• 약학회지
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• 제42권1호
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• pp.53-58
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• 1998

A novel type of sulfotransferase, arylsulfate sulfotransferase (EC 2.8.2.22) purified from Haemophilus K-12, an intestinal bacterium of a mouse, was immobilized onto AH-S epharose 4B, CH-Sepharose 4B and DEAE-celluose. The enzyme was stabilized for storage more markedly by covalent immobilization onto AH-Spharose 4B or CH-Sepharose 4B and by adsorptive immobilization onto DEAE-cellulose than the free enzyme. The optimal pH and acceptor substrate specificity of immobuized enzyme were similar to those of the free enzyme.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1994년도 춘계학술대회 and 제3회 신약개발 연구발표회
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• pp.257-257
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• 1994

생쥐의 장내세균으로 부터 황산전이 반응을 촉매하는 효소인 sulfotransferase를 생산하는 균주를 분리하였으며 동정결과 Haemophilus속 균주로 확인되어 Haemophilus K-12라 명명하였다. 균의 성장과 효소활성과의 관계를 보면 균은 10시간에서 완전히 성장하였으며 효소활성도 이와 비례하였다. Haemophilus K-12의 배지조성에 따른 sulfotransferase의 생산성을 Brain Heart Infusion 배지에서의 생산성과 비교해보면 탄소원으로는 sucrose가 0.2%농도에서 584%로 가장 좋았으며 질소원으로는 yeast extract가 266%로 가장 좋았다. 공여체로 PNS를 최종농도 1mM로 하여 배지에 첨가하였을때 212%로 가장 높은 효소증가를 보였다. 2가금속이온에 의한 효소증가는 현저하지 않았으며 $Mn^{2+}$이 107%로 가장 높았고$Zn^{2+}$와 EDTA에 의해서는 저해를 받았다. 이상의 결과를 종합하여 균배양을 위한 이상적인 배지조성을 sucrose 0.2%, yeast extract 1%, $Na_2$HPO$_4$ 0.25%, NaCl 0.5%로 결정하였다. 결정된 최적배지에 균을 10L 배양하여 초음파 처리, 원심분리한 것을 70 % ammonium sulfate fractionation, DEAE-cellulose column chromatography를 2회, Hydroxyapatite column chromatography, chromatdfocusing column chromatography, Silica PAE column chromatography, Sephacryl S-300 superfine column chromatography를 행한결과 specific activity가 6.76 umoie/min/mg protein인 효소액을 얻었으며 homogeneous enzyme였다. 이렇게 해서 얻은 효소를 이용하여 수용체 기질 특이성을 측정한 결과 1-naphthol이 phenol을 100%로 하였을 때 233%로 가장 좋았으며 Eubacterium A-44 sulfotransferase의 좋은 기질이었던 p-acetaminophenol, tyramine, 9-phenanthrol은 좋은 기질이 되지 못했다. 이상의 결과로 미루어 보아Haemophilus K-12 sulfotransferase는 지금까지 보고된 bacterial sulfotrasferase와는 다른 효소로 사려되며 효소반응기전의 규명이 이루어지면 산업적 응용이 가능할것으로 사료된다.

• 약학회지
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• 제36권5호
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• pp.455-459
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• 1992

Haemophilus K-12 producing novel sulfotransferase was isolated from mouce intestinal flora. The enzyme catalyzed the transfer of sulfate group from p-nitrophenylsulfate to phenolic compounds. The optimum medium condition for the sulfotransferase production was 0.2% sucrose, 1% yeast extract, $Na_{2}HPO_4$ and 0.5% NaCl. The enzyme production was induced by donor substrate, but was not by accepters. When p-nitrophenylsulfate was used as a donor substrate, 1-naphthol was best substrate, followed by phenol, p-acetaminophenol and tyramine.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제19권12호
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• pp.1582-1589
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• 2009

