Polymerase chain reaction(PCR) was conducted with a pea cDNA library using two primers synthesized from homology analysis of amino acid sequences for animal and plant cytosolic FBPases. A PCR product with 650 bp long was cloned into pGEM-T vector and sequenced. The deduced amino acid sequence of the cDNA fragment was 98, 91, and 85% homologous with those of cytosolic FBPases from spinach, sugarbeet, and sugarcane, respectively. It was 51% homologous with amino acid sequence of FBPase from pea chloroplasts. Northern blot analysis was proceeded with the cDNA clone resulting that 1.2 kb transcript was highly expressed in light-grown pea leaves but almost not expressed in dark-grown etiolated pea seedlings. When peas grown in the light for 10 days were transferred to darkness, the transcript was gradually decreased with dark treatment, indicating that the expression of the enzyme was induced by continuous white light but suppressed by dark treatment. Pea cytosolic FBPase was highly expressed in leaves with trace amounts in stems. but almost not expressed in roots.
The genetic relationships among six Cordyceps spp. were investigated based on internal transcribed spacer sequences of ribosomal DNA .A portion of the these genes was amplified by PCR. Approximately 590 base pairs were successfully amplified, cloned, sequenced, compared. The nucleotide sequence of the six amplified fragments were aligned by the clustal W program. As a result, Cordyceps militaris shared 87, 96, 98, 90 and 97% sequences homology with Paecilomyces japonica, Paecilomyces sp. J300, Paeciomyces farinosa. Paecilomyces sp. J500 and Cordyceps sinensis, respectively. Paecilomyces japonica also shared 87, 88, 92 and 87% sequence similarity with Paecilomyces sp. J300, Paecilomyces farinosa, Paecilomyces sp. J500 and Cordyceps sinensis, repectively.
Cinnamyl alcohol dehydrogenase (CAD, EC 1.1.1.95), catalyzes the reduction of hydroxycinnamaldehydes to give hydroxycinnamyl alcohols, or "monolignols," the monomeric precursors of lignin. Lignins are important components of cell walls and lignified secondary cell walls play crucial roles in long distance transport of water and nutrients during plant growth and development and in plant defense against biotic and abiotic stresses. Here a cDNA clone containing a CAD gene, named as PgCAD, was isolated from a commercial medicinal plant Panax ginseng. PgCAD is predicted to encode a precursor protein of 177 amino acid residues, and its sequence shares high homology with a number of other plant CADS. The expression of PgCAD in adventitious roots and hairy roots of P. ginseng was analyzed using reverse transcriptase (RT)-PCR under various abiotic stresses such as salt, salicylic acid, wounding and chilling treatment that triggered a significant induction of PgCAD at different time points within 2-48 h post-treatment. This study revealed that PgCAD may help the plants to survive against various abiotic stresses.
Ding, Xiangming;Yu, Wenbo;Liu, Ming;Shen, Suqin;Chen, Fang;Wan, Bo;Yu, Long
BMB Reports
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제40권6호
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pp.973-978
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2007
Septins are a family of conserved cytoskeletal GTPase forming heteropolymeric filamentous structure in interphase cells, however, the mechanism of assembly are largely unknown. Here we described the characterization of SEPT12, sharing closest homology to SEPT3 and SEPT9. It was revealed that subcelluar localization of SEPT12 varied at interphase and mitotic phase. While SEPT12 formed filamentous structures at interphase, it was localized to the central spindle and to midbody during anaphase and cytokinesis, respectively. In addition, we found that SEPT12 can interact with SEPT6 in vitro and in vivo, and this interaction was independent of the coiled coil domain of SEPT6. Further, co-expression of SEPT12 altered the filamentous structure of SEPT6 in Hela cells. Therefore, our result showed that the interaction between different septins may affect the septin filament structure.
