. 이 MCA를 이용하여 간접형광항체법으로 인공 감염시킨 닭에서 NDV항원 검출을 시도한 결과 기관점막을 비롯한 각종 장기의 도말표본에서 접종 3일 후부터 뚜렷한 검출이 가능하였다.
The objective of these experiments was to develop an attenuated thermostable Newcastle disease virus(NDV), CBP-1 strain isolated from infected pheasants. Safety, pathogenicity and protective effects against velogenic NDV were also investigated to evaluate if the attenuated NDV, CBP-1 strain could be a candidate for a new NDV vaccine strain. CBP-1 strain was passaged up to the 173 times by nine days old embryonated eggs and chicken embryo fibroblast(CEF) cell cultures. Its sensitivitly to lipid solvents and low pH, thermostability, mean death time(MDT), intracerebral pathogenicity index(ICPI) of one day old chicks and intravenous pathogenicity index(IVPI) of four weeks old chicks were examined. Safety, boosting and protective effects were tested by chicks mortality. CBP-1 NDV strain had significant thermostability at 56$\^{C}$ for 30 minutes. by hemagglutinin activity and egg infectivity test, but was not resistant to lipid solvent. It showed possibility to use as a feed or water vaccine because of the resistance to low pH. MDT, ICPI and IVPI of CBP-1 were attenuated from 51.5, 1.96, 2.60 to 112.4, 1.12, 1.45. These results implied that the 173rd passages in embryonated egg and CEF cell cultures induced a substantial attenuation of the pathogenicity of the parent virus, changing the virulence from velogenic to intermediate between mesogenic and lentogenic. After vaccination with CBP-1 at one day old by drinking water mortality was 17.5%. However, spray vaccination with B1 at one day old, CBP-1 at two weeks ild and challenge with velogenic Kyojeongwon strain at four weeks old showed 93.5% survival rate. Mortality of chicks, vaccination with 173rd passaged CBP-1 strain at one day old, two weeks old and challenge with Kyokeongwon strain at four weeks old, was 20.0%. The results of these studies indicated that partial attenuated CBP-1 strain tended to be a low safety for ND of broiler chicks and would need to be more successive attenuation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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