본 실험은 벼흰빛잎마름병에 대한 저항성계통선발에 필요한 인공접종법 개발을 위해 시도한 것으로서 병원균의 접종농도와 식물체의 노유가 본병의 발전에 미치는 영향에 관해 중점을 두었다. 일정한 환경조건하에서 본병에 대한 식물의 감수성은 식물의 묘령이 어릴 때 일수록 예민하게 나타났으며 식물의 생장과 더불어 점차 둔감해지는 경향이었다. 파종후 14, 37, 48 및 58일째 되는 식물에서 본병에 대한 저항성과 이병성 계통을 선별할 수 있는 병원균의 적정농도는 각각 $10^6,\;10^7,\;10^7-10^{-9}$및$10^9 cells/ml.,$였다. 어린 식물에 대해 지나치게 높은 농도의 접종액은 식물의 품종에 관계없이 단시일에 고사시키는 결과를 초래하였고 묘령이 많은 식물에 대해 일정수준 이하의 세균접종농도를 적용했을 때는 식물의 품종간 특성을 구별할 수 없었다.
본 연구에서는 hGM-CSF 유전자가 도입된 형질전한 담배의 callus를 현탁배양하여 hGM-CSF를 생산할 때에 배양 초기의 세포접종농도와 sucrose의 농도가 hGM-CSF의 생산에 미치는 영향을 확인하고자 하였다. 20, 50, 80, 110 g/L의 초기세포접종농도와 30, 60, 90 g/L의 당의 농도를 서로 조합하여 배양한 결과 모든 처리구에서의 hGM-CSF 생산량은 배양 7일 이후부터 급격하게 감소하였으며, 모든 세포접종농도에서 당의 농도가 높아질수록 hGM-CSF의 생산이 촉진되는 결과를 얻었다. 또한, 서로 다른 당과 세포접종농도의 조합에 따라서 hGM-CSF의 생산량은 현저한 차이를 보여 식물세포 배양을 이용한 외래단백질의 생산에는 당의 농도와 배양초기의 세포접종농도에 크게 영향 받음을 확인하였으며, 최대의 hGM-CSF 생산을 보인 조건은 90 g/L의 당과 110 g/L의 초기세포접종농도로서 약 720 $\mu\textrm{g}$/L의 hGM-CSF를 생산하였다.
Effect of inoculum concentration inoculation method and plant age on development of clubroot disease of Chinese cabbage seedling were examined in growth chambers. Root galls were developed at the concentration of 105 resting spore or above per ml of incoulum and as the inoculum concentration became higher rate of development of root galls was faster. In the plants with root gall development fresh weight of above ground parts was reduced to 30-44% of that of healthy plants but root weight increased by 4-10 times. Growth of diseased plants was greatly reduced as compared to healthy plants. Planting in the diseased soil as a inoculation method was most effective for disease development showing uniform infections but time of initial root gall development was delayed by root soaking inoculation. Some plants inoculated by soil drenching method did not develop root galls. However root gall enlargement after its initial formation did not differ greatly among inoculation methods. Nine-day-old seedlings showed poor development of root gall but 16-days-old seedlings was found to be most adequate for inoculation for gall development.
Taxus brevifolia와 Taxus cuspidata 현탁세포배 양에서 taxa!의 생산에 가장 적합한 초기 접종농도 를 결정하기 위해 접종농도를 세포생체중량으로 2.5, 5 5, 7.5, 10 g/flask가 되도록 변화시켜 세포의 생장 과 taxol의 생산을 측정하였다. Taxus brevifolia의 경우 초기 접종농도가 높을수록 lag phase가 감소되 는 경향을 보였으며, 두 가지 세포주(Taxus bre1 vifolia와 Taxus cuspidata)에서 모두 초기 접종농도 를 5 g/flask가 taxol의 생산에 최척 임을 확인할 수 있었다. Taxol 생산에 가장 척합한 초기 접종농도로 생장배지와 생산배지에 세포를 접종시켰을 때 생장 배지에서는 taxal이 검출되지 않았지만 6% 자당을 이용한 생산배지에서는 9일째 taxol이 최대로 생산 되었다가 이후 다시 줄어드는 경향을 보였다.
모잘록병균인 Rhizoctonia solani와 Pythium ultimum에 대한 etridiazole과 thiophanate-methyl의 균사 생장 억제 효과와, 각 병원균의 토양 접종 농도가 etridiazole과 thiophanate-methyl 합제의 고추와 오이 모잘록병에 대한 방제 효과에 미치는 영향을 조사하였다. R. solani와 P. ultimum의 균사 생장 억제에 대한 etridiazole의 $EC_{50}$값은 각각 $15.87\;{\mu}g\;mL^{-1}$과 $0.20\;{\mu}g\;mL^{-1}$이었지만, thiophanate-methyl의 $EC_{50}$값은 R. solani에 대해서$9.34\;{\mu}g\;mL^{-1}$이었고, P. ultimum에 대해서는 $500\;{\mu}g\;mL^{-1}$ 이상이었다. 온실에서 실시한 유묘 검정 결과, R. solani와 P. ultimum의 접종원 농도가 높아지면 고추와 오이에서의 병 발생도 상승하였다. R. solani의 토양 접종 농도가 0.1%(w/v)이었을 때 파종 14일 후의 고추 발병주율은 41%이었으며, 0.5%와 1.0%로 접종하였을 때는 73%와 95%까지 상승하였다. 오이에서는 접종원 농도가 1.0과 2.0%일 때, 각각 55%와 62%의 발병주율을 보였다. P. ultimum에 의한 유묘에서의 발병주율은 고추보다 오이에서 더 높게 나타났는데, 2%의 농도로 병원균을 접종하였을 때, 고추와 오이의 발병주율은 66.7%와 96.8%이었다. R. solani의 경우 혼합제의 효과는 병원균의 접종 농도에 따라서 변화하였는데, 접종 농도가 0.05%일 경우 고추와 오이에서의 방제 효과는 94.4%와 90.7%이었지만, 고추와 오이에서 병원균의 접종 농도가 0.1%와 0.5%일 경우에는 70.7%와 72.9%로 감소하였다. 하지만 P. ultimum의 경우에는 접종 농도와 관계없이 고추와 오이에서 모잘록병의 발생을 100% 억제하였다.
