We describe culture conditions for a high-efficiency in vitro regeneration system of Papaver nudicaule through somatic embryogenesis and secondary somatic embryogenesis. The embryogenic callus induction rate was highest when petiole explants were cultured on Murashige and Skoog (MS) medium containing 1.0 mg $1^{-1}$${\alpha}$-naphthaleneacetic acid (NAA) and 0.1 mg $1^{-1}$ 6-benzyladenine (BA) (36.7%). When transferred to plant growth regulator (PGR)-free medium, 430 somatic embryos formed asynchronously from 90 mg of embryogenic callus in each 100-ml flask. Early-stage somatic embryos were transferred to MS medium containing 1.0 mg $1^{-1}$ BA and 1.0 mg $1^{-1}$ NAA to germinate at high frequency (97.6%). One-third-strength MS medium with 1.0% sucrose and 1.0 mg $1^{-1}$$GA_3$ had the highest frequency of plantlet conversion from somatic embryos (91.2%). Over 90% of regenerated plantlets were successfully acclimated in the greenhouse. Secondary somatic embryos were frequently induced directly when the excised hypocotyls of the primary somatic embryos were cultured on MS medium without PGRs. Sucrose concentration significantly affected the induction of secondary embryos. The highest induction rate (89.5) and number of secondary somatic embryos per explant (9.3) were obtained by 1% sucrose. Most secondary embryos (87.2-94.3%) developed into the cotyledonary stage on induction medium. All cotyledonary secondary embryos were converted into plantlets both in liquid and on semisolid 1/3-strength MS medium with 1.0% sucrose.
Indian citrus ringspot virus (ICRSV)-free plants of Kinnow mandarin (Citrus nobilis Lour x C. deliciosa Tenora) were raised from virus-infected plants using unfertilised ovules as explants. Plants were tested by indirect ELISA and RT-PCR before using their explant. An amplified product of 539 bp was obtained by RT- PCR in ICRSV infected plants. Unfertilized ovules were excised from unopened flower buds of plants tested postive for virus and were cultured on Murashige and Skoog's (MS) basal medium supplemented with various concentrations of kinetin (KN) or malt extract (ME). Maximum induction (31.94%) of embryogenic callus was observed on MS medium supplemented with KN ($9.29\;{\mu}M$). Transfer of embryogenic calli to similar media composition resulted in somatic embryogenesis in all cultures, with an average number of 60.36 globular, 17.39 heart and 7.71 cotyledonary-shaped somatic embryos per culture. All cotyledonary shaped embryos developed into complete plantlets within 60 days on transfer to similar medium. Embryogenic callus induction, somatic embryo formation, maturation, germination and plantlet formation were achieved on MS medium supplemented with KN ($9.29\;{\mu}M$) alone. The plantlets derived from somatic embryos were transferred to sterilized soil, sand and vermiculite (3:1:1) mixture. After acclimatization, the plantlets were transferred to screen house and were indexed for ICRSV employing indirect ELISA and RT-PCR and found free of virus. A distinct feature of this study is the induction of somatic embryogenesis from unfertilised ovules to produce virus-free plants.
Rhodiola sachalinensis has been used as a traditional medicine in Asia. We were germination in vitro seedling of grow naturally in Chang bai Moutain. And callus induction from leaf segments, treatmented plant regeneration in plant growth regulators (Auxins and cytokinins). We investigated optimal conditions for efficient plant regeneration through callus induction and shoots formation on medium with various kinds of growth regulators. Callus induction and adventitious shoots formation was achieved when cytokinin and auxin combinated to this experiment. Especially, there was the highest callus induction rates when we were used to 1 mg/L kinetin and 2 mg/L NAA $(98\%)$, Adventitious shoots formation wear obtained difference rate when cytokinin alone 1 mg/L BA $(96.6\%)$. And regenerated plantlet was acclimatized and transplanted to the soil, showed $100\%$ survival.
This experiment was conducted out to investigate the effect of plant growth regulators on callus and shoot formation. The callus formation was effective on 1/2 MS medium containing 2,4-D, while shoot formation was suppressed. Shoot formation and differentiation were the highest in combination 0.1 mg/L of IAA and 0.1 mg/L of BA. The polarity of explants was investigated from cotyledon, which excised 20% of each basal and terminal parts. Formation of shoot was induced from excised ends of the basal part. In excised ends of the basal part, callus was induced vigorously and shoots were produced lately. Root induction was easily achieved in 1/3 MS medium from the adventitious shoot and more than 90% of regenerated plantlets acclimatized successfully and flowered normally.
