속단 주정추출물의 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량은 각각 $57.32{\pm}2.30{\mu}g$/mg, $21.44{\pm}2.52{\mu}g$/mg이고, FRAP 소거활성은 0.26 mmol $Fe^{2+}$/g으로 나타났으며, 속단추출물은 또한 높은 DPPH 소거능 및 gram 양성균인 Staphylococcus aureus에 대해 항균 활성을 보였다. 속단 주정추출물을 첨가한 양념소스에서도 시료첨가량이 증가할수록 DPPH 소거능이 증가하였다. 또한 돈육을 속단 주정추출물을 첨가한 양념돈육을 제조하여 $4^{\circ}C$에서 21일간 저장하면서 품질특성을 검토한 결과, 속단추출물 첨가 양념돈육은 0.1% BHA 처리구와 유사하게 대조구에 비해 총 세균 수 및 지방 산패도가 감소되었으며 대장균은 검출되지 않았다. 관능평가에서도 0.5% 속단 주정추출물을 첨가하면 높은 다즙성, 풍미, 전반적인 기호도에서 높은 평가를 받았다. 따라서 항산화능 및 항균 활성을 가진 속단추출물은 양념돈육에서 저장성 및 품질 특성의 개선에 도움을 줄 수 있는 소재로 여겨진다.
PLGA는 생분해성 고분자이며 생체적합성을 갖는 고분자로서 약물전달을 위한 연구에 많이 이용되고 있는 고분자이다. 그러나 PLGA를 약물전달에 이용할 때 약물의 급격한 초기방출 이후에 일정기간동안 약물이 방출되지 않는 지연시간이 존재하게 된다. 이러한 문제를 해결하기 위하여 PLGA 웨이퍼에 단량체를 첨가하여 제조하였다. 또한 PLGA를 재결정하여 약물의 급격한 방출 현상을 억제하도록 하였다. SEM을 이용하여 재결정된 PLGA의 형태학적 차이를 관찰하였으며 생체외 약물 방출거동은 HPLC를 이용하여 측정하였다. PLGA의 분해과정에서 단량체의 영향을 알아보기 위하여 GPC를 이용하여 분자량 변화를 측정하였다. 본 연구를 통하여 PLGA의 벌크분해에 기인한 지연시간을 없앨 수 있었으며 약물의 방출 기간을 3일까지 앞당길 수 있었다.
This study was designed to investigate the effects of plum(Prunus salicina Lindl. cultivars 'Oishiwase', 'Formosa', and 'Soldam') extracts on the proliferation as well as inhibition of human epithelial cells(HaCaT), human cervical carcinoma (HeLa, SiHa, and C33A) cells, and human stomach adenocarcinoma(SNU 638) cells. Dried plum was sequentially extracted and fractionated by hexane(KC-01), chloroform(KC-02), ethyl acetate(KC-03), n-butanol(KC-04), water(KC-05), methanol(KC-6), and hot water extract(KC-07). The epithelial and cancer cells were exposed for 48 h to $50{\mu}g/mL$ of plum extract in vitro, and were then analysed by a sulforhodamin B(SRB) staining assay. The methanol extract(KCP-6) of 'Formosa' proliferated not only the HaCaT cells(147.3%), but also the cervical carcinoma C33A cells(167.8%). The ethyl acetate extract of 'Soldam'(KCJ-3) significantly reduced the proliferation rate of the HPV positive conical carcinoma cells, at 61.5% for the SiHa cells and 70.5% for the HeLa cells. In the C33A cells, which are HPV negative cervical carcinoma cells, the hexane fractions of 'Formosa'(KCP-1) and 'Oishiwase'(KCD-1) markedly suppressed proliferation activity at 20.4% and 61.7%, respectively. However, the proliferation rate of the normal epithelial cells(HaCaT cell) was not reduced the proliferation rate by KCJ-3, KCP-1, or KCD-1, There were no significant effects on proliferation of the stomach cancer cells(SNU 638) by any of the extracts or fractions of the plum cultivars. These results suggest that the anti-proliferative effects of the plum cultivars were selective to the cancer cell origin. In conclusion, we found that several plum cultivar extracts, especially, the ethyl acetate fraction of 'Soldam" and the hexane fraction of "Formosa', have anti-proliferative activity toward human cervical carcinoma cells. However, further investigation is needed to assess the molecular mechanisms that mediate the antiproliferation activities of the plum cultivars.
본 연구에서는 미백 화장품 원료를 개발하기 위해 중국에서 전통적으로 사용되어 오던 47종의 천연약재 또는 복합처방 중에서 멜라닌 생성 저해 효과를 지닌 원료를 찾고자 하였다. 그 중 버섯 티로시나제 활성 실험에서는 저해 효과를 보이지 않았으나, B16-F10 멜라닌 생성세포(B16-F10 melanoma cell)를 이용하여 류기노와 단삼을 선별하였으며 단삼에서 단삼소(丹蔘素, $\alpha$,3,4-trihydroxybenzenepropanoic acid sodium salt)를 분리하여 B16-F10 멜라노마 세포를 이용하여 멜라닌 생성 억제에 관한 실험을 실시하였다. 류기노와 단삼소는 농도에 따라 멜라닌 생성을 억제하였으며, 류기노는 $300\;{\mu}g/mL$의 농도에서 약 60%, 단삼소는 $100\;{\mu}g/mL$의 농도에서는 약 50%의 멜라닌 생성 저해 효과를 보였다. 따라서 연구 결과로써 얻어진 2종의 원료는 새로운 천연 미백 소재로 적용할 수 있을 것으로 기대된다.
