Park, Kum-Ju;Kang, Jung-Il;Kim, Tae-Seok;Yeo, Ik-Hyun
Preventive Nutrition and Food Science
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제17권1호
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pp.78-82
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2012
Antithrombotic and fibrinolytic activity of natto was evaluated on platelet aggregation in vitro and in vivo. Natto showed inhibitory effects on platelet aggregation induced by adenosine 5’diphosphate (ADP) and collagen. Orally administered natto also showed fibrinolytic activity in hypercholesterolemia rats. Normal levels of natto, when administered for four weeks, shortened euglobulin clot lysis time (ECLT) and prolonged partial thromboplastin time (PATT) significantly compared to non-treated group. In addition, the natto treatment decreased total cholesterol in serum. These results showed that intake of normal levels of natto can elicit antithrombotic and fibrinolytic effects, suggesting its consumption may improve blood circulation.
In this study, seven grain seeds(sorghum maize, buckwheat, soy bean, mung bean, red bean, and barngrass) and germinated seven grain seeds were examined the fibrinolytic activity through fibrin plate assay and SDS-PAGE. The results obtained were as follows : 1. In the fibrin plate assay, the extracts of maize, barngrass, sorghum and buckwheat showed fibrinolytic activity. Especially, Maize of them showed fibrinolytic activity that was almost similar to plasmin, fibrinolytic enzyme used as a positive control. 2. In the SDS-PAGE of seven grain seeds, fibrinolytic activity was remarkably shown in mung bean and red bean. 3. In the fibrin plate assay of germinated grain seeds, buckwheat(5 mm), buckwheat(10 mm) and soy bean(10 mm) showed a level of fibrinolytic activity that was about 0.3 fold than 1.0 unit of plasmin, Also maize(10 mm) of them showed a level of fibrinolytic activity that was about 0.5 fold than 1.0 unit of plasmin. As a result, maize of grain seeds was found that it has a strong fibrinolytic activity.
A bacteial strain which can produce the extracellular fibrinolytic enzyme was isolated from Jeot-Gal (anchovy) that was Korean traditional salt-fermented fish. The isolated bacterium was identified to be a strain of Bacillus sp. The optimal medium for fibrinolytic enzyme production was determined to consist of 5 g maltose, 10 g defatted soybean, 20 g sodium chloride, 1.75 g K2HPO4 per liter (pH 7.0)
멸치액젓으로부터 분리한 혈전용해효소를 rat에 경구투여하여 혈액내에서 효소활성을 확인 하였다. 경구투여 후 0, 1, 2, 3, 4시간 후에 혈액을 채취하여 fibrin분해활성을 본 결과 1시간부터 활성이 나타나기시작하여 3시간째에 가장 높았다. Euglobulin Iysis time(ELT)도 경구투여 2, 3시간후에 활성을 보였다. 또한, euglobulin에 의한 amidolysis acti-vity도 1시간부터 활성이 보이기 시작하여 3시간후에 최고활성에 달했다. 이상의 결과로 동물실험을 통한 혈전용해효소의 경구투여에 의한 활성을 혈액내에서 확인할 수 있었다.
청국장으로부터 분리한 균을 이용하여 fibrin을 분해 효소활성이 우수한 균주 Bacillus subtilis MG410을 분리한 균주를 이용하여 fibrinolytic enzyme의 생성을 위한 최적 배지 조건을 확립하고자 하였다. 최적 배지 조성은 탄소원 cellobiose 0.5% 첨가시 control보다 균의 성장은 0.5배, 효소 활성은 9배 정도 높은 효과를 보였고, 단당류인 glucose를 첨가시에는 균의 성장은 다소 높았으나 효소활성은 높지 않은 수치를 나타냈다. 질소원으로 soybean meal, soybean peptone을 각각 첨가시 기본배지에서 보다 균의 성장과 효소활성이 높게 나타났고, bacto peptone은 균의 성장은 낮았지만 효소 활성은 높게 나타났다. 그 중 soybean meal을 첨가시에 가장 높은 균의 성장과 효소활성이 나타났다. 질소원 soybean meal 2%를 첨가시 control보다 균의 성장은 6배, 효소 활성은 0.5배 높은 효과를 보였다. 무기질원으로는 Na₂HPO₄·12H₂O을 첨가시 효소생산이 가장 높게 나타났으며, CaCl₂, K₂HPO₄, KH₂PO₄ 첨가시에는 효소 생산에 높은 효과를 보였으나 CuSO₄·5H₂O, CoCl₂·6H₂O 첨가시에는 효소생산 및 균체 생육이 강력히 억제되었다. pH에서는 pH 5가 control보다는 균의 성장은 5배, 효소 활성은 10배 이상 높은 효과를 보였다. 따라서 최적 배지 조성은 탄소원 cellobiose 0.5%, 질소원 soybean meal 2%, 무기질원 Na₂HPO₄·12H₂O 0.02%, pH 5로 조성되었다. 이 조건하에서 배양 37℃, 48시간, 150 rpm에서 효소 생성이 가장 높은 것으로 나타났다.
