xBrassicoraphanus line BB#5, a new synthetic intergeneric hybrid between Brassica rapa L. ssp. pekinensis and Raphanus sativus L. var. rafiphera induced by N-methyl-N-nitroso-urethane mutagenesis in microspore culture, shows high seed fertility and morphological uniformity. Dual-color fluorescence in situ hybridization (FISH) using 5S and 45S rDNA probes and genomic in situ hybridization (GISH) using B. rapa genomic DNA probe were carried out to analyze the chromosome composition and the meiosis pairing pattern compared to its parental lines. The somatic chromosome complement is 2n = 38, which consists of 17 metacentric and two submetacentric chromosomes with lengths of 2.18 to $5.01{\mu}m$. FISH karyotype analysis showed five and eight pairs of 5S and 45S rDNA loci. GISH meiosis pairing analysis showed that 19 complete bivalents were most frequent and accounted for 42% of the 100 pollen mother cells examined. Based on chromosome number, size, morphology, rDNA distribution, and meiosis pairing pattern, both parental genomes of B. rapa and R. sativus appear to exist in xBrassicoraphanus line BB#5, demonstrating its genome integrity. Such stable chromosome constitutions and meiotic pairing patterns in somatic and meiotic cells are very rare in natural and synthetic intergeneric hybrids. Chromosomal studies and genetic and phenotypic changes in allopolyploids a re discussed. The results p resented h erein will b e usef ul f or f urther g enomic s tudy o f xBrassicoraphanus lines and their improvement as promising new breeding varieties.
Leaf mesophyll protoplasts of Nicotiana tabacum (nitrate reductase deficient mutant) were fused with cell suspension protoplasts of albino Petunia inflata in an electric field. Hybrid cell colonies were selected for nitrate reductase proficiency and chlorophyll synthesis. Five hybrid plant lines, regenerated from the selected calli lines, were analysed by electrophoresis, number of chromosomes and morphological characters. Somtic hybrid plants showed both parent patterns in the isozymesof isoleucine aminopeptidase and esterase. The hybrids had the expected chromosome number of 62 and exhibited an intermediate floral morphology when compared with the parents, but plant height and leaf arrangement were similar to N. tabacum.
Tall fescue(Festuca amndinacea Schreb.) is a productive pasture grass that is widely adapted to the soil and climate of Korea. It is regarded, however, as relatively low in palatability and nutritive value. On the other hand, Italian ryegrass(lo1ium rnultz$om Lam.) is highly nutritious and palatable, but is essentially weak in cold tolerance. Numerous investigators have succeeded in producing hybrids between Lolium spp. and Festuca spp. but no improved varieties have resulted. Therefore, intergeneric hybridization of Italian ryegrass with tall fescue is employed in 1984 to improve the adaptive and cold resistance quality of Italian ryegrass. In the mean time, F1-hybrid plants obtained by crossing Italian ryegrass x tall fescue were observed in open field. The results are summarized as follows: 1. Leaf-size and silica cell hair were intermediate between the types of parents but the shape of auricle tended to show Italian ryegrass and auricle-cilia to show tall fescue. 2. Roots of $F_1$-hybrid plants were mainly distributed at top soil and did not produced florescence material. 3. Head type of hybrids was intermediate between the types of parents but ray length was somewhat less than the length of tall fescue ray. Typical Italian ryegrass or tall fescue-like phenotypes were not observed. 4. Anthers of $F_1$-hybrid plants were formed but pollen were not formed. Even though pollen were formed, they were all empty. 5. Hybrid plants were more winterhardy and summer persistency than Italian ryegrass. They showed a equivalent growth to Italian ryegrass in spring and to tall fescue in summer. 6. Chromosome of $F_1$-hybrids was allopolyploid(2n=4~=28) and all $F_1$-hybrid plants were sterile.