소리쟁이 주정추출물은 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량이 각각 $108.24{\pm}3.29\;{\mu}g/mg$, $33.06{\pm}2.24\;{\mu}g/mg$이었고, 환원제로 작용하며 DPPH 소거활성을 가지는 높은 항산화능을 보였다. 소리쟁이 추출물을 첨가한 양념소스에서도 시료첨가량이 증가할수록 DPPH 소거능이 증가함을 확인하였다. 또한 소리쟁이 추출물을 첨가한 양념 돈육을 제조하여 $4^{\circ}C$에서 21일간 저장하면서 품질특성을 검토한 결과, 소리쟁이 첨가 양념돈육은 0.1% BHA 처리구와 유사하게 대조구에 비해 총세균수 및 지방산패도가 감소되었으며, 대장균군은 검출되지 않았다. 특히 소리쟁이 추출물을 1% 첨가한 양념돈육은 대조구보다 냄새, 다즙성, 연도에서 높은 관능값을 보였다. 따라서 우수한 항산화능을 가진 소리쟁이 추출물은 양념 돈육에서 저장성 및 품질특성의 개선에 도움을 줄 수 있는 소재라고 여겨진다.
수확한 밀감(Satsuma mandarin)을 grapefruit 종자 추출물(GFSE)로 처리하여 $15{\sim}20^{\circ}C$, 상대습도 60% 조건하에서 저장하면서 밀감과피의 파손 및 연화정도를 대조구(GFSE 무처리구)와 비교하고, 오염곰팡이를 분리하여 (GFSE 처리가 곰팡이 생육에 미치는 항균효과 실험을 실시함과 동시에 투과전자현미경을 이용하여 곰팡이 포자의 형태변화를 중심으로 항균효과를 관찰하였다. 저장 8주후, 대조구의 경우, 밀감시료중 80% 정도는 과피가 심하게 곰팡이로 오염되어 파손되었으며 내부과육조직도 연화되어 폐기현상을 보인 반면, 100ppm의 GFSE 처리시험구의 경우, 밀감시료의 27% 정도 곰팡이가 오염되었고, 그 중 반수정도만 과피가 분해 파손 되었으며 250ppm GFSE 처리시험구는 단지, 13%의 밀감과피에서만 곰팡이가 오염되었을 뿐아니라, 박피해낸 과육의 조직감도 우수하였고 과즙액의 용출현상도 보이지 않아 기호도면에서 저장초기의 밀감시료에 뒤떨어지지 않는 것으로 나타났다. 한편, 변패밀감과피에 오염된 Penicillium속 곰팡이를 분리하여 GFSE 처리에의한 곰팡이 생육저해율을 조사한 결과, 100ppm 농도에서 71.8%, 250ppm 농도에서 91.2%, 500 ppm 이상의 농도처리로 100% 저해율을 나타냄으로써, 곰팡이에 의한 밀감변패현상을 방지하기 위한 GFSE의 최소저해농도는 $250{\sim}500ppm$ 정도로 판명되었다. 또한, GFSE 처리 전후의 곰팡이 포자 conidia의 세포구조를 비교 검토한 결과, GFSE 처리에 의하여 포자벽주위의 세포구조가 붕괴되고 포자내용물의 유실현상이 심화되어. 곰팡이의 증식기능이 크게 상실되어 곰팡이를 사멸케 하는 결과를 초래하는 것으로 나타났다.
동결 오디(Mulberry) 10 kg을 80% 에탄올(EtOH)로 추출하고 분획깔때기 상에서 헥산(n-hexane), 에틸아세테이트(EtOAc) 및 물 가용부로 분획하였다. 에틸아세테이트 가용부(22 g)를 Sephadex LH-20으로 충진한 칼럼에서 MeOH-$H_2O$ (2 : 1~1 : 3, v/v)을 용출용매로 사용하여 칼럼크로마토그래피를 실시하였다. 단리된 화합물들은 셀룰로오스 박층크로마토그래피(TLC)로 확인한 후 $^1H-$, $^{13}C$-NMR 등의 스펙트럼을 사용하여 정확한 구조를 구명하였고 FAB 및 EI-MS로써 분자량을 측정하였다. 오디의 에틸아세테이트 가용부에서 quercetin-3-O-${\beta}$-D-glucopyranoside (화합물 1), protocatechuic acid (화합물 2), p-hydroxybenzoic acid (화합물 3)을 단리할 수 있었다. 항산화 시험 결과 에틸아세테이트와 물 가용부에서 BHT보다 우수한 활성을 나타내었으며 MTT assay에 의한 세포생존율 측정결과 세포독성은 없는 것으로 나타났다. 또한, 미백활성 및 항암활성은 낮았지만 세포신장 효과가 우수하여 주름개선 화장품 소재로서 충분히 이용 가능성이 있는 것으로 판단되어 진다.
