천년초(Opuntia humifusa)에 존재하는 점질다당의 새로운 이용방안을 모색하기 위해 천년초로부터 다당을 분리하여 면역자극활성을 측정하였다. 천년초의 주요 다당 CNC-E는 상업용 효소처리, 물 추출 및 ethanol 침전을 거쳐 조제하고 이들의 특성을 검토하였다. CNC-E는 분자량 약 700 kDa의 다당체로, 구성당 조성을 확인한 결과, arabinose, galactose 및 xylose를 높은 비율로 함유하고 있었으며 rhamnose와 fucose를 미량 함유하고 있었다. 한편 CNC-E는 비장세포 유래 림프구에 대해서는 비교적 높은 증식활성을 농도 의존적으로 나타냈다. CNC-E로 자극한 macrophage는 IL-6, IL-12, IL-10 및 TNF-${\alpha}$와 같은 cytokine의 생산을 농도 의존적으로 증진시켰으며 CNC-E를 mouse에 정맥 주사한 후 얻어진 NK세포는 Yac-1 종양 세포주에 대한 높은 치사작용을 보였다. 특히 CNC-E를 mouse 당 $100{\mu}g$ 처리한 후 얻어진 NK세포는 미처리 대조군에 비해 3배 높은 치사활성을 나타냈다. CNC-E는 인체 초기 면역반응에 있어 중요한 역할을 담당하는 보체계에 대하여 농도 의존적인 활성을 나타냈으며, anti-human C3를 이용한 면역전기영동실험과 $Ca^{2+}$이온이 제거된 상태에서의 항보체 활성 실험을 통해 천년초 다당 CNC-E는 고전경로와 부경로를 모두 경유하여 활성을 나타내고 있음을 확인하였다. 이상의 결과로부터 한국산 선인장 천년초에는 인체에 유익한 면역 활성 다당체를 다량 함유함을 알 수 있었다.
We measured physiological functionalities, including antihypertensive angiotensin I-converting enzyme inhibitory activity and immun-stimulating ${\beta}$-glucan content for sixty kinds of Makgeolli that is commercially available from the market. As a result, we selected R-12 commercial raw Makgeolli, with a high content of immuno-stimulating ${\beta}$-glucan, and R-14 commercial raw Makgeolli, exhibiting high antihypertensive activity. Due to the similarities in their overall physicochemical properties and raw materials used for fermentation, we compared the microbial flora in order to investigate the reason for the differences in their functionalities. Nested PCR and denaturing gradient gel electrophoresis for yeasts and bacteria were performed for analysis of microbial diversity of two different kinds of Makgeolli (i.e., R-12, R-14), which showed immuno-stimulating ${\beta}$-glucan content and exhibited a very high level of antihypertensive activity, respectively. Analysis of the 18S rDNA amplicon revealed a major presence of the yeast strain Pichia burtonii in every Makgeolli sample. Analysis of the 16S rDNA amplicon revealed a predominance of lactic acid bacteria, and the most frequent lactic acid bacteria were Lactobacillus ingluviei, L. fermentum, and L. harbinensis, and Lactobacillus sp. Among these, L. harbinensis was detected only in R-12 and L. ingluviei was found only in R-14. Different functionalities from the individual commercially available Makgeolli may be attributed to actions of different microbial flora during fermentation.
