• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권3호
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• pp.301-310
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• 1992

요로계 감염에 대처함에 있어 hemolysin과 Gal-Gal pili의 multicomponent 백신 개발 가능성을 조사하기 위하여 본 연구를 수행하였다. 요로계 감염환자로부터 분리되어 그의 hemolysin gene 의 염기배열과 아미노산 배열이 밝혀진 대장균 J96 균중의 hemolysin에 대하여 10곳에 해당하는 20 mer-oligonucleotide를 합성하였다. 이들 probe를 사용하여 요로계감염 환자들로부터 분리한 wild type 대장균들의 DNA에 대하여 hemolysin gene 의 상동성을 조사하였는 바 8개의 probe는 거의 모든 hemolysin signal을 보여주었고 HA484는 28.3, HA661은 71.7의 positive signal을 나타내었다.이는 요로계 감염 대장균들의 Hemolysin gene의 상동성이 매우 높은 것을 의미한다. 또한 J96 hemolysin에 대한 12개의 MAB은 모두 wild type 대장균들이 분비하는 90% 이상의 균주에 대하여 양성 immunoblotting을 나타내었다. 특히 J96 hemolysin의 functional site를 가장 강력하게 block할 수 있는 monoclonal antibody MAＢ132가 모든 wild type으로부터 분리된 hemolysin의 function을 중화시킬수 있는 결과는 J96의 cloned hemolysin product를 vaccine으로 사용할 수 있는 가능성을 증대시키는 결과라고 할 수 있다.

• 대한의생명과학회지
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• 제18권2호
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• pp.146-151
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• 2012

Urinary tract infection (UTI) is one of the most common bacterial infections and is predominantly caused by uropathogenic Escherichia coli (UPEC). UPEC strains generally possess several genes encoding virulent factors, which are mostly adhesins, toxins, bacteriocin and siderophores. E. coli is composed of four main phylogenetic group (A, B1, B2, D) and virulent extra-intestinal strains mainly belong to groups B2 and D. Prescription of ciprofloxacin, a kind of fluoroquinolone group antibiotics, is increasing now a days, but resistance to this drug is also increasing. A total of 188 strains of E. coli were collected. Thirteen strains were collected from healthy students in 2011 and 175 strains from patients with urinary tract infection in 2010. Virulence factor genes (papC, fimG/H, sfaD/E, hlyA, cnf1, and usp) were amplified by polymerase chain reaction (PCR) methods for phylogenetic group (A, B1, B2, D) detection. Ciprofloxacin susceptibility test was performed by disk diffusion method. The identified virulence factors (VFs), phylogenetic groups and ciprofloxacin resistance in 13 E. coli strains isolated from healthy students were papC (15.4%), fimG/H (76.9%), sfaD/E (30.8%), hlyA (23.1%), cnf1 (23.1%), usp (7.7%), phylogenetic group A (23%), B1 (8%), B2 (46%), D (23%) and ciprofloxacin resistance (7.7%), while those of in 175 E. coli strains isolated from patients with UTI were papC (41.1%), fimG/H (92.5%), sfaD/E (30.3%), hlyA (10.3%), cnf1 (30.3%), usp (27.4%), phylogenetic group A (9.1%), B1 (5.1%), B2 (60.6%), D (25.1%) and ciprofloxacin resistance (29.7%). In this study, 10 out of 13 E. coli strains (76.9%) from healthy students were found to possess more than one virulence factor associated with adhesion. In addition, one E. coli strain isolated from healthy students who had never been infected with UPEC showed ciprofloxacin resistance. According to these results between the virulence factors and phylogenetic groups it was closely associated, and UPEC strains isolated from patients showed high level of ciprofloxacin resistance.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제31권4호
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• pp.334-341
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• 2003