Chinese foxglove (Rehmannia glutinosa) is receiving much attention as one of the principal medicinal crops and the crude drug damand expands rapidly.This study was conducted to obtain the basic breeding information of Chinese foxglove. Effects of supplemental plant growth regulators were investigated on leaf tissue for proliferation. 100% callus formation, 31% plantlet regeneration and 6% root differentiation were obtained by adding 0.5 mg/L NAA and 2.0 mg/L BA. 2,4-D and Zeatin treatment also resulted in 95% increase in callus formation, but shoot was not formed. During the subculture, callus propagation rate recorded 15.4% with 0.2 mg/L NAA and 1.0 mg/L BA and plant regeneration improved on MS medium supplemented with 0.2 mg/L NAA and 0.5 mg/L kinetin. The number of shoot formed ranged from 1.7 on WPM medium to 3.4 on MS medium with 0.1 mg/L NAA and 0.5 mg/L BA. Supplementation of 1.0 g/L activated charcoal improved the In vitro plant growth.
This studies were conducted to improve the root formation of plantlet derived from shoot tip culture and to evaluate the optium transplanting date of Cnidium officinale Makino in field. The rooting rate of shoot-tip derived plantlets was 81% on media containing 1.0 mg/L IBA and 0.05 mg/L BA within 30 days after culture. Upon transfer into potting soil, the seedling grown well under 75% shading. Optimal transplanting date on taking roots and rhizome growth was May 5 in field.
Effective micropropagation system via somatic embryognesis was established for a Phytophthora resistant Aralia elata cultivar. Different kinds of growth regulators were needed to induce embryogenic callus with different explant sources. When leaf explants were used, a combination of 2,4-D, TDZ and L-glutamine was needed, whereas when petiole and root explants needed only 1.0 mg/L 2,4-D. Embryogenic callus induction rate under the optimum culture condition was 75.0%, 67.0% and 83.0% from leaf, petiole and root segment, respectively. Somatic embryo germination and plantlet conversion rate appeared to be influenced greatly by various osmoticums. More than 90% of embryos germinated when treated with sucrose, glucose and maltose. However, the highest conversion rate (72%) was recorded on medium with 2% sucrose only. The converted plantlets grew normally on 1/2MS basal medium, were acclimatized on artificial soil mixture and survived more than 95% in the greenhouse condition. The results suggest that the species can be clonally propagated through in vitro culture system via somatic embryogenesis.
An efficient in vitro protocol has been established for somatic embryogenesis and plantlet conversion of Korean wild ginseng (Panax ginseng Meyer). Wild-type and mutant adventitious roots derived from the ginseng produced calluses on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 0.5 mg/L 2,4-dichlorophenoxyacetic acid and 0.3 mg/L kinetin; 53.3% of the explants formed callus. Embryogenic callus proliferation and somatic embryo induction occurred on MS medium containing 0.5 mg/L 2,4-dichlorophenoxyacetic acid. The induced somatic embryos further developed to maturity on MS medium with 5 mg/L gibberellic acid, and 85% of them germinated. The germinated embryos were developed to shoots and elongated on MS medium with 5 mg/L gibberellic acid. The shoots developed into plants with well-developed taproots on one-third strength Schenk and Hildebrandt basal medium supplemented with 0.25 mg/L 1-naphthaleneacetic acid. When the plants were transferred to soil, about 30% of the regenerated plants developed into normal plants.
For the induction of somatic embryogenic callus, the penduncle explants of Corydalis remota for peatinata were cultured on MS basal media supplemented with 2,4-D, kinetin and zeatin. The highest embryogenic callus formation was observed on the media containing 2.0 mg/L of 2,4-D and 2.0 mg/L of zeatin. The somatic embryogenesis on the media with 0.5 mg/L of cytokinin (zeatin or kinetin) were excellent under light condition, however somatic embryos abnormally developed into plantlets. Normal dicotyledonary plantlets were found on MS medium supplemented with 1.0 mg/L of zeatin. When MS medium with 2,4-D plus cytokinin and with BAP were used, the secondary somatic embryogenesis took place in root explants of the regenerants derived from in vitro somatic embryogenic callus.
To clarify the possibility of plant production under red, green. blue, and red+blue using light emitting diodes (LEDs) and fluorescent lamps (control), the effects of light quality on the growth and morphogenesis of in vitro seedlings in Piatycodon grandiflorum were examined. The plantlets grown under the LEDs resulted in taller plants with greater stem than fluorescent lamps. The shortest shoot length, 3.8 cm, was observed in the control and the longest one, 13.4 cm, in the red light. But the shoot length was 5.6 cm under red LED with supplemental blue(red+blue light). This results indicate that red LED may be suitable, in proper combination with other wavelengths of light. The root length under red light was significantly smaller among the treatments. The plantlets grown under red+blue light had lower shoot dry weight, higher dry matter than other lights-grown plantlets. Among the various growth parameters measered, there was an indication that leaf area was controlled by the LEDs. Leaf area of a plantlets developing under green light was about 2.4 times wider than that of plantlets grown under red LED (10.1 $\textrm{cm}^2$ in area). The dry matter rate per plantlet among the treatments was greater in plantlets grown under the red/blue LEDs in comparison with that grown under other LEDs. Chlorophyll contents in plantlets grown under the red, green, blue and red/blue LEDs were 2%, 7% 20% and 10% lower, respectively, than those in plant grown under fluorescent lamps.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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