This study was carried out to investigate the characteristics and Vitamin $K_2$ (MK-7) productivity of Cheonggukjang fermented by Bacillus subtilis SRCM100757 depending on the inoculum concentration 0.5% (v/w), 1% (v/w) and 2% (v/w). The lowest moisture content and water activity were $53.7{\pm}0.6%$ and $8.39{\pm}0.09$ after fermentation for 72 hours at 2% (v/w). pH slowly became alkalized during fermentation, but there was no significant difference. Amino nitrogen content increased with time and the highest content was $580.8{\pm}1.9mg%$ after fermentation for 72 hours at 2% (v/w). Lightness (L value) and yellowness (b value) decreased with time, whereas redness (a value) hardly changed. MK-7 contents increased with time at each inoculum concentration. The highest content was $20.47{\pm}1.53$ after fermeatation for 72 hours at 2%(v/w) and there were no significant differences between 1%(v/w) and 2%(v/w) inoculum concentrations.
To understand effect of inoculum size, cell density, sucrose concentration and concentrations of MS basal on suspension culture and protoplast isolation of wild viola(Viola patrinii DC.) callus from petiole segments this experiment was conducted. In the lot of 30 mesh inoculum size, two observations were; One was that a considerable increase in the fresh and dry weight of callus was determined. Another was that the callus mass was relatively compact compared with others. A recommendable cell density was 0.4g for 20ml culture medium and the higher sucrose concentration, the higher fresh and dry weight were obtained. The dilution of MS basal salt was differently affected on fresh and dry weight; the highest fresh weight was found in 1x MS salt, while the higest dry weight was in 1/3x dilution.The addition of casein hydrolysate(3g/L) was more effective to increase of both fresh and dry weight. THe contents of protein was great in the inoculum lots with larger inoculum sizeand higher concentration of MS basal salts contenting 3g/L of casein hydrolysate and higher sucrose compared with others. The greatest protoplasts were isolated from the lot of 10 mesh size treated with 1%pectinase SE-150 and 2% cellulase YC. In general, for optimal protoplast isolation the followingconditions were recommended; 1) Use of smaller cell size cultured for 2-5 weeks, and 2) more than 5 hours incubation using the combined mixture of the enzymes with proper concentrations.
The effects of initial concentration and pulsed pressurization on the inactivation of Clostridium sporogenes spores suspended in deionized water were determined during thermal processing $(TP;\;105^{\circ}C,\;0.1MPa)$ and pressure-assisted thermal processing $(PATP;\;105^{\circ}C\;and\;700MPa)$ treatments for 40 min and 5min holding times, respectively. Different inoculum levels $(10^4,\;10^6\;and\;10^8CFU/ml)$ of C. sporogenes spores suspended in deionized water were treated at $105^{\circ}C$ under 700MPa with single, double, and triple pulses. Thermally treated samples served as control. No statistical significances (p>0.05) were observed among all different inoculum levels during the thermal treatment, whereas the inactivation rates $(k_1\;and\;k_2)$ were decreased with increasing the initial concentrations of C. sporogenes spores during the PATP treatments. Double- and triple-pulsed pressurization reduced more effectively the number of C. sporogenes spores than single-pulse pressurization. The study shows that the spore clumps formed during the PATP may lead to an increase in pressure-thermal resistance, and multiple-pulsed pressurization can be more effective in inactivating bacterial spores. The results provide an interesting insight on the spore inactivation mechanisms with regard to inoculum level and pulsed pressurization.
Two antifungal bacteria were selected from forest soils during the screening of microorganisms antagonistic to Cylindrocarpon destructans, a cause of ginseng root rot. The antifungal bacteria were identified as Bacillus subtilis (I4) and B. amyloliquefaciens (yD16) based on physiological and cultural characteristics, the Biolog program, and 16S rRNA gene sequencing analyses. Antagonistic activity of both bacterial isolates to C. destructans increased with increasing temperature. More rapid starch hydrolytic activity of the bacteria was seen on starch agar at higher temperatures than at lower temperatures, and in the higher density inoculum treatment than in the lower density inoculum treatment. The bacterial isolates failed to colonize ginseng root the root tissues inoculated with the bacteria alone at an inoculum density of $1{\times}10^6$ cfu/ml, but succeeded in colonizing the root tissues co-inoculated with the bacteria and C. destructans. Scanning electron microscopy showed that the pathogen was damaged by the low-density inoculum treatment with the bacterial isolates as much as by the high-density inoculum treatment. Both bacterial isolates were more effective in reducing root rot when they were treated at a concentration of $1{\times}10^6$ cfu/ml than at $1{\times}10^8$ cfu/ml. Also, only the former treatment induced prominent wound periderm formation, related to structural defense against pathogen infection. The results suggest that the bacterial antagonists may have high potential as biocontrol agents against ginseng root rot at relatively low-inoculum concentrations.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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