2001년 경북지역 콜레라 유행시 설사환자에서 V. cholerae O1 El Tor형 90주를 분리하였다. 분리균을 대상으로 ctxA, tcpA, hlyA gene에 대한 multiplex-PCR 시험에서는 분리균 모두에서 302, 223, 471 bps크기의 DNA 증폭산물 band를 확인하였다. ctxA 및 ctxB gene 부위의 유전자 염기서열 비교에서 분리균과 GenBank에 수록된 균간의 유형의 차이를 보였다. PFGE typing 실험에서는 분리균 모두에서 동일한 amplicon 단편을 나타내었다. 또한, 2002년 8월부터 10월까지 콜레라균 서식가능성 규명을 위해 경북 동해안 일대에서 plankton 시료채취 및 V. cholerae O1 및 V. cholerae O139의 rfb 및 CT gene 검출을 위한 multiplex-PCR 확인실험에서는 ctxA gene의 DNA band는 일부 검출되었으나, V. cholerae O1 및 V. cholerae O139는 분리되지 않았다. 험에서 ctxA gene DNA band는 검출되었으나, V. cholerae O1 및 V. cholerae O1는 분리되지 않았다.

• 한국축산식품학회지
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• 제41권2호
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• pp.324-334
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• 2021

This study aimed at determining the genetic and virulence characteristics of the Listeria monocytogenes from smoked ducks. L. monocytogenes was isolated by plating, and the isolated colonies were identified by PCR. All the obtained seven L. monocytogenes isolates possessed the virulence genes (inlA, inlB, plcB, and hlyA) and a 385 bp actA amplicon. The L. monocytogenes isolates (SMFM2018 SD 1-1, SMFM 2018 SD 4-1, SMFM 2018 SD 4-2, SMFM 2018 SD 5-2, SMFM 2018 SD 5-3, SMFM 2018 SD 6-2, and SMFM 2018 SD 7-1) were inoculated in tryptic soy broth (TSB) containing 0.6% yeast extract at 60℃, followed by cell counting on tryptic soy agar (TSA) containing 0.6% yeast extract at 0, 2, 5, 8, and 10 min. We identified five heat resistant isolates compared to the standard strain (L. monocytogenes ATCC13932), among which three exhibited the serotype 1/2b and D-values of 5.41, 6.48, and 6.71, respectively at 60℃. The optical densities of the cultures were regulated to a 0.5 McFarland standard to assess resistance against nine antibiotics after an incubation at 30℃ for 24 h. All isolates were penicillin G resistant, possessing the virulence genes (inlA, inlB, plcB, and hlyA) and the 385-bp actA amplicon, moreover, three isolates showed clindamycin resistance. In conclusion, this study allowed us to characterize L. monocytogenes isolates from smoked ducks, exhibiting clindamycin and penicillin G resistance, along with the 385-bp actA amplicon, representing higher invasion efficiency than the 268-bp actA, and the higher heat resistance serotype 1/2b.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제9권4호
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• pp.398-403
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• 1999

In our previous studies, we reported that hybridoma B-lymphocytes can be used to determine the virulence of Listeria species in an in vitro cytotoxicity assay. Here, we examined the cytopathic effect, i.e., membrane damage and the nature of cell death induced by Listeria monocytogenes on murine hybridoma B-lymphocytes (Ped-2E9). Membrane damage was assessed by microscopic analyses and by measuring the release of intracellular alkaline phosphatase(AP) and lactate dehydrogenase (LDH). Cell death was determined by DNA fragmentation analyses using agarose gel electrophoresis. Infection by listeriolysin O (LLO)-producing L. monocytogenes strains induced substantial amounts of AP and LDH release from Ped-2E9 hybridoma B-cells, suggesting severe membrane damage in these cells, while an LLO-negative L. monocytogenes mutant strain had no effect. An LLO-producing recombinant L. innocua ($prifA^+hly^+$) strain also induced high AP and LDH release and cytopathic changes in Ped-2E9 cells. Light or scanning electron microscopic examination revealed L. monocytogenes mediated membrane destabilization, pore formation, intense cytoplasmic granulation, bleb formation, and lysis of Ped-2E9 cells. LLO-producing L. monocytogenes and L. innocua ($prifA^{+}hly{^}+$) also induced ladder-like DNA fragmentation in Ped-2E9 cells. Collectively, these results suggest that L. monocytogenes, specifically LLO-producing strains, can induce a severe cytopathic effect leading to apoptosis in hybridoma B-lymphocytes (Ped-2E9).