A full-length cDNA of OgGRP gene encoding a glycinerich cell wall protein was isolated from wild rice (Oryza grandiglumis). Deduced amino acid sequences of OgGRP are composed of 148 amino acids (16.3 kDa), and show 85.9% homology with Osgrp-2 (Oryza sativa). RT-PCR analysis showed that RNA expression of OgGRP was regulated by defense-related signaling chemicals, such as cantharidin, endothall, jasmonic acid, wounding, or yeast extract treatment. In relation to pathogen stress, the function of OgGRP was analyzed in OgGRP over-expressing Arabidopsis thaliana. Overexpression of OgGRP in Arabidopsis contributed to moderate resistance against fungal pathogen, Botrytis cinerea, by lowering disease rate and necrosis size. In the analysis of the transgenic Arabidopsis lines to check the change of gene expression profile, induction of PR1, PR5 and PDF1.2 was confirmed. The induction seemed to be caused by the interaction of ectopic expression of OgGRP with SA-and JA-dependent signaling pathways.
Cinnamoyl-CoA reductase (CCR, EC 1.2.1.44) catalyses the reduction of cinnamic acid CoA esters into their corresponding aldehydes, the first step of the phenylpropanoid pathway specially dedicated to monolignol biosynthesis. A cDNA clones encoding CCR have been isolated from Panax ginseng C.A. Meyer and its expression was investigated in response to abiotic stresses. The cDNA, designated PgCCR which is 865 nucleotides long and has an open reading frame of 590 bp with a deduced amino acid sequence of 176 residues. The PgCCR encoded protein possesses substantial homology with CCRs isolated and cloned from other sources; the highest identity (51.8%) was observed with CCR from Tomato (Lycopersicon esculentum). Under various stress conditions, expression patterns of the PgCCR were highly induced in adventitious and hairy roots by several abiotic stresses. These results indicated that PgCCR plays protective role against diverse environmental stresses.
The genetic relatedness of multidrug-resistant pneumococcal isolates of serotypes 19F and 23F was investigated. The DNA fragments digested with Sma I were resolved by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). PFGE analysis of 365. pneumoniae isolates showed 13 different patterns. Among 22 isolates of serotype 19F, 9 different PFGE patterns were present and 14 isolates of serotype 23F isolates represented 5 distinct PFGE patterns. Two isolates of serotype 19F and six isolates of serotype 23F shared the same PFGE pattern (Pattern I). Based on the genetic relatedness within the strains (one genetic cluster was defined as having more than 85% homology), we divided the pneumococcal strains into genefic clusters (Ⅰ, II, III, IV, V, and VI). The 22 strains of serotype 19F belonged to five distinct genetic clusters (I, II, III, IV, V and VI) and 14 strains of serotype 23F represented two genetic clusters (I and II ). These results showed that strains of serotype 19F are genetically more diverse than those of serotype 23F, Serotype 19F isolates with PFGE patterns H and I appeared to be less related to those of the remaining PFCE patterns (A to G) (less than 60% genetic relatedness), but those strains were genetically closely related with serotype 23f. These results suggest that the latter isolates originated from horizontal transfer of the capsular type 19F gene locus to 23F pneumococcal genotypes. In conclusion, the multidrug-resistant pneumococcal isolates of serotype 19f and 23F isolated in Korea are the result of the spread of a limited number of resistant clones.
In order to develop molecular markers related to stay green phenotype, AFLP analysis was conducted using near-isogenic lines for either stay green or non stay green trait. Both lines have characteristics of multi-ear and tillers (MET). Two out of 64 primer combinations of selective amplification identified three reproducible polymorphic fragments in MET corn with stay green. Both of E+AGC/M+CAC and E+AAG/M+CAA primer combinations produced two and one specific polymorphic fragments linked to stay green trait, respectively. For the conversion of AFLPs to sequence tag sites (STSs), primers were designed form both end sequences of each two polymorphic fragments. One fragment, which was amplified with E+AAG/M+CAA primer combinations, possessed 298 bp long and showed a $91\%$ homology with maize retrotransposon Cinful-l. One out of two polymorphic fragments produced with E+AGC/M+CAC primer combination had 236 bp long and matched a $96\%$ homology with an intron region of 22kDa alpha zein gene cluster in Zea mays. One out of two PCR fragments amplified with MET2 primer set in the stay green MET was not produced in the non-stay green MET. The developed AFLP and STS marker could be used as an efficient tool for selection of the stay green trait in the MET inbred.