본 연구는 한국의 전통발효식초가 지닌 새로운 생물학적 기능을 규명하기 위해 국내 및 국외에서 제조된 전통발효식초로부터 다당류를 분리하여 면역자극활성을 검토하였다. 국내산 현미식초 조다당(KBV-0), 일본산 현미식초 조다당(JBV-0) 및 국내산 감식초 조다당(KPV-0)을 분리하여 구성당 분석한 결과, KBV-0와 JBV-0는 주로 mannan으로 구성되어 있으며, KPV-0는 펙틴 유래 물질로 인한 조성으로 사료되었다. 3종의 다당 시료는 RAW 264.7 세포에 독성을 나타내지 않은 반면, RAW 264.7 세포를 자극하여 IL-6, IL-12 및 TNF-${\alpha}$와 같은 사이토카인의 생성을 농도 의존적인 경향으로 증진시켰으나, 특히 KPV-0의 활성이 KBV-0와 JBV-0보다 더 우수하였다. 또한 KPV-0는 대식세포의 포식작용과 관련있는 FcR II의 발현량을 유일하게 증가시켰다. 이상의 결과로부터 국내산 전통발효 감식초인 KPV-0는 다른 발효식초에 비해 더 우수한 면역활성을 지니는 것으로 나타났으며, 이는 기능성 소재로의 산업적 응용이 가능할 것으로 사료되었다.
S. cereviaiae KCTC 7911에 돌연변이를 유도하고 selective pressure로서 세포벽 분해효소인 zymolsae와 mechanical stress인 glass bead를 차례로 처리하여 효모변이주를 S. cerevisiae IS2를 선발하였다. S. cerevisiae IS2는 세포벽 분해효소인 zymolase의 농도별 내성실험 결과 wild-type에 비해 훨씬 강한 내성을 보여 세포벽에 변화가 일어난 균주로 예상된다. 효모변이주와 wild-type으로부터 베타글루칸을 추출하여 면역활성에 미치는 영향을 조사하기 위해 생쥐의 복강에 주사하고 생성되는 면역세포의 수, NO 생성능, 및 면역세포의 대다수를 차지하는 대식세포의 탐식능을 측정하였다. 베타글루칸을 쥐의 복강에 주사하였을 때 베타글루칸의 종류에 상관없이 면역세포의 수, NO 생성능 및 대식세포의 활성도가 증가하는 결과를 얻을 수 있었다. 특히 변이주 베타글루칸을 주사하였을 경우 wild-type 베타글루칸에 비해 면역세포의 수는 1.40배, NO 생성능은 1.12배, 대식세포의 활성도와 탐식능은 각각 1.18배와 1.43배 높은 수치를 얻을 수 있었다. 이러한 결과들로 미루어 변이주 베타글루칸이 wild-type 베타글루칸보다 우수한 면역활성 촉진능력을 가지고 있음을 증명할 수 있었으며, 고부가가치 기능성 면역물질로서의 응용 가능성을 확인할 수 있었다.
대한약학회 2002년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2
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pp.378.2-378.2
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2002
Phellinus linteus has been used as anti-tumor and immuno stimulating agents in folk remedies. From precipitate of MeOH ex. by activited guided fractionation. 5.8-epidioxy ergosta-6.22-dien-3ol. palmitic acid. linoleic acid, and methyl linolate. 3.4-dihydroxybenzoic acid methylester and 4-(3'4'-Dihydroxyphenyl)-3-butene-2one were isolated. DPPH method was used to examine of antioxidative activity of the isolated compounds. As the result, 3.4-dihydroxybenzoic acid methylester, and phenolic compound. 4-(3'4'-Dihydroxyphenyl) -3-butene-2one were found to be a scavenger of 1,1-diphenyl-2-picrylhydrzyl radical. (omitted)
한국 전통발효음료 중에 존재하는 특이 다당류의 화학적 특성 및 생물활성을 규명할 목적으로, 농가에서 직접 발효한 복분자주로부터 다당류를 분리하고 이들의 각종 면역증강활성에 대해 검토하였다. 복분자주에 80% ethanol 침전을 행하여 얻어진 조다당획분 RB-0를 이용, 연속적인 3회의 column chromatography를 행하여, 복분자주의 주요 다당인 RB-1b-I으로 정제할 수 있었다. RB-1b-I획분은 HPLC상에서 대칭을 유지하는 단일 peak로 검출되었으며, 분자량은 약 180 kDa으로 평가되었다. 정제다당인 RB-1b-I의 구성당 조성을 확인한 결과, mannose가 76.8%로 주를 이루고 있었으며, 그 외에 galactose(15.8%), arabinose(3.8%), glucose(2.6%) 및 rhamnose(1.2%)의 순으로 함유되어 있었다. 