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제18권11호
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• pp.1858-1861
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• 2008

A PCR-enzyme-linked immunosorbent assay (PCR-ELISA) was developed for the rapid and sensitive detection of L. monocytogenes. PCR primers generating a 132-bp amplicon and a capture probe able to hybridize to the PCR amplicon were designed based on the L. monocytogenes-specific hly gene encoding listeriolysin. The detection limit of PCR-ELISA for L. monocytogenes was determined to be as low as 10 cells per PCR reaction, and this level of detection was achieved within 5 h. These results indicate that the PCR-ELISA provides a valuable tool for the rapid and sensitive detection of L. monocytogenes for the ready-to-eat food industry.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제23권3호
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• pp.248-256
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• 2008

본 연구는 축산물 유래 L. monocytogenes에 대한 역학적 연구로서 분리균의 hemolysin(LLO) 및 lecithinase(LCP)생산성, Congo red dye(CRA)흡수성 및 hemolysin activity를 조사하는 한편 inlA, inlBV, actA, hlyA, plcA 및 plcB의 virulence gene을 PCR법으로 분석하였다. LLO, LCP 및 CRA의 양성률은 L. monocytogenes의 경우 68균주 중 각각 100%, 94.1% 및 77.9%이었고, L. ivanovii와 L. seeligeri를 제외한 다른 Listeria spp.(L. innocua, L. gray, L. murrayi, L. welchimeri)는 음성이었다. LLO와 LCP간에는 통계적인 유의성은 없었으나 CRA는 약간 낮게 나타났으며(p<0.05), serotype 1/2b 및 4b 간에도 유의성이 인정되지 않았다. 면양적혈구에 대한 용혈성(MHU)에서 L. monocytogenes의 경우 2배에서 16배까지 다양한 반응을 보였으나 L. ivanovii와 L. seeligeri를 제외한 다른 Listeria spp.는 음성이었다. hemolysin activity(HU)는 L. monocytogenes의 경우 대부분의 균주가 1.0 HU/mg 이상이었으나 다른 Listeria spp.는 대부분 0.04 HU/mg 이하였다. PCR 증폭하여 virulence gene을 분석한 결과 모든 L. monocytogenes는 각기 예상한 크기의 PCR 증폭산물이 검출되어 hlyA, plcA, plcB, inlA 및 inlB gene을 보유하고 있음이 확인되었으나 다른 Listeria spp.는 어떠한 증폭산물도 보이지 않았다. 또한 actA gene에 대한 증폭산물은 385bp와 268bp 크기의 2종류로 각각 57.4%와 42.6%의 분포를 나타내었다. actA gene의 size 분포에서 국내산 쇠고기, 닭고기, 유가공장에서는 큰 size가 많았는데 반하여 미국산 수입쇠고기에서는 작은 size가 많은 것으로 나타났다.

• 통합자연과학논문집
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• 제5권3호
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• pp.190-194
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• 2012

Human P-gp is one of the protein responsible for the multidrug resistance (MDR) develpment. MDR is a major cause of the cancer chemotherapy. In this paper, we performed homology modeling, docking study of papayriferic acid into the P-gp nucleotide binding domain (NBD2). For human P-gp, X-ray crystal structure is not known yet. We developed homology model for human NBD2 using HlyB ABC transporter structure (PDB code: 1XEF, resolution 2.5 ${\AA}$). Docking study was performed using Autodock. Docking result was analyzed, which shows that ligand docks into steroid binding site and interacts through hydrophobic and hydrophilic interactions.

