묵은지 발효에 적합한 종균 발효 시스템을 개발하기 위하여 묵은지에서 분리한 유산균과 효모를 단일 또는 혼합 상태로 김치에 첨가하여 발효시킨 후 관능평가를 시행하여 묵은지 풍미에서 높은 기호도를 나타낸 유산균 ML17과 효모 MY7을 혼합 스타터로 선정하였다. 묵은지 스타터 균주는 rRNA 염기서열 분석을 통한 균주동정 결과에 따라 Lactobacillus curvatus ML17과 Saccharomyces servazzii MY7로 명명되었다. 혼합 스타터를 첨가하여 김치를 제조한 후 $10^{\circ}C$에서 7일 동안 1차 발효한 후, $-1^{\circ}C$에서 90일까지 숙성시키면서 발효 특성을 조사하였다. 대조구 김치에 비하여 스타터 김치의 pH 저하 및 산도의 증가가 빠르게 진행되어 발효 90일 후에는 1년 숙성 묵은지와 유사한 수준을 나타내었다. 물성 변화에서 김치의 경도는 전체 발효기간 동안 스타터 김치가 더 높은 경도 값을 유지하면서 아삭한 특성을 나타내었다. 미생물 균총 변화에서 총균수와 유산균수는 발효 30일에 최대 균수를 나타내었으며, 이후 감소하기 시작하여 발효 90일에는 스타터 김치의 총균수와 유산균수가 대조구 김치에 비해 낮게 나타났다. 효모수는 첨가된 스타터에 의하여 스타터 김치가 대조구 김치보다 전체 발효기간 동안 높은 균수를 유지하였다. 유산균과 효모 스타터는 발효 90일 동안 높은 점유율을 유지하여 발효 종균으로서의 우수한 특성을 나타내었다. 유기산 함량은 스타터 김치에서 lactic acid와 citric acid의 함량이 대조구 김치에 비하여 높게 나타났다. 관능평가 결과 스타터 김치는 1년 숙성 묵은지와 유사한 묵은지 맛과 높은 기호도를 나타내었다.
분리된 미생물은 pH 4.5내지 pH 8.0에서 100% 안정성을 나타내며 에너지원이 전혀 공급되지 않은 상태에서도 37$^{\circ}C$의 용액중에서 48시간 이고 경과시도 80% 이상의 높은 생존율을 나타낸다. 생리식염수에서는 4$0^{\circ}C$에서 한 시간 방치하는 경우도 90% 이상의 높은 생존율을 나타낸다는 것을 알수 있었다. 이러한 조건들을 검토해볼 때 생장내 조건에서 상당히 안정하며 경구투여제로 투여하기에 충분히 적당하다고 결론지을 수 있겠다. 특히 포만시에 투여하는 것이 더욱 효과적인 것으로 사료되므로 소화제등과 혼용한 약제로 축발하는 것이 바람직하리라 기대된다.
Kim, Eiseul;Cho, Eun-Ji;Yang, Seung-Min;Kim, Hae-Yeong
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제31권2호
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pp.280-289
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2021
Genetic markers currently used for the discrimination of Lactobacillus delbrueckii subspecies have low efficiency for identification at subspecies level. Therefore, our objective in this study was to select novel genetic markers for accurate identification and discrimination of six L. delbrueckii subspecies based on pangenome analysis. We evaluated L. delbrueckii genomes to avoid making incorrect conclusions in the process of selecting genetic markers due to mislabeled genomes. Genome analysis showed that two genomes of L. delbrueckii subspecies deposited at NCBI were misidentified. Based on these results, subspecies-specific genetic markers were selected by comparing the core and pangenomes. Genetic markers were confirmed to be specific for 59,196,562 genome sequences via in silico analysis. They were found in all strains of the same subspecies, but not in other subspecies or bacterial strains. These genetic markers also could be used to accurately identify genomes at the subspecies level for genomes known at the species level. A real-time PCR method for detecting three main subspecies (L. delbrueckii subsp. delbrueckii, lactis, and bulgaricus) was developed to cost-effectively identify them using genetic markers. Results showed 100% specificity for each subspecies. These genetic markers could differentiate each subspecies from 44 other lactic acid bacteria. This real-time PCR method was then applied to monitor 26 probiotics and dairy products. It was also used to identify 64 unknown strains isolated from raw milk samples and dairy products. Results confirmed that unknown isolates and subspecies contained in the product could be accurately identified using this real-time PCR method.