이러한 결과는 복분자 중에 존재하는 주 다당이 발효 효모의 세포벽에서 기원한 mannan임을 추정하게 하였다. 한편 복분자주에서 정제한 다당 RB-1b-I은 in vitro상에서 macrophage의 활성화를 높은 비율로 유도하였으며, 비장세포에 대해 높은 증식능을 보였다. 또한 RB-1b-I을 정맥 투여한 경우, NK cell을 활성화하여 YAC-1 종양세포에 대한 세포독성을 증가시킴이 관찰되었다. 한편 고분자 정제 다당인 RV-1b-I은 비특이적 면역계에 있어 중요 역할을 담당하고 있는 보체계에 대하여 농도 의존적인 활성화 경향을 보였다. 이들은 Ca++ 이온이 제거된 상태에서의 항보체 활성과 antihuman C3를 이용한 2차원 면역전기영동에 의하여 C3 산물을 동정한 결과로부터 보체계의 classical pathway와 alternative pathway양 경로를 모두 경유하여 활성을 나타냄을 확인할 수 있었다. 이상의 결과로부터 복분자주에는 인체 건강에 유익한 면역증진 활성을 제공하는 다당류가 함유되어 있음을 알 수 있었다.
Fomitella fraxinea의 자실체로부터 열수 추출법에 의하여 다당류를 추출한 뒤, 분획정제하여 다당류에 대한 물리화학적 특성 및 항암 면역 활성을 조사하였다. 정제된 다당류에서 소량의 uronic acid가 측정되었으며, 주 구성당으로서 glucose, fucose, galactose, 및 mannose 가 존재하였고, 소량의 xylose, arabinose, 및 rhamnose가 검출되었다 . FHW-Ib에서 단백질은 측정되지 않았으며, FHW-Ia는 분자량이 19,000인 fuco-gluco-mannogalactan으로 FHW-Ib는 분자량 15,000인 gluco-fuco-mannogalactan으로 각각 동정되었다. FHW -IIa 및 FHW-IIb에서는 소량의 단백질이 측정되었고, 아미노산 분석 결과 threonine, glutamic acid, serine, alanine 및 aspartic acid의 양이 비교적 높게 존재하였다. FHW-IIa 및 FHW- IIb 는 galacto-mannogIucan 이며 분자량은 각각 31,000 및 9,000이었다. FHW-Ib 와 FHW-IIb 의 IR spectrum분석 결과 이 두 다당류는 ${\beta}-type$이 아님이 밝혀졌다. 항암 면역 활성은 FHW-Ia, FHW-Ib, 및 FHW-IIa에서는 거의 없었고 FHW-IIb에서는 높았다.
During our search for macrophage stimulating compounds from medicinal plants, we isolated biopolymers from Acanthopanax sessiliflorus. Isolated fraction AS-5 showed maximum potential, and stimulated lysosonal enzymatic activity by 230% at $300\;{\mu}g/ml$. The nitric oxide (NO) producing ability of AS-5 $100\;{\mu}g/ml$ was $58\;{\mu}M$ when treated with interferon-$\gamma$ and lipopolysaccharide $20\;{\mu}g/ml$. The lymphocyte proliferating effects of isolated biopolymer fractions were also investigated. Highest lymphoproliferative activity (a 2.8-fold enhancement compared to saline treated group was exhibited by AS-3 at $200\;{\mu}g/ml$ followed by AS-5 and AS-6. The AS-3 fraction stimulated only T-lymphocytes and had little or no effect on B-lymphocyte proliferation. Partially methylated alditol acetates were prepared to elucidate the glycosyl linkage-compositions of the AS-3 and AS-5 biopolymers, and were analyzed by GC-MS. The AS-3 and AS-5 biopolymer fractions were found to contain 2,3,4-tri-O-methyl-D-glucitol, 2,3,4-tri-O-methyl-D-galacitol 3,4,6-tri-O-methyl-galacitol, 2-O-methyl-arabinitol and 2,4,6-tri-O-methyl-D-glucitol, 2,3,6-tri-O-methyl-D-galacitol linkages, respectively.
