Ten, Leonid N.;Lee, Mi Ja;Lee, Mee-Kyoung;Park, Hoon;Yoon, Jong Hyuk
Journal of Applied Biological Chemistry
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제43권4호
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pp.264-268
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2000
High activity of acidic ethylacetate extract from the culture supernatant of ginseng growth-promoting bacterium Pseudomonas fluorescens KGPP 207 and its fractions were demonstrated through wheat coleoptile bioassay. The following auxins and auxin-like compounds were identified in these fractions by combined gas chromatography-mass spectrometry: indole-3-acetic acid, indole-3-acetic acid methyl and ethyl ester, indole-3-butyric acid, indole-3-lactic acid and its methyl ester, indole-3-propionic acid, indole-3-pyruvic acid, p-hydroxyphenyl acetic acid, p-hydroxyphenyl acetic acid methyl and ethyl ester, phenyl acetic acid and its methyl ester. The bacterium KGPP 207 belongs to the strain of P. fluorescens which produces plant growth regulators and its beneficial effect on the ginseng growth may be due to the formation of the identified compounds.
Leonid, N.Ten;Lee, Mee-Kyoung;Lee, Mi Ja;Park, Hoon
Journal of Applied Biological Chemistry
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제43권4호
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pp.269-272
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2000
The ginseng growth-promoting bacterium Pseudomonas fluorescens KGPP 207 synthesized indole-3- acetic acid (IAA) from L-tryptophan, indole-3-pyruvic acid (IPyA), and indole-3-acetaldehyde (IAAld), but not from indole-3-acetamide (lAM) and other intermediates of various IAA biosynthetic pathways in the experiment with indole compound supplemented cell suspensions. TLC, HPLC, and GC-MS analyses revealed the presence of IPyA, indole-3-ethanol, indole-3-lactic acid and its methyl ester, IAA and its methyl, and ethyl esters in the culture supernatant of the bacterium. IAAld was detected in the supernatant using sodium bisulfite and TLC. The results indicate that unlike gall-forming bacteria which can synthesize IAA by lAM, the indole-3-pyruvic acid pathway is the route for IAA biosynthesis in this beneficial strain of P. fluorescens.
대한화장품학회 2003년도 IFSCC Conference Proceeding Book II
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pp.219-238
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2003
Indole-3-acetic acid (IAA) molecule has been successfully encapsulated in biocompatible inorganic matrix in order for the cosmetic application such as superfacial fine line reduction. The encapsulation was realized through chemical reaction involving simultaneous formation of inorganic lattice and 1M giving rise to an 1M-inorganic nanohybrid (IAA-brid) which shows excellent storage stability and sustained releasing property of indole-3-acetic acid. The clinical efficacy of essence cream containing IAA-brid as anti-wrinkle formulation was also carefully evaluated by measuring the roughness of the skin replica before and after treatment. Upon administration of the cream on the eye-area, the fine-line is drastically reduced.
Biosynthesis of indole-3-acetic acid (IAA) via the indole-3-pyruvic acid pathway involves three kinds of enzymes; aminotransferase encoded by aspC, indole-3-pyruvic acid decarboxylase encoded by ipdC, and indole-3-acetic acid dehydrogenase encoded by iad1. The ipdC from Enterobacter cloacae ATCC 13047, aspC from Escherichia coli, and iad1 from Ustilago maydis were cloned and expressed under the control of the tac and sod promoters in E. coli. According to SDS-PAGE and enzyme activity, IpdC and Iad1 showed good expression under the control of $P_{tac}$, whereas AspC was efficiently expressed by $P_{sod}$ originating from Corynebacterium glutamicum. The activities of IpdC, AspC, and Iad1 from the crude extracts of recombinant E. coli Top 10 were 215.6, 5.7, and 272.1 nmol/min/mg-protein, respectively. The recombinant E. coli $DH5{\alpha}$ expressing IpdC, AspC, and Iad1 produced about 1.1 g/l of IAA and 0.13 g/l of tryptophol (TOL) after 48 h of cultivation in LB medium with 2 g/l tryptophan. To improve IAA production, a tnaA gene mediating indole formation from tryptophan was deleted. As a result, E. coli IAA68 with expression of the three genes produced 1.8 g/l of IAA, which is a 1.6-fold increase compared with wild-type $DH5{\alpha}$ harboring the same plasmids. Moreover, the complete conversion of tryptophan to IAA was achieved by E. coli IAA68. Finally, E. coli IAA68 produced 3.0 g/l of IAA after 24 h cultivation in LB medium supplemented with 4 g/l of tryptophan.
The naturally occurring indole derivatives in mung bean (Phaseolus vidissinus) sprouts were investigated by means of paper and thin layer chromatographic techniques. The results can be summerized as follows: 1. The mung bean sprouts are richer in free tryptophan than other plant species. 2. Indole ethanol and indole lactic acid were identified. 3. The content of indole ethanol was more than that of indole acetic acid. This result appeared to support the idea that indole ethanol is the storage product of indole acetic acid.