The effect of fivrinolytic enzyme produced from Bacillus subtilis K-54 on the thrombosis and stress in vivo was investigated. Each partially purified fibrinolytic enzyme of 4 protein casein unit was administered orally for 3 days before intravenously injection with collagen and epinephrine. In the mice group administered with the enzyme and increased life span of mice was observed in comparison with that of control. The result suggest that the enzyme may prevent the formation of thrombos in vivo. Administration of the enzyme did not influence to stress itself because 5-hydroxyindoleacetatic acid concentration of brain in the mice group with stress did not decreased after the administration of the enzyme. The value of lipid peroxide (LPO) of the liver and brain cells in the group treted with the enzyme was lower than that of control. However, protein degradation (PDP value showed no significant difference between treatment and control groups. In addition, the value of activated partial thromboplastin time (APTT), protrombin time (PT0 and antiplasmin in blood were higher in the stress group than that of the enzyme treated group.
A thrombus is a mass formed from the constituents of the blood within the vessels or the heart during life. The process of its formation is known as thrombosis, It has been generally accepted that Holotrichia is an useful medicine for thrombosis. The rate of fibrinolysis of Holotrichia extracts increase as incubation times. Especially 52 days, the effect on the extracts has an maximum increased fibrinolytic activity, Heat-and-pH-stability of the extract on fibrinolysis is relative to temperature, At $37^{\circ}C$, it has activating effect between pH 4 and pH 12. At higher temperature, especially $80^{\circ}C$, an excessive increase in temperature has a deactivating effect on the extracts. Optimal pH of the extract on fibrinolysis is between pH 7.0 and pH 8.5, it is effective within a relatively broad pH range. In experiments of various inhibitors of Holotrichia extracts fibrinolytic activity, there are strong inhibitive effect on SBTI and Aprotinin, and a few inhibitive effect on DFP and t-AMCHA, no effect on PSMB and TLCK. Holotrichia extracts mixing with fibrinogen are observed Electron microscopy. it shows partially erosive-shaped fibrinolytic activity. In a SDS-PAGE of the extract having the fibrinolytic activity, three bands are found, protein 1, 2 and 3 having a molecular weight of 30,000, 45,000 and 60,000 Dalton.
We previously reported that Ultra nattokinase$^{(R)}$ showed high fibrinolytic activity and revealed antithrombotic effect in rat blood plasma based on its ability to suppress collagen-induced platelet aggregation. This research was carried out to verify the clot lysing activity and blood flow enhancing effects of Ultra nattokinase$^{(R)}$ via monitoring and comparing the antithrombotic effects in rat artery between oral administration of Ultra nattokinase$^{(R)}$ and maltodextrin. SD rats were fed with 1.11 mg/kg of Ultra nattokinase$^{(R)}$ for 4 weeks. The effect on arterial thrombosis was then evaluated using an antithrombotic model after induction by $FeCl_3$. Detected fibrinolytic activity was proportional to the content of Ultra nattokinase$^{(R)}$ and statistical extents of the antithrombotic activity was enhanced strongly twice rather than control group. The PT and the aPTT, however, showed only a small difference between two groups. The results suggest that Ultra nattokinase$^{(R)}$ can effectively treat thromboembolism and enhance blood flow, and that Ultra nattokinase$^{(R)}$ can also prevent venous occlusion by aiding clot lysis.
By adding sodium chloride (2.5%) into a Bacillus amyloliquefaciens DJ-4 culture broth, two serine-type fibrinolytic proteases with a molecular weight of 29 (subtilisin DJ-4) and 38-kDa were stimulated on the SDS-fibrin zymogram or inhibitor gels. B. amyloliquefaciens DJ-4 showed the highest proteolytic activity (5.52 plasmin NIH unit/ml) on the fibrin plate based on the molar ratio when cells were subjected to the 2.5% NaCl. Using a fibrin plate, the secreted protease from this strain in the presence of 5% NaCl showed that about 49% of the enzyme's activity remained after incubation at $60^{\circ}C$ for 30 min, but as the salt concentration was increased (10% NaCl) the activity nearly disappeared (0.14 plasmin NIH unit/ml). However, through a fibrin zymography assay, three fibrinolytic enzymes (38, 53 and 80-kDa) from the cells in the presence of 10% NaCl were detected. Also, two salt-activated serine-type fibrinolytic professes (29 and 38kDa) showed thermostability from 65 to $70^{\circ}C$ for 30 min. Furthermore, these professes also showed stability, pH 6-11. In particular, 29-kDa (subtilisin DJ-4) was very stable in the pH range of 4-11 at $4^{\circ}C$ for 48 h.
For studies of fibrinolytic enzyme strain K-54 was isolated from the Korean traditional food chungkook-jang. Isolated strains K-54 was identified as Bacillus subtilis. The molecular weight of fibrinolytic enzyme from B. subtilis K-54 was 27 kDa. Optimum temperature for fibrinolytic enzyme of B. subtilis K-54 was $50-70^{\circ}C$ and optimum pH for producing the enzyme of this strain was ranging from 8 to 12. Also, it was found out enzyme activity was completely inhibited by 1mM PMSF. The result indicated this enzyme was thermo-stable alkaline serine protease with strong fibrinolytic activity. The wool and silk were treated with protease of B. subtilis K-54. As a result, the property of dyeing of wool fabrics was increased. By the increasing of treatment time became smoothened. But the change of mechanical properties were not changed.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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