Plantlet regeneration from the shoot apex was studied in three different genotypes of the chinese yam (Dioscorea opposita Thunb) cv. Jnagma and Danma, Dunggunma. The effects of plant growth regulators and inorganic salts concentration of the culture medium on bud induction and shoot growth were examined. The combinations of 0.2 mg/L BAP + 0.2mg/L kinetin, 0.01mg/L NAA + 0.2 mg/L kinetin and a single treatment of 0.2mg/L BAP were equally effective for bud and shoot formation from the shoot apices in the three cultivars. Auxin (2,4-D, NAA) treatment enhanced calli formation from the cultured apices. Also, the shoot apices of the cv. Dunggunma produced more callus and buds on the culture medium (MS) containing 0.05mg/L NAA and 0.5-1.0mg/L SAP. Lower salt strength of medium inhibited shoot elongation but did not have much effect on the shoot and bud induction from the shoot apices. These results will be useful to obtain disease-free plants of the Chinese yam.
Inhibition of the growth of human cancer cells by proteins secreted from 373-L1 cells was investigated in the present study. The growth of human cancer cells was inhibited by co-culture with 373-L1 cells under 10% FBS and DME, DME, GIT and serumless medium, respectively. The conditioned medium of cultured 373-L1 cells under serumless medium was concentrated 100-fold through an ultrafiltration cell with a 10,000 molecular weight cutoff at 4$^{\circ}C$ under positive pressure using nitrogen(373-L1 EM). 373-L1 EM inhibited the growth of HeLa, Hep G 2, KHOS-Np, A43l and MCF-7 cells. 3T3-L1 EM was purified with FPLC, DEAE-ion exchange chromatography and phenyl-sepharose chromatography. The major protein of 373-L1 EM has a molecular weight of 66,000-68,000 in SDS-PAGE analysis. The results suggest that the inhibitory activity of 373-L1 EM appears to be due to some protein(m.w.66,000-68,000) secreted by 373-L1 cells.
We have cloned the CGR1 gene encoding glutathione reductase (GR) which catalyzes the reduction of oxidized glutathione (GSSG) to reduced glutathione (GSH) from Candida albicans. The cgr1/cgr1 mutants were not viable when CaMAL2 promoter repressed the CGR1 expression. The growth of the mutants could be partially overcome by thiol compounds such as GSH, dithiothreitol, cysteine, N-acetylcysteine and GSSG. Interestingly, C. albicans with CGR1 overexpressed showed defective hyphal growth on solid medium and attenuated virulence. We have also cloned the GCS1 gene encoding ${\gamma}$-glutamylcysteine synthetase which catalyzes the first step of glutathione biosynthesis. The gcs1/gcs1 mutants were nonviable in minimal defined medium. The growth of the mutants could be resumed by supplementing with GSH, GSSG and ${\gamma}$-glutamylcysteine in the medium. The mutants had increased intracellular D-erythroascorbic acid level up to 2.25-fold when transferred to GSH-free medium. When the mutants were depleted of GSH, they showed typical markers of apoptosis. In conclusion, these results suggest that glutathione is an essential metabolite, and involved in hyphal growth, virulence and apoptosis in C. albicans.
The purpose of the present study was to establish culture conditions for the in vitro study of the neonatal piglet Sertoli cell. Isolation for the culture of Sertoli cell was established using collagenase and pancreatin digestion of testicular tissues. The effects of various culture media, fetal bovine serum(FBS), follicular stimulating hormone(FSH), epidermal growth factor(EGF) and insulin-transferrin-sodium selenite(ITS) on growth of neonatal piglet Sertoli cells were investigated. The mitogenic effects of Dulbecco's modified Eagle's medium+Ham's F-12 medium was higher than other media used in this experiment. The addition of 1% FBS in cultures was necessary for attachment of Sertoli cell clusters. However, except FBS and EGF, FSH and ITS did not stimulate Sertoli cell proliferation. When Sertoli cells isolated from neonatal piglets were cultured in Dulbecco's modified Eagle's medium+Ham's F-12 medium supplemented with 1% FBS, FSH EGF and ITS, the yield and plating efficiency of Sertoli cells were largely increased. Confluency of Sertoli cells was reached as early as 4 days of culture. The method described here reduces or eliminates many of the drawbacks of the conventional procedures used to isolate and culture of Sertoli cells, thus providing a useful tool in studies of growth kinetics and regulation of cell proliferation in vitro.
본 논문에서는 10% fetal bovine serum(FBS)를 첨가한 RPMI 1640배지에 비하여 간염바이러스 표면항원에 대한 단일클론항체 생산에 있어서 효과적은 무혈청 배지에 낮은 온도의 혈청을 첨가하여 하이브리도마_2_c3.1 세포에서 그 효과를 조사하였다, 세포성장관 단일클론항체 생산을 증가시키기 위하여 기본 무혈청배지와 RPMI 1640 배지성분들의 농도를 균형있게 강화시킨 배지를 2:1(v / v)로 혼합하여 농축배지를 조성하고, 이 배지에 2mg / ml 인혈청 알부민 $5\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$ insulin, $5\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$ tran-sferrin, $10\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$ monoethanolmine 등의 몇가지 무혈청 첨가물들을 첨가하였다. 이 농축 배지에 fetal bovine serum(FBS)과 supplemented bovine calf serum(sBCS)을 첨가하였을때의 세포성장과 단일클론항체 생산을 비교하여 FBS농도를 변화하여 세포성장과 단일클론항체생산의 증가를 시도하였다. 0.5%를 농축배지에 첨가함으로써 세포성장과 단일클론항체생산의 증가를 보았다. 최대 세포농도는 $3.06{\times}10^6$ cells / ml이었으며, 이때 생산된 단일클론항체는 10% FBS배지의 $43.0\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$ 무혈청배지의 $50\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$보다 3배이상 높은 $159.7\;{\mu\textrm{g}}\;/\;ml$이 생산되었다.