비료제품에는 의도적 혹은 비의도적으로 농약으로 등록된 indole-3-acetic acid (IAA) 및 indole-3-butyric acid (IBA)성분에 대한 잔류 가능성이 꾸준히 제기되고 있으나, 생장조정제가 아닌 비료제품에서 mg/L 수준의 옥신류 잔류분석법이 마련되어 있지 않았다. 따라서, 본 연구에서는 생체시료에 미량 잔류하는 IAA 및 IBA 분석에 사용되어 온 liquid chromatography-mass/mass spectrometry (LC-MS/MS)와 gas chromatography-MS 기기분석법을 활용하여 농축 액상비료제품에 적용할 수 있는지 조사하였으며, 액상 비료제품에 적용 가능한 정밀기기 분석법을 개발하고자 하였다. 수용액 상태의 시료에서 식물 생장호르몬인 IAA와 IBA를 가장 손쉽게 정제할 수 있는 방법으로 hydrophile-lipophile balance (HLB) solid phase extraction를 활용하였으나, 제한된 조건에서 LC-MS/MS를 통한 정량분석은 적합한 회수율을 확보하지 못하였고, 정성분석만 가능함을 확인하였다. 반면, 비료제품 250배 희석액을 사용하여 HLB 정제, trimethylsilyl chloride을 이용한 methylation을 통한 GC-MS 분석에서는 검출한계 1.4 mg/L과 93-107%의 회수율로 액상 비료제품에서 IAA와 IBA 정량분석법을 확립할 수 있었다.
새로운 인돌 유도체인 항염증제를 합성하기 위하여 ${\alpha}$-benzoyl-1-ethyl-1,3,4,9-tetrahydro-8-ethyl-9-(N-benzoyl)pyrano[3,4-b]indole-1-acetic acid methyl ester(10)을 합성하였다. 출발물질은 7-ethylindole과 oxalyl chloride로 하여 4단계로 이루어졌다. 셋째 단계는 borontrifluoride diethyl etherate을 사용하여 66%로 고리화반응을 하였으며, 환원반응과 고리화반응도 효율적으로 단순화하였다. 최종생성물인 ${\alpha}$-benzoyl-1-ethyl-1,3,4,9-tetrahydro-8-ethyl-9-(N-benzoyl)pyrano[3,4-b]indole-1-acetic acid methyl ester는 4단계에서 얻은 methyl 1,8-dimethyl-1,3,4,9-tetrahydropyrano[3,4-b]indole-1-acetate(etodollic acid methyl ester)를 benzoyl chloride와 반응하여 66%의 수율로 얻었다.
방사선 조사에 의한 발아 억제기작을 살펴보기 위하여 $4^{\circ}C$ 에서 저온 처리 한 감자에 0.12 kGy 감마선을 조사한 후 5주 동안 $20{\pm}2^{\circ}C$, 상대습도 $70{\sim}90%$에서 저장하였다. 이 기간 중 발아에 관여된다고 생각되는 ${\alpha}-amylase$, peroxidase, indole acetic acid (IAA) oxidase, IAA synthesizing enzyme의 활성 변화를 추적하였다. 시판 ${\alpha}-amylase$와 peroxidase의 방사선 감수성은 0.94와 0.36 kGy의 감마선 조사하여 $D_{37}$ 값을 얻었다. 감마선 조사를 행한 감자의 IAA oxidase 역가는 조사후 급격히 증가됐고 IAA 합성 효소의 역가는 조사직후 조금 증가하였으나 저장 기간에 따라 크게 감소하였다. 형태적인 변화에서 조사된 감자에서는 성장점의 고사와 변형된 눈이 관찰되었고 IAA 흑은 gibberellin 등의 처리에 의해 이들 자체로는 회복되지 않았고 그 주위로 새로운 눈의 성장이 관찰되었다. 결론으로 방사선 조사에 의해 야기된 감자의 호흡은 탄수화물이 ${\alpha}-amylase$등의 효소에 의한 분해로 이루어져 ATP를 공급하며 뒤이은 peroxidase 역가의 증가와 같은 효소의 합성은 방사선에 의한 손상을 치유하려는 과정에 속한다 할 수 있다. 또한 눈의 생장점에서의 고사 현상은 손상에 대한 방어 작용의 일종이라 해석되며 이로인한 발아 억제 현상을 페놀 대사와 관련지어 추측할 수 있었고 증가된 IAA oxidase와 IAA 합성계의 파괴에 의한 IAA의 고갈 역시 방사선 조사에 의한 발아 억제 현상의 원인이 됨을 알 수 있었다.
간단한 용매추출 조작에 의한 콩나물에서의 Indole-3-acetic acid(IAA)분석에 관하여 연구하였다. 콩나물 재배시 성장촉진제로 사용되는 인돌비액제의 주성분인 IAA의 추출은 80% Acetone 100ml와 Methanol 50ml 혼합 용액으로 하였으며, 추출 농축된 시료를 14% $BF_3$/methanol로 methyl ester화하여 GC/MSD로 분석하였다. 본 분석방법의 회수율은 약 80%로서 우수하였으며, 이 분석방법을 이용하여 시중에 유통중인 포장 콩나물에서의 IAA분석을 시도하였다.
농업 재배지 토양으로부터 auxin 생성세균 KSD16, KSD33 그리고 KSD36를 분리하였다. 분리균주 KSD16, KSD33 그리고 KSD36 는 16S rRNA 유전자 계통분석을 통해 Arthrobacter 속으로 분류되었다. 이들 균주는 R2A배지에 0.1% L-tryptophan를 첨가한 배지에서 28℃, 48 시간 배양한 결과, auxin의 일종인 indole-3-acetic acid (IAA)를 204.4 mg L-1 생성하는 것으로 확인되었다. IAA 생성세균의 녹두종자 발아에 미치는 영향을 확인한 결과, Arthrobacter 속 균주 KSD16, KSD33 그리고 KSD36 는 대조군에 비해 뿌리길이와 발근수가 증가하였다. Arthrobacter 속 균주의 녹두 성장촉진 효과를 확인한 결과, 녹두의 발아율이 대조군보다 73.4 % 증가하는 특징을 나타내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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