Chemical modification of the S. cerevisiae farnesyl protein transferase (FPT) with CMC, phenylglyoxal and DEPC resulted in enzyme inactivation, depending upon the reagent concentration. The peptide substrate GST-PEP-I, a GST-fused undecapeptide mimicking the C-terminus of $p21^{Ki-ras}$, protected the enzyme against inactivation by CMC which is specific to either aspartate or glutamate, while the other substrate farnesyl pyrophosphate (FPP) showed protection against phenylglyoxal which is the specific modifier of arginine residues, dependent on the substrate concentrations. Neither of the two substrates protected the enzyme against histidine inactivation by DEPC. It is suggested that there is at least one aspartate or glutamate residue at the peptide substrate binding site, and that at least one arginine residue is located at the binding site of FPP. There also seems to be at least one histidine residue which is critical for enzymic activity and is exposed toward the bulk solution, excluded from the substrate binding sites.
자체 제작한 고전압 펄스 전기장 장치를 이용하여 당근주스의 주요 변패 미생물인 대장균(Escherichia coli)의 불활성에 미치는 전기장 세기, 처리시간, 온도 등을 관찰하고 품질변화에 관하여 연구하였다. E. coli의 불활성에 필요한 최소 전기장세기인 임계전기장 세기(Ec)는 11.74 kV/cm, 최소처리시간(tc)는 $3.6{\mu}s$이었다. 사멸효과는 전기장의 세기가 클수록, 처리시간이 길수록 그리고 처리온도가 높을수록 증가하였다. 당근주스의 pH, 가용성 고형분 $(^{\circ}Brix)$, 적정산도는 거의 변화가 없었다. 색도는 50^{\circ}$ 열병합 PEF처리 주스만이 약간 감소하는 경향을 보였지만 다른 처리구들은 변화가 거의 없었다. ${\alpha},\;{\beta}-carotene$의 함량도 거의 변화가 없었다.
본 연구에서는 이산화염소수를 이용한 계사 내 깔짚의 미생물 수 저감화를 통한 깔짚의 미생물학적 안전성 확보를 위하여 연구를 수행하였다. 사용하기 전의 깔짚에는 coliform, E. coli, Listeria spp., yeasts and molds 및 total aerobic bacteria가 높은 수준으로 검출되었으며 사용기간이 늘어남에 따라 미생물 수가 증가하였다. 500 ppm 이산화염소수를 이용한 살균처리에서는 coliform, E. coli, Listeria spp., yeasts and molds, total aerobic bacteria 및 Salmonella spp.의 균수가 모든 깔짚 시료에서 처리횟수에 따라 유의적으로 감소하였다. 사용하지 않은 깔짚에서는 coliform, E. coli, Listeria spp., yeasts and molds 및 total aerobic bacteria 수가 각각 4.47, 1.29, 1.23, 3.24 및 5.2 log CFU/g로 감소하였고, 1주 및 5주 사용한 깔짚의 경우도 모든 미생물 수가 현저하게 감소하였다. 따라서 본 연구 결과, 이산화염소수를 이용한 계사 내 깔짚의 미생물 수 저감화 방법이 도계된 계육의 미생물학적 안전성을 향상시키기 위한 방법으로 적합하다고 판단된다.
Conventional molecular detection methods cannot distinguish between viable and dead Escherichia coli O157 cells. In this study, the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) method combined with propidium monoazide (PMA) treatment was developed to selectively detect viable E. coli O157 cells. Four primers, including outer primers and inner primers, were specially designed for the recognition of six distinct sequences on the serogroups (O157) of the specific rfbE gene of the E. coli O157 genome. PMA selectively penetrated through the compromised cell membranes and intercalated into DNA. Amplification of DNA from dead cells was completely inhibited by $3.0{\mu}g/ml$ PMA, whereas the DNA derived from viable cells was amplified remarkably within 1 h by PMA-LAMP. Exhibiting high sensitivity and specificity, PMA-LAMP is a suitable method for evaluating the inactivation efficacy of slightly acidic electrolyzed water in broth. PMA-LAMP can selectively detect viable E. coli O157 cells. This study offers a novel molecular detection method to distinguish between viable and dead E. coli O157 cells.