Aerides vandarum and Vanda stangeana are two rare and endangered vandaceous orchids with immense floricultural traits. The intergeneric hybrids were synthesized by performing reciprocal crosses between them. In vitro germination response of the immature hybrid embryos was found to be best on half-strength Murashige and Skoog medium supplemented with 20% (v/v) coconut water/liquid endosperm from tender coconut. Determination of hybridity was made as early as the immature seeds or embryos germinated in vitro, using randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) markers. Out of 15 arbitrarily chosen decamer RAPD primers, two were found to be useful in amplification of polymorphic bands specific to the parental species and their presence in the reciprocal crosses. However, a decisive profile that can identify the reciprocal crosses could not be provided by RAPD. Amplification of the trnL-F non-coding regions of chloroplast DNA of the parent species and hybrids aided easy identification of the reciprocal crosses from the fact that maternal inheritance of chloroplast DNA held true for these intergeneric hybrids. Subsequent restriction digestion of the polymerase chain reaction (PCR) amplified trnL-F non-coding regions of chloroplast DNA also consolidated the finding. Such PCR-based molecular markers could be used for early determination of hybridity and easy identification of the reciprocal crosses.
Intergeneric crossings between the inbred line of Brassica pekinensis var. Chongbangkokun and inbred line of Raphanus sativus var. Oolsanjaelae were made using Brassica as female plant, and obtained two individuals of intergeneric hybrids. Morphological characters of the two F1 hybrids are mostly intermediate of the two parental species, and their somatic chromosome number is 19. Meiotic behaviors of the parental plants were normal, while those of F1 plants were extremely irregular. The mean pairing frequencies per cell of hybrids are 1.09II+16.811(examined in May), and 1.76II+15.47i(examined in June). Majority of the pollen grain of parent species are normal, whereas those of F1's are invariably abortive. No seed setting was obtained in the hybrid plants left in the open field.
Aspergillus niger와 Penicillium chrysogenum간의 lipase 우수 생성 종간 형질전환체를 획득하고, 유전분석을 통하여 다음과 같은 결과를 얻었다. (1) P. chrysogenum의 영양요구물을 확인하여 본 결과 Tyrosine 요구성임을 알 수 있었다. (2) 핵전이를 위한 원형질체 형성 및 재생 조건에서는 Novozym 234의 농도 1%, 삼투안정제는 0.6M KCl, 효소의 처리 시간은 180분 그리고 최적 pH는 5.8로 나타났다. (3) 핵전이에 의한 형질전환의 빈도는 $1.3{\times}$10^{-3}$$$-3.8{\times}$10^{-3}$$으로 비교적 낮은 편이었다. (4) 유전적 안정성, conidia의 크기, DNA 함량의 측정 그리고 핵염색의 결과 형질전환체의 핵형은 aneuploid로 추정되었다. (5) 형질전환체의 lipase활성은 모균주와 비교하여 1.4-2.2배 증가하였다.
우리나라에서 유채는 식용유 생산과 경관을 목적으로 매년 재배면적이 증가하고 있다. 하지만 유채 꽃의 색상은 노란색으로 매우 단순하기 때문에 경관효과를 높이기 위해서는 유채 꽃색의 다양화가 필요하다. 유채 꽃색을 다양화하기 위해 유채와 십자화과 식물을 대상으로 종 속간교배를 실시한 결과, 유채와 양배추 종간 인공교배에서 꼬투리 형성율이 65.8%로 비교적 높았으며, 유채와 무, 유채와 소래풀 등 속간 교배조합에서의 꼬투리 형성율은 각각 39.5%와 42.3%로 낮았다. 인공수분 후 꼬투리가 발달하는 시기에 이종간 교잡 불화합성 때문에 종자 결실율이 매우 낮으며 꼬투리 당 생산된 평균 종자수는 유채와 양배추 교배조합에서 0.12개였으며, 유채와 무는 0.40개, 유채와 소래풀은 0.12개였다. 종속간 교배에 의해 생산된 $F_1$ 잡종식물체의 외부 표현형질은 잎의 형태와 꽃의 색은 모계인 유채와 유사하였으나, 잎의 길이와 폭 등이 전반적으로 커진 것으로 나타났다. 유채와 양배추의 종간교배에서 꽃의 색이 양친의 중간인 미색으로 피는 개체가 나타났고, 유채와 소래풀의 속간 교배에서는 꽃의 크기가 커진 개체가 생겨 이 개체들을 육종재료로 이용하면 경관효과를 높일 수 있을 것으로 생각된다. 대부분의 $F_1$ 잡종종자의 올레인산, 리놀레산 및 리놀렌산 등의 지방산 조성은 양친의 중간 정도였으나, 유채와 무의 $F_1$ 잡종종자의 지방산 중 에루진산은 화분친인 무에 비교하여 급격하게 감소하였다.