Bacterial UDP-N-acetylglucosamine enolpyruvyl transferase (MurA) catalyzes the transfer of enolpyruvate from phosphoenolpyruvate (PEP) to uridine diphospho-N-acetylglucosamine (UNAG), which is the first step of bacterial cell wall synthesis. We identified thimerosal, thiram, and ebselen as effective inhibitors of Haemophilus influenzae MurA by screening a chemical library that consisted of a wide range of bioactive compounds. When MurA was preincubated with these inhibitors, their 50% inhibitory concentrations ($IC_{50}s$) were found to range from 0.1 to $0.7\;{\mu}M$. In particular, thimerosal suppressed the growth of several different Gram-negative bacteria such as Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, and Salmonella typhimurium at a concentration range of $1-2\;{\mu}g/ml$. These inhibitors covalently modified the cysteine residue near the active site of MurA. This modification changed the open conformation of MurA to a more closed configuration, which may have prevented the necessary conformational change from occurring during the enzyme reaction.

• Molecules and Cells
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• 제19권3호
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• pp.398-401
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• 2005

The bacterial enzyme UDP-N-acetylglucosamine enolpyruvyl transferase catalyzes the first committed step of peptidoglycan biosynthesis, i.e., transfer of enolpyruvate from phosphoenolpyruvate to UDP-N-acetyl-glucosamine. We have overexpressed the enzyme from Haemophilus influenzae in Escherichia coli and crystallized it in the apo-form, as well as in a complex with UDP-N-acetylglucosamine and fosfomycin using ammonium sulfate as the precipitant. X-ray diffraction data from a crystal of the apo-form were collected to $2.8{\AA}$ resolution at 293 K. The crystal quality was improved by co-crystallization with UDP-N-acetylglucosamine and fosfomycin. X-ray data to $2.2{\AA}$ have been collected at 100 K from a flash-frozen crystal of the complex. The complex crystals belong to the orthorhombic space group I222 (or $I2_12_12_1$) with unit-cell parameters of a = 63.7, b = 124.5, and $c=126.3{\AA}$. Assuming a monomer of the recombinant enzyme in the crystallographic asymmetric unit, the calculated Matthews parameter ($V_M$) is $2.71{\AA}^3Da^{-1}$ and solvent content is 54.6%.

• Bulletin of the Korean Chemical Society
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• 제31권12호
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• pp.3782-3784
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• 2010

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1993년도 제2회 신약개발 연구발표회 초록집
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• pp.142-142
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• 1993

생쥐에서 sulfotransferase 생산 군주를 검색한 결과 호기성균보다 혐기성균이 많은 것으로 나타났다. 이러한 것은 전번 보고와 일치한다. 황산전이효소 생산 균주 검색용 배지에서 형광을 나타내는 호기성 균주를 분리하여 K-12라 명하였다. 동정한 결과 K-12균주는 그람 음성으로 운동성이 없는 통성혐기성 균주인 Haemophilus sp.로 사료된다. 이 균주의 황산전이효소 생산성은 공여체 기질만을 배지에 첨가했을때 가장 높은 생산성을 보였다. 탄소원으로는 sucrose와 lactose를 사용했을때 가장 높은 효소유도를 보였으며, 질소원으로는 yeast extract, peptone이 우수하였다. 배양최적 pH는 7부근이었으며 온도는 37$^{\circ}C$가 가장 좋았다. 금속이온으로는 $Mg^{2＋}$이 우수했다. 최적 배지 10 L에 K-12 균주를 배양하여, 집균 초음파 처리, 원심분리한 상등액을 70% ammonium sulfate fractionation, DEAE-cellulose column chromatography 2회, Sephcryl S-300 superfine column chromatography를 행한 결과 specific activity가 0.267 $\mu$mole/min/mg protein인 효소를 부분 정제하였다.