본 연구에서는 신선 농산물의 미생물학적 안전성을 제고하기 위해 항균 효과가 있는 clove bud essential oil(CBEO)과 mild heat(MH) 처리를 병합 처리하여 Escherichia coli O157:H7이 접종된 red oak leaf의 미생물 수 변화를 측정하였다. 0.2% CBEO와 $50^{\circ}C$ MH 병합 처리구는 단순 물세척 처리구보다 1.45 log CFU/g 더 낮은 미생물 수를 나타내어 모든 병합 조건 중 가장 높은 미생물 제어 효과를 보였다. 또한, 본 병합 처리구는 비 세척 처리구와 비교하여 9일간의 저장 기간 동안 1.67~2.25 log CFU/g 더 낮은 미생물 수를 나타내어 미생물 제어 효과가 지속됨을 확인하였다. 따라서 이러한 결과들로부터 CBEO와 MH의 병합 세척 처리는 저장 중 red oak leaf와 같은 신선 농산물의 미생물학적 안전성을 확보하는 데 효과적으로 사용될 수 있다고 판단된다.
돼지 설사병은 부종병과 함께 양돈 농가에 막대한 경제적 손실을 입히는 가축질병으로 알려져 있으며, 병원성 대장균의 증식에 의하여 설사 및 대장균 생성 독소에 의한 부종병이 동반된다. 본 연구에서는 항균펩타이드를 포함하는 면역유도누에의 조추출물을 이용하여 돼지 설사 및 부종을 유발하는 F4+ 및 F18ab+ 대장균의 사균체를 제작하고 사균백신으로서 이용가능성을 검토하였다. 면역유도누에 추출물의 항균활성을 환확산법을 통해 분석한 결과 F4+ 및 F18ab+ 대장균에 대하여 높은 활성을 나타내었으며, 평판계수법을 이용하여 대장균의 사균체 생산효율을 분석한 결과 50 mg/ml의 농도를 4℃에서 처리했을 때 가장 높게 나타났다. 또한 제작된 사균체에 대해서 투과전자현미경을 이용하여 분석한 결과 세포질은 유출되고 세포막만이 남아있는 대장균이 확인되었다. 따라서 면역유도누에 추출물을 이용하여 제작된 F4+ 및 F18ab+ 대장균은 부종병 예방을 위한 사균백신으로서 이용가능성이 매우 높을 것으로 판단된다.
본 연구는 병원성 Escherichia coli O157:H7 균주에 의한 식중독을 미연에 예방하고자 우육에 본 균주를 오염, 동결시켜 전자선에 의한 살균효과를 조사하였다. $37^{\circ}C$에서는 배양 16시간째에 최대균수를 나타내었고 $4^{\circ}C$에서는 균주의 증식이 거의 없었다. E. coli O157:H7 균주는 대수기나 정지기 모두가 $0^{\circ}C$ (chilled)와 $-18^{\circ}C$ (frozen)에서 배양시 약 $10^{7}\;CFU/mL$의 균수를 나타내었고 $-18^{\circ}C$에서는 $20^{\circ}C$ 보다 균주의 사멸율이 높았다. 동결육에 오염된 E. coli O157:H7 균주의 방사선 감수성은 $D_{(10)}$ 값이 0.45 kGy, 불활성화계수가 $3{\sim}5\;kGy$에서 $6.67{\sim}11.11$로 각각 나타났다. 본 결과로서 전자선 조사는 동결육에 오염된 E. coli O157:H7 균주의 제거방법으로 매우 효과가 있었다.