녹차 성숙잎으로부터 새로운 면역 활성 다당 소재를 개발할 목적으로 녹차잎을 pectinase로 처리하여 조다당 GTE-0을 분리하고 이들의 면역증진 활성과 화학적 특성에 대해 조사하였다. GTE-0은 중성당 54.9%, 산성당 45.1%로 이루어져 있었으며, 구성당 분석 결과 주로 glucose(14.2%), arabinose(12.2%), rhamnose(11.1%) 및 galactose(7.3%)로 구성되어 있었다. 한편 GTE-0은 비특이적 면역계에 있어 중요한 역할을 담당하고 있는 보체계에 대하여 양성대조군 PSK에 준하는 우수한 활성이 농도 의존적으로 나타났다. 또한 GTE-0을 처리하고 검경 시 형태적으로 구분이 가능한 활성화된 대식세포의 숫자가 증가되는 경향을 보였다. 대식세포의 NO, ROS 및 $H_2O_2$ 생산에 미치는 GTE-0의 효과를 검토한 결과 ROS와 $H_2O_2$는 모두 농도 의존적으로 생산량을 증가시키는 우수한 활성을 나타낸 반면, NO의 생산능은 1,000 mg/mL의 고농도에서보다 오히려 100 mg/mL의 저농도에서 더 우수한 활성을 나타내었다. 또한 GTE-0으로 자극한 대식세포는 무처리 대조군에 비해 IL-6, IL-12 및 TNF-${\alpha}$와 같은 다양한 cytokine들의 생산이 농도 의존적으로 증가되는 경향을 보였다. 대식세포의 식작용 활성을 측정한 결과 무처리 대조군에 비해 GTE-0 100 mg/mL 농도이상 처리하였을 때 우수한 활성을 나타내었다. 또한 활성화된 대식세포의 YAC-1 종양세포주에 대한 치사 활성을 ex vivo로 측정한 결과 100 mg/mL의 농도에서 무처리군 대비 유의적으로 높은 치사 활성을 보였다. 이상의 결과로부터 녹차 성숙잎으로부터 분리된 효소 처리 조다당 GTE-0은 강력한 면역 활성 증진 효과를 갖고 있음을 결론지을 수 있었다.
Fomitella fraxinea의 자실체로부터 중성염 용액을 사용하여 다당류 FCW를 추출하였다. FCW를 이온 교환 크로마토그라피하여 FCW-I 과 FCW- II로 분획하였고, 이 두 분획을 겔 여과 크로마토그라피하여 흰색 분말의 FCW-Ia와 갈색 분말의 FCW-IIa를 각각 얻었다. FCW-Ia 와 FCW-IIa 의 균질성을 HPLC 와 GPC로 확인하였고, 그들의 분자량을 각각 15,000 과 8,700 으로 결정하였다. FCW-Ia에는 항암 면역 증강 활성이 없었고, FCW-IIa는 높은 활성을 나타냈다. 두 분획에서 소량의 uronic acid 가 검출되었다. GC에 의한 단당류 분석 결과 FCW-Ia는 fucose, galactose, 그리고 mannose를 갖고 있으며 그 몰비는 19.5 : 63. 2 : 25.0이었다. 단백질은 FCW-Ia에서 검출되지 않았다. 한편 FCW-IIa의 주 단당류는 glucose, galactose 및 mannose 로서 그 비는 1.0 : 0.3 : 0.4이었으며, 단백질을 0.4% 함유하고 있다. 아미노 산 분석 결과 높은 양의 glutamic acid이 검출되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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