한우와 홀스타인의 분변으로부터 MRS 배지와 LAPT 배지를 이용하여 무작위 선발법으로 54균주의 유산균을 1차로 분리하였다. 1차로 분리된 54균주에 대해 내담즙성이 우수한 10균주를 분리한 다음 내산성을 조사한 결과 인공위액 pH 2.5에서 LS1, LS15 및 LL6 균주가 각각 66.5%, 82.6% 및 80.7%의 생존율을 나타내었다. Sal. typhimurium, Sta. aureus 및 Cl. perfringens의 병원균에 대해 가장 큰 항균력을 보인 균주는 LL6와 LL7이었다. API CHL kit로 동정한 결과 LS1, LS2 및 LMI 균주는 모두 L. fermentum, LL6와 LL7 균주는 L. acidophilus, LS3 균주는 L. plantarum으로 각각 동정되었고, 나머지 4균주는 Lactobacillus spp. 로 동정되어 분리된 10균주 모두 안전성 있는 유산간균임을 확인하였다. 10종류의 항생제에 대한 내성을 조사한 결과 ampicillin, amoxicillin과 erythromycin에 대해서는 감수성이 있으나 colistin과 ciprofloxacin에 대해 모두 내성을 나타내었다. LB1, LL6 및 LL7 균주는 gentamicin과 neomycin에 대해 내성을 보여 주었다. 분리 동정된 균주 중에 내산성, 내담즙성 및 병원성 균에 대한 특성을 기준으로 판단할 경우 probiotic 유산균으로 사용 가능성이 높은 것은 LL6인 L. acidophilus로 나타났다.
Kim, Tae-Woon;Lee, Ji-Yeon;Song, Hee-Sung;Park, Jong-Hyun;Ji, Geun-Eog;Kim, Hae-Yeong
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제14권1호
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pp.105-109
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2004
This study was conducted to investigate the potential origin of Weissella species, which were found in ingredients of kimchi, such as salted Chinese cabbage, radish, green onion, red pepper powder, pickled shrimps, garlic, and ginger. Ten strains of Weissella species (Weissella thailandensis, W. kimchii, W. koreensis, W. minor, W. halotolerans, W. hellenica, W. kandleri, W. confusa, W. viridescens, and W. paramesenteroides) and lactic acid bacteria isolated from ingredients of kimchi were analyzed by SDS-PAGE of whole-cell proteins. Several strains with patterns identical to those of Weissella kimchii were isolated from green onion. On the basis of biochemical characteristics and 16S rDNA sequence comparisons, these strains were identified as Weissella kimchii, suggesting green onion as a major origin of Weissella kimchii found in kimchi.
A multiplex competitive polymerase chain reaction (PCR) method was developed for the rapid identification and quantification of Leuconostoc mesnteroides and Lactobacillus plantarum populations which are the key microorganisms in kimchi fermentation. The strain-specific primers were designed to selectively amplify the target genes encoding 165 rRNA of L. plantarum and dextransucrase of L. mesenteroides. There was a linear relationship between the band intensity of PCR products and the number of colony forming units of each model organism. The PCR quantification method was compared with a traditional plate-counting method f3r the enumeration of the two lactic acid bacteria in a mixed suspension culture and also applied to a real food system, namely, watery kimchi. The population dynamics of the two model organisms in the mixed culture were reliably predictable by the competitive PCR analysis.
Kim, Bong-Joon;Lee, Hye-Ja;Park, Sae-Young;Kim, Jeong-ho;Han, Hong-Ui
Journal of Microbiology
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제38권3호
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pp.132-136
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2000
We recently identified Leuconostoc gelidum, a typical psychrophile, as a microbial component from kimchi that has been laboratory-prepared and fermented at 20$^{\circ}C$ . However, it has been shown that the growth of leuconostocs in food products is highly influenced by fermenting temperature. To determine the distribution of L. gelidum species in kimchi fermented at a lower temperature , 8$^{\circ}C$, we characterized a total of 64 dextran-forming strains isolated from kimchi using a polyphsic method including 16S rDNA sequencing and DNA-DNA gybridization. We found that 80% of the isolated were L. gelidum, which has been found mainly at chill-stored meat products. We also found that L. gelidum could be a dominant Leuconostoc species in so-called KimJang Kimchi, which is traditionally prepared at lat fall to be preserved during winter in Korea. These results suggest that L. gelidum can be a predominant species in kimchi especially when fermented at low temperature.