Kim, Sung-Ho;Park, En-Joung;Yoon, Sung-Sook;Choi, Jung-Do
Bulletin of the Korean Chemical Society
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제24권12호
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pp.1799-1804
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2003
Acetolatate synthase(ALS) catalyzes the first common step in the biosynthesis of valine, leucine, isoleucine in plants and microorganisms. ALS is the target of several classes of herbicides, including the sulfonylureas, the imidazolinones, and the triazolopyrimidines. To elucidate the roles of arginine residues in tobacco ALS, chemical modification and site-directed mutagenesis were performed. Recombinant tobacco ALS was expressed in E. coli and purified to homogeneity. The ALS was inactivated by arginine specific reagents, phenylglyoxal and 2,3-butanedione. The rate of inactivation was a function of the concentration of modifier. The inactivation by butanedione was enhanced by borate, and the inactivation was reversible on removal of excess butanedione and borate. The substrate pyruvate and competitive inhibitors fluoropyruvate and phenylpyruvate protected the enzyme against inactivation by both modifiers. The mutation of well-conserved Arg198 of the ALS by Gln abolished the enzymatic activity as well as the binding affinity for cofactor FAD. However, the mutation of R198K did not affect significantly the binding of FAD to the enzyme. Taken together, the results imply that Arg198 is essential for the catalytic activity of the ALS and involved in the binding of FAD, and that the positive charge of the Arg is crucial for the interaction with negatively charged FAD.
This paper reports that the installation of a carbon fiber ionizer in front of an activated carbon fiber(ACF) filter enhanced the antibacterial efficiency. In addition, the effect of the ionizer on the filtration of bioaerosols is reported. Negative air ions from the ionizer were used as antibacterial agent. The test bacteria(Escherichia coli) were aerosolized using an atomizer and were deposited on the ACF filter media for 10 minutes. E. coli deposited on the filter were exposed to negative air ions for 0, 1, 5 and 10 minutes. Then they were separated from the ACF filter by shaking incubation with nutrient broth for 4 hours. The separated E. coli were spread on nutrient agar plates and incubated at $37^{\circ}C$ for 1~3 days. The antibacterial efficiency of E. coli was measured using a colony counting method. The antibacterial efficiencies of E. coli exposed to negative air ions for 1, 5 and 10 minutes were 14%, 48% and 71%, respectively. The filtration efficiency was evaluated by measuring the number concentration of bioaerosols at the upstream and downstream of the filter media. The increase of filtration efficiency by air ions was 14%, that is similar to the 17% filtration efficiency by none air ions. The ozone concentration was below the detection limit (under 0.01ppm) when the carbon fiber ionizers were on.
신선절단 사과에 E. coli O157:H7과 L. monocytogenes를 인위적으로 접종한 후 백년초 추출물 처리에 따른 저장 중 미생물 수 변화를 조사하였다. 신선절단 사과에 접종된 E. coli O157:H7과 L. monocytogenes의 초기 균수가 5~6 log CFU/g이 되게 하였고, 사용한 백년초 추출물은 25, 50, 100, 200 mg/mL이었으며 4, $21^{\circ}C$에서 8일간 저장하였다. E. coli O157:H7은 백년초 추출물 50 mg/mL 이상 처리구에서 유의적으로 E. coli O157:H7 생육저해 효과가 나타났음을 확인할 수 있었으며, 온도별로는 $21^{\circ}C$ 저장 시에 생육 억제효과가 더 큰 것으로 판단되었다. L. monocytogenes는 E. coli O157:H7에 비교하여 매우 민감하게 반응하였으며 저장 온도별 차이는 크지 않았다. 특히 50 mg/mL 이상 처리구에서 2일째부터 4, $21^{\circ}C$ 저장 시 모두 L. monocytogenes가 검출한계 이하로 관찰되어 생육억제에 매우 효과적임을 확인할 수 있었다. 그리고 관능평가에서는 100~200 mg/mL 이상의 백년초 추출물 처리가 신선절단 사과의 품질을 잘 유지하는 것으로 나타났다. 따라서 본 연구결과, 백년초 추출물 처리는 신선 절단 사과의 저장, 유통 중 오염될 수 있는 E. coli O157:H7과 L. monocytogenes의 생육억제에 매우 효과적인 천연물이며, 향후 미생물학적 안전성 확보와 신선식품의 품질유지 향상에 효과적인 천연물 항균제로서 개발 가능하리라 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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