Metacordyceps yongmunensis is a newly reported species from Korea, which is very similar to Cordyceps species in morphological characters. It grows on large lepidopteran pupa, and numerous white stromata grow on a single host. Mycelial growth characteristics of M. yongmunensis isolates were studied in different media and at different temperatures. Also, different carbon sources, nitrogen sources, and mineral salts were tested for mycelial growth of M. yongmunensis. Schizophyllum (mushroom) genetics complete medium plus yeast extract, Schizophyllum (mushroom) genetics minimal medium, and Martin's peptone dextrose agar produced longer colony diameters and more compact mycelial density than other media. The optimum temperature for mycelial growth was $25^{\circ}C$. Carbon sources such as sucrose, soluble starch, dextrose, glucose, dextrin, maltose, and fructose showed better mycelial growth, whereas peptone, yeast extract and tryptone resulted in the best mycelial growth of all of the nitrogen sources tested. All of the mineral salts tested showed similar growth as the control, except $K_2HPO_4$ which showed longer colony diameter and more compact mycelial density. The compact colonies were white and cottony with a greenish margin. The results showed that M. yongmunensis is an easy fungus to growas it grew from 30 to more than 50 mm in 2 wk.
The effects of Pluronic F-68, a non-ionic surfactant, on the growth and physical characteristics of Digitalis lanata suspension cultures were investigated in aqueous two-phase systems (ATPSs) composed of $4.5\%$ polyethylene glycol (PEG) 20,000 and $2.8\%$ crude dextran. In the range of 0.1-10.0 g $1^{-1}$, Pluronic F-68 enhanced the maximum cell density in a medium with ATPSs, even though Pluronic F-68 did not affect cell growth in a normal growth medium. In terms of physical properties of ATPSs with cell suspension cultures, 0.2 g $1^{-1}$ of Pluronic F-68 reduced viscosity by up to $40\%$, while 0.1 g $1^{-1}$ of Pluronic F-68 significantly enhanced the oxygen transfer rate. In addition, we successfully performed aqueous two-phase cultivation in a 5-1 stirred tank bioreactor with 0.5 g $1^{-1}$ of Pluronic F-68, and discovered that cell growth in ATPSs was similar to that in normal growth medium.
Experiments were conducted to investigate the effects of several hormones on the growth of suspension culture of carrot (Daucus carota L.) cells, where changes in pH and the amount of $NH_4-Nin$ the medium were observed with regard to growth. A treatment with 2,4-D at $10^{-5}M$ resulted in a highest rate of growth; the hormone at this concentration caused an increase in dry weight by about 40 to 50% over the control, measured at a stationary phase. It was thus indicated that 2,4-D at $10^{-5}M$ provided the optimal condition for the suspension culture. Changes in pH of the medium were found to be affected by hormonal treatments during the first 2-3 days following the inoculation, after which the pattern of pH changes in hormone enriched media paralleled that of the control. Subsequent changes of $NH_4-N and NO_3-N$ from the medium by the cells, and also by growth of the cells. The uptake of $NH_4-N$ by the cells did not appear to be influenced by hormonal treatments. At a stationary phase, a considerable amout of $NO_3-N$ played a more important role than $NH_4-N$ in the growth of the carrot cell suspension culture.
A series of in vitro incubation studies with washed rumen bacteria were conducted to determine the influence of incubation time and concentrations of peptides, alanine, ammonia nitrogen and carbohydrate on the rate of peptide disappearance and on bacterial growth. Disappearance rate of tri-alanine (ala3) under various conditions was between 30.6 and $58.2mg\;hr^-$ per gram bacterial dry matter. Ala3 was removed from the incubation medium in an almost linear fashion as incubation time and ala3 concentration was increased. Washed rumen bacteria utilized ala3 faster than di-l-alanine (ala2) at all concentrations. Adding 9mM carbohydrate significantly increased ala3 disappearance, but level of ammonia nitrogen had no influence on ala3 disappearance. The presence of alanine in the medium significantly lowered ala3 utilization by rumen bacteria. Bacterial dry matter and nitrogen growth yield were not influenced by alanine and peptides when incubation medium already contained a sufficient level of ammonia nitrogen. Increased ammonia nitrogen in the presence of ala3 did not stimulate bacterial growth. Carbohydrate significantly increased bacterial dry matter and nitrogen growth as expected. Results indicate that the rate of peptide utilization by rumen bacteria may be altered by type and concentration of peptides, and energy supply, and this may be mediated through changes in numbers and type of bacteria.
인삼의 약효성분인 saponin이 내염성효모 Sac-charomyces rouxii의 생육에 미치는 영향 및 고온처리로 stress를 준 효모의 증식회복속도에 미치는 영향을 조사하여 본결과 다음과 같은 결론을 얻을 수 있었다. 인삼saponin을 $10^{-3}%$ 되게 첨가했을 경우 무첨가구에 비해 S. rouxii의 생육을 55% 정도로 가장 크게 촉진시킬 수 있었으며 또한 인삼saponin 첨가 경우 S. rouxii의 증식곡선은 무첨가구에 비해 그 log phase의 진입속도가 훨씬 빨랐으며, 가열처리된 S. rouxii의 증식회복속도도 인삼saponin $10^{-3}%$ 첨가했을 경우 70% 정도나 빨랐다. 이로 미루어보아 인삼saponin은 heat shock 받은 효모의 생육회복속도를 크게 증가시킬 수 있는 항stress효과가 있음을 확인 할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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