• 한국축산식품학회지
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• 제36권6호
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• pp.779-786
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• 2016

This study aimed to evaluate the prevalence of Listeria monocytogenes on livestock farms in Korea and determine their serotypes and genetic correlations. Twenty-five livestock farms in Korea (central: 15, south west: 7, south east: 3) were visited 2-3 times, and 2,018 samples (feces: 677, soil: 680, silage: 647, sludge: 14) were collected. Samples were enriched in LEB (Listeria enrichment broth) and Fraser broth media, and then plated on Palcam agar. The isolates were identified by PCR and 16S rRNA gene sequencing. Then, the sero-types, presence of virulence genes (actA, inlA, inlB, plcB, and hlyA), and antibiotic resistance were determined. Genetic correlations among the isolates were evaluated by analyzing the restriction digest pattern with AscI. Of the 2,018 samples, only 3 (0.15%) soil samples (FI-1-FI-3) from 1 farm in the south east region were positive for L. monocytogenes. Based on biochemical tests and multiplex PCR, the serotype of the isolates were 4ab (FI-1 and FI-3) and 3a (FI-2), which are not common in foodborne L. monocytogenes. The 3a sero-type isolate was positive for all tested virulence genes, whereas the 4ab serotype isolates were only positive for hlyA, actA, and inlA. The isolates were resistant to all 12 tested antibiotics, especially FI-3. The genetic correlations among the isolates were 100% for those of the same serotype and 26.3% for those of different serotypes. These results indicate that the prevalence of L. monocytogenes on livestock farms in Korea is low; however, the isolates are pathogenic and antibiotic resistant.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제39권1호
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• pp.9-15
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• 2024

2022년 1월부터 11월까지 부산지역에서 유통 중인 신선 농산물 210건을 대상으로 리스테리아균 분포 현황 및 병원성 여부를 조사하였으며, 분리된 균주를 대상으로 혈청형 및 유전자 지문분석을 통해 역학적 연관성을 확인하였다. 조사 대상 신선농산물에서 총 40건의 리스테리아균이 검출되었으며, Listeria monocytogenes 등 4종의 리스테리아균이 검출되었다. 이 중 L. innocua가 22건, L. monocytogenes 10건, L. grayi 6건, L. rocourtiae 2건으로 나타났으며, 이 중 식중독을 유발하는 L. monocytogenes균은 팽이버섯에서만 검출되었다. L. monocytogenes의 병원성을 유발하는 유전자인 iap, prfA, inlA, inlC, inlJ 및 hly 6종에 대한 분석 결과, 총 10개 균주 중 6개 균주에서 iap 등 6종의 병원성 유발 유전자가 검출되었으며, 4개 균주에서 hly를 제외한 5종의 유전자가 검출되어 식중독 발생 잠재위험이 있음이 확인되었다. 지역 유통 식재료에 분포하는 L. monocytogenes의 유전학적 유사도 및 오염원 추이를 확인하기 위해 신선농산물에서 분리한 L. monocytogenes 10균주 및 2022년 부산지역 유통 가금류에서 분리한 L. monocytogenes 2균주를 대상으로 혈청형 분석 및 PFGE를 실시한 결과, 신선농산물 분리균주의 혈청형은 1/2a 및 1/2b 두 가지 serotype으로 확인되었으며, 가금류 분리균주는 모두 1/2a형으로 나타났다. 유전자지문 분석결과, 전체 균주의 유사도는 100-45.7%로 나타났고, 이 중 100% 상동성을 보인 균주들은 동일 생산농장 또는 동일지역 유래 팽이버섯에서 분리되어 오염원의 출처가 같음을 추측할 수 있었다. 신선농산물 분리균주와 유통 가금육 분리균주와의 유사도 확인 결과, 일부 팽이버섯 분리균주와 가금육 분리균주의 유사도가 90.9-84.6%로 나타났다. 농산물 및 축산물 생산시설간 오염원 이동 및 교차 가능성을 유추할 수 있었다.