• Clinical and Experimental Pediatrics
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• 제50권5호
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• pp.449-456
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• 2007

목 적 : 우리나라에서 Hib 백신을 기본 예방접종에 포함시키는 것을 고려할 때 우리나라의 Hib 질환의 역학, 우리나라 소아의 Hib 백신에 대한 면역 반응에 대한 연구가 있어야 한다. 본 연구는 우리나라 소아에서 면역원성에 근거한 추가접종의 필요성 여부를 확인하고자 하였다. 방 법 : 2006년 6월부터 2006년 12월까지 이화여자대학교 동대문 병원, 강남 차병원, 관동대 명지병원에 내원하여 검사를 위해 혈액 채취의 기회가 있었던 12-23개월 사이의 소아 144명을 대상으로 하였다. 분리된 혈청으로 항 PRP 항체가를 효소면역법으로 측정하였고, 혈청 살균 능력 측정을 시행하였다. 결 과 : 추가접종까지 완료한 군의 항 PRP 항체의 기하평균은 기초접종을 완료한 군이나 접종하지 않은 군의 기하평균보다 높았다(P<0.05). 항 PRP 항체가가 $1.0{\mu}g/mL$ 이상인 비율은 추가접종까지 완료한 군은 96.5%로 다른 세 군에 비해, 기초접종을 완료한 군은 68.6%로 접종하지 않은 군의 30.0%에 비해 양성률이 높았다(P<0.05). 평균 살균 역가는 추가접종까지 완료한 군이 11,205로 기초접종을 완료한 군의 3,946보다 높았다(P<0.05). 항 PRP 항체가와 살균 역가는 양의 상관관계에 있었다(R=0.60). 결 론 : 우리나라 소아는 Hib 백신의 기초 접종 후 12-23개월의 나이에 많은 경우에서 방어 농도 이상의 항체가를 여전히 가지고 있었다. 추가접종에 대한 면역 기억 반응도 좋아 추가 접종 받은 소아의 항체가는 받지 않은 소아에 비해 의미 있게 높았다. 우리나라에 Hib 백신의 도입과 접종 횟수를 결정하기 위해서 지속적인 연구가 필요하다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제33권2호
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• pp.142-147
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• 2005

The objective of this study was to develop a new potent antibacterial compound against bovine pneumoniae bacteria from medicinal plants or herbs. Among 65 kinds of medicinal plants and herbs, ethanol extracts of Citrus unishiu showed the highest solid yield of $54\%$. However, ethanal extracts from Agastache rugosa had the highest antibacterial activities against bovine pneumoniae bacteria, Mannheimia haemolytica A and Haemophilus somnus (size of clear zone: 16.0 mm and 10.0 mm, respectively). The antibacterial compound was also maximally extracted when the powder of A. rugosa was treated with $70\%$ ethanol at $45^{\circ}C$ for 12 hours.

• Pediatric Infection and Vaccine
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• 제13권2호
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• pp.124-129
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• 2006

목 적 : 1996년부터 2005년까지 단일기관에서 발생한 세균성 수막염의 주요 원인균의 연령별 분포를 조사하였다. 방 법 : 1996년 1월부터 2005년 12월까지 세브란스병원 소아과에 입원하여 세균성 수막염이나 신생아 수막염으로 진단받은 환아들 중 뇌척수액 배양검사 및 라텍스응집반응검사에서 원인균이 확인된 증례들의 의무기록을 후향적으로 조사하였다. 결 과 : 원인균이 확인된 46례 중 신생아 수막염은 미숙아 4례를 포함하여 27례였고 신생아기 이후의 세균성 수막염은 19례였다. 신생아 수막염 환아 중 원인균이 혈액배양검사에서도 동정된 경우는 모두 15례(55.6%)였다. 신생아 수막염의 가장 흔한 원인균은 B군 연쇄상 구균이었다(44.4%). 또한 B군 연쇄상 구균에 의한 수막염의 75.0%가 지발형 감염이었다. 신생아기 이후의 세균성 수막염 환아들의 84.2%가 5세 미만에서 발생하여, 이들의 연령 중앙값은 23개월이었다. 신생아기 이후의 세균성 수막염의 원인균으로는 폐구균 8례(42.1%), 인플루엔자균 8례, 수막구균 3례 등이 있었으며, 이 중 인플루엔자균는 2001년 이후 최근 5년간 검출되지 않았다. 결 론 : 신생아 수막염의 가장 흔한 원인균은 B군 연쇄상 구균이고 신생아기 이후에는 폐구균과 인플루엔자균이 세균성 수막염의 가장 흔한 원인균이었다. 이 중 단백결합 백신의 도입으로 인플루엔자균에 의한 세균성 수막염은 감소되는 경향을 보였다.