Specific interaction of the epsin N-terminal homology(ENTH) domain with the plasma membrane appears to bridge other related proteins to the specific regions of the membrane that are invaginated to form endocytic vesicles. An additional $\alpha$-helix, referred to as helix 0 (H0), is formed in the presence of the soluble ligand inositol-1,4,5-trisphosphate [$Ins(1,4,5)P_3$] at the N terminus of the ENTH domain (amino acid residues 3-15). The ENTH domain alone and full-length epsin cause tubulation of liposomes made of brain lipids. Thus, it is believed that H0 is membrane-inserted when it is coordinated with the phospholipid phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate [$PtdIns(4,5)P_2$], resulting in membrane deformation as well as recruitment of accessory factors to the membrane. However, formation of H0 in a real biological membrane has not been demonstrated. In the present study, the membrane structure of H0 was determined by measurement of electron paramagnetic resonance (EPR) nitroxide accessibility. H0 was located at the phosphate head-group region of the membrane. Moreover, EPR line-shape analysis indicated that no pre-formed H0-like structure were present on normal acidic membranes. $PtdIns(4,5)P_2$ was necessary and sufficient for interaction of the H0 region with the membrane. H0 was stable only in the membrane. In conclusion, the H0 region of the ENTH domain has an intrinsic ability to form H0 in a $PtdIns(4,5)P_2$-containing membrane, perhaps functioning as a sensor of membrane patches enriched with $PtdIns(4,5)P_2$ that will initiate curvature to form endocytic vesicles.
Na, Eun-Jee;Lee, Sook-Young;Kim, Hak Jun;Oem, Jae-Ku
Journal of Veterinary Science
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제22권1호
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pp.12.1-12.11
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2021
Background: Bats have been considered natural reservoirs for several pathogenic human coronaviruses (CoVs) in the last two decades. Recently, a bat CoV was detected in the Republic of Korea; its entire genome was sequenced and reported to be genetically similar to that of the severe acute respiratory syndrome CoV (SARS-CoV). Objectives: The objective of this study was to compare the genetic sequences of SARS-CoV, SARS-CoV-2, and the two Korean bat CoV strains 16BO133 and B15-21, to estimate the likelihood of an interaction between the Korean bat CoVs and the human angiotensin-converting enzyme 2 (ACE2) receptor. Methods: The phylogenetic analysis was conducted with the maximum-likelihood (ML) method using MEGA 7 software. The Korean bat CoVs receptor binding domain (RBD) of the spike protein was analyzed by comparative homology modeling using the SWISS-MODEL server. The binding energies of the complexes were calculated using PRODIGY and MM/GBGA. Results: Phylogenetic analyses of the entire RNA-dependent RNA polymerase, spike regions, and the complete genome revealed that the Korean CoVs, along with SARS-CoV and SARS-CoV-2, belong to the subgenus Sarbecovirus, within BetaCoVs. However, the two Korean CoVs were distinct from SARS-CoV-2. Specifically, the spike gene of the Korean CoVs, which is involved in host infection, differed from that of SARS-CoV-2, showing only 66.8%-67.0% nucleotide homology and presented deletions within the RBD, particularly within regions critical for cross-species transmission and that mediate interaction with ACE2. Binding free energy calculation revealed that the binding affinity of Korean bat CoV RBD to hACE2 was drastically lower than that of SARS-CoV and SARS-CoV-2. Conclusions: These results suggest that Korean bat CoVs are unlikely to bind to the human ACE2 receptor.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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