Kim, Bong-Joon;Min, Bong-Hee;Kim, Jeongho;Han, Hong-Ui
Journal of Microbiology
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제39권1호
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pp.11-16
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2001
Tentative identification of Leuconostoc lactis IH23 isolated from kimchi (a fermented vegetable product) has been described previously with 16S rDNA sequencing (Choi, 1., M. Sc. Thesis Inha Univ.1999). This strain produced the slime identified as dextran based on IR, $\^$13/C- and $^1$H-NMR spectroscopic results. Further study proved that the isolate IH23 belongs to a homogeneous genetic group with L. lactis DSM 20202$\^$T/ and L. argentinum DSM 8581$\^$T/. The results showed DNA-DNA homology of 99-100%, 16S rDNA gene sequence similarity (97.7% ), and a phylogenetic relationship although L. argentinum DSM 8581$\^$T/ had lower homology (80-91%). These data indicate that L. argentinum DSM 8581$\^$T/ and the isolate IH23 belong to an identical species with L. lactis DSM 20202$\^$T/at the genetic level, although in carbohydrate fermentation, the isolate IH23 was mast closely related to L. argentinum DSM 8581$\^$T/ and quite different from L. lactis DSM 20202$\^$T/. Here we first report the isolation of consistent phenotypic variation in Leuconostoc lactis. We also emphasize that the nomenclature of subspecies needs to be differentiated into the three strains mentioned above in Leuconostoc lactis.
Traditional herbal medicinal preparation Bojungikki-tang (BJT) is well-known herbal medicine used as tonic. We fermented Bojungikki-tang using nine lactic acid bacteria strains and discovered two remarkably increased compositions from the fermented BJTs using HPLC/DAD analysis. HPLC/DAD-guided fractionation of the increased compositions followed by structure identification using NMR and MS identified liquiritigenin and isoliquiritigenin. These bioconversion compositions were quantitatively analyzed using HPLC-DAD. Liquiritigenin contents were highest in BJTs fermented with L. amylophilus (1.91 mg/g) and L. fermentum (1.89 mg/g), which were increased by 20-fold compared to BJT (0.09 mg/g). Isoliquiritigenin contents were highest in BJTs in fermented with L. plantarum (0.19 mg/g) and L. fermentum (0.19 mg/g), which were increased by 19-fold compared to BJT (0.01 mg/g).
본 연구의 목적은 한국 전통 음식 김치에서 분리한 유산균의 특성을 연구하기 위해 형태학적, 생화학적 특성을 조사하였다. 한국의 전통 발효 식품에서 젖산균을 확인하기 위해 분리된 균주의 그람염색을 수행한 후 Macrogen에서 16S rRNA 분석 결과, DKGF9(Lactobacillus plantarum), DKGF1(Lactobacillus paracasei ), DKGF8(Lactobacillus casei ), DK207(Lactobacillus casei ), DK211(Lactobacillus casei )이 확인되었다. 우리는 한국의 전통 발효 식품인 김치에서 분리된 5가지 LAB의 기본 생물학적 활성에 대한 실험을 수행했다. 37℃, 55℃, 65℃, 75℃에서 각각 5분, 15분 5균주의 내열성 확인 결과, 상업 균주인 Lactobacillus acidophilus LA-5의 내열성과 유사하거나 더 높음을 보여주었다. 장내부착능에서는 선발균주 모두 상용균주와 비교했을 때 107 CFU/mL 이상으로 우수한 결합능을 보여주었고, KCTC(한국생명공학연구원 생물자원센터)에서 분양받은 Escherichia coli KCTC1682, Salmonella enterica KCTC2054, Bacillus cereus KCTC3624 3종을 활용한 항균활성 결과, 모든 균주는 상업용 균주인 L. acidophilus LA-5와 비교하여 유사하거나 더 높은 항균 활성을 나타냈다. 단백질분해능력 실험에서, 5개의 균주는 clear-zone의 직경이 24시간에서 72시간으로 갈수록 점차 증가하고, L. paracasei DKGF1이 가장 큰 직경을 갖고 있어 단백질분해능력이 가장 우수한 것으로 나타났다. 5개의 균주로부터 선택된 3개의 균주는 ABTS, DPPH, FRAP, Hydroxyl radical scanenging 활성을 포함하여 다양한 항산화활성 효과를 나타냈다. 결과적으로, 5가지 균주 중에서 우수한 기능성을 갖는 L. paracasei DKGF1이 잠재적인 프로바이오틱스 활성을 나타내며, 건강 관련 제품의 개발에 유용한 균주라고 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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