홍차 열수추출물의 멜라닌 합성 저해능과 작용기전을 알아보기 위해 in vitro 실험으로 항산화능을 확인한 후, melan-a 세포를 사용하여 멜라닌 합성 저해능, tyrosinase 활성 저해능 및 발현저해능 등에 대한 실험을 실시하여 다음과 같은 결과를 얻었다.(1) 항산화능 실험에서 홍차 열수추출물의 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량은 각각 102, 87 mg/g으로 양성대조군인 알부틴(25, 11 mg/g)보다 높았고, 전자공여능 역시 800 ${\mu}g$/mL에서 82%로 알부틴(48%)보다 높았다. (2) Melan-a 세포 실험에서 홍차 열수추출물은 수지상돌기의 발달과 멜라닌 생합성을 효과적으로 저해하였고, 멜라닌 합성 저해능과 tyrosinase 활성 저해능이 알부틴보다 유의하게 (p<0.001) 높았다. (3) Tyrosinase 단백질 발현 저해능 실험에서 알부틴은 발현에 유의한 영향을 미치지 않은 반면, 홍차 열수추출물은 발현을 유의하게 (p<0.001) 저해하였다. (4) 유전자 발현 저해능 실험에서 알부틴과 홍차 열수추출물 모두 tyrosinase, TRP-1과 TRP-2의 mRNA 발현에 영향을 미치지 않았다. 본 연구를 통하여, 홍차 열수추출물은 우수한 항산화능과 함께 멜라닌 합성 저해능을 확인하였으며, 이는 tyrosinase의 생합성을 저해시키기 보다는 tyrosinase 단백질 발현량을 줄이고 tyrosinase 활성을 감소시킴으로써 멜라닌 합성을 저해시키는 것으로 사료된다.
Objectives : This study was performed to efficiently make Black Panax Ginseng (BPG) and evaluate its antitumor activity. Methods : Panax ginseng was steamed at $95^{\circ}C$ for 3 h, dried and steamed again at $115^{\circ}C$ for 6 h. The main ginsenosides of BPG were $Rg_{3}$, $Rk_{1}$ and $Rg_{5}$. Results : Among the saponins in BPG, the amount of ginsenoside $Rg_{3}$ was determined by HPLC method. The 11.48 mg of ginsenoside $Rg_{3}$ was obtained from lg of dried BPG. The crude saponin fraction (CSF) of BPG was tested in vitro for its cytotoxic activities against various human cancer cell lines, such as ACHN, NCI-H23, HCT-15 and PC-3. The CSF of BPG exhibited stronger cytotoxic activity than that of red Panax ginsneng. CSF of BPG exhibited good cytotoxic activities against ACFIN, HCT-15, and PC-3 cell lines with $IC_{50}$ values of 60.3-90.8 ${\mu}g$/ml. However, CSF of BPG did not show any cytotoxic activity against NCI-H23 cell line. Conclusions : BPG produced by new manufacturing is more effective than BPG produced by existing processing in anticancer activity. And new BPG has a possibility of investigation because of high contents of Rg3, Rk1 and Rg5 that have various phisological activities.
B. amyloliquefaciens IUB158-03균주에서 정제된 항진균물질은 극성인 용매에 잘 용해되고, pH 6.0~10.0와 $-70{\sim}121^{\circ}C$에서와 같이 넓은 범위의 온도 및 pH에서 안정성을 보였다. 항진균물질의 FAB-MS, UV 흡수 스펙트럼, 아미노산 조성 등을 분석한 결과 분자량은 1,042 이었고, TLC를 이용하여 분석한 결과 ninhydrin solution에서 보라색으로 발색되었다. UV 스펙트럼은 220 nm, 277 nm에서 ${\lambda}max$를 보였으며, $Asn_3$, $Gln_2$, $Ser_1$$Gly_1$, $Tyr_1$의 아미노산 조성을 갖는 것으로 나타났다. 그리고 $^1H$-NMR spectrum, $^1H$-COSY, HMQC 을 분석한 결과 iturin A계에 속하는 물질로 확인되었다. NIH3T3 섬유아세포에 대해 항진균물질이 세포독성을 나타내지 않는 것은 물론 마우스에 항진균물질을 경구투여하여 장기 내의 변화와 백혈구 수, 생체내의 생리적인 기능면에서 정상 마우스와 차이를 보이지 않았으므로 생체독성이 없는 것으로 나타났다. 따라서 본 연구를 통하여 B. amyloliquefaciens IUB158-03에서 분리된 항진균물질이 앞으로 고추탄저병의 생물적 방제제로 이용될 수 있는 잠재성을 갖고 있는 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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