표고 Lentinus edodes의 균사체로부터 핵을 분리하여 사철느타리 Pleurotus florida 원형질체에 폴리에틸렌 글라이콜로 전이하여 속간(屬間) 핵전이체(核轉移體)를 16균주 얻었다. 주된 핵전이주는 합핵체(合核體) synkaryon 또는 이질핵체로 꺽쇠연결체 clamp connections가 없었다. 그러나 톱밥배지를 이용하여 일정한 저온상태에서 광을 조사하여 꺽쇠연결체를 가진 균사가 다시 생장하여 사철느타리와 유사한 자실체를 형성하였으나 갓색택은 다소 달랐다. 꺽쇠연결체 형성에 영향을 주는 주요한 요인으로는 광, 온도, 배지의 영양, 배지의 생리적 상태로 나타났다. 핵치환체(核置換體) reconstituted cell는 꺽쇠연결체를 가진 표고와 유사한 균총형태로 자실체도 표고와 거의 유사하였다. 핵융합체(核融合體) nuclear hybrid는 이질배수체(異質倍數體) heteroploid로 균총생장이 빠르고 benormyl 첨가배지에서 균총분리가 나타나며 꺽쇠연결체와 자실체를 형성하지 않았다. 동위효소 esterase, leucine aminopeptidase 분석결과 핵융합체는 전혀 새로운 벤드양상이었으나 합핵체는 사철느타리의 주된 밴드를 형성하면서 양친에 없는 다소의 새로운 밴드를 형성하여 구분되었다. PCR에 의한 RAPD 벤드의 크기는 0.25-4.0 Kb였으며 유전유사도 분석으로 5군으로 구분할 수 있었는데 표고와 핵치환체, 핵합체 p669, 사철느타리와 12 핵합체, 핵융합체 p674, 핵융합체 p678이었다. 합핵체의 담자포자로 2 핵전이체를 유전분석한 결과 원영양형(原營養型) prototroph과 영양요구형(營養要求型) riboflavine으로 분리되었는데 그 비는 1 : 1, 1 : 2였다.
Nitrogen fixation (nif) genes of Rhizobium leguminosarum were transferred to nif Klebsiella pneumoniae and E. coli by conjugation after partial heat induction of $RP_4$ :: Mu cts in Rhizobium $R^+$ transconjugant, and the hybrid plasmids in the transconjugant strains were isolated and characterized. In order to transfer the nif genes from Rhizobium, the hybrid plasmid $RP_4$ :: Mu cts was transferred by conjugation from E. coil to the symbiotic nitrogen fixer, R. leguminosarum. After stabillity test, the $RP_4$ :: Mu cts in Rhixobium $R^+$ transconjugant was subjected to partial heat induction by culturing it statically at $38^{\circ}C$ for 16 hours, and then conjugated with the nif defective mutant strains of K. pneumoniae or nif mutant strains of E. coli having whole nif gene plasmid. Recombinant strains of K. pneumoniae, which could grow in a N-free medium and exhibit the nitrogenase activity were selected. However, in the case of E. coli, they could grow well in a NA medium containing antibiotices, but hardly frow in a N-free medium. The hybrid plasmids in these transconjugal strains were isolated by gel electrophoresis and compared their molecular sizes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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