• Applied Biological Chemistry
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• 제39권6호
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• pp.449-454
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• 1996

곤충 병원성 곰팡이 Beauveria bassiana(ATCC7159)로부터 곤충 cuticle 분해 효소인 extracellular protease의 최적 생산 조건을 gelatin, vine serum albumin(BSA), casein 및 polypeptone 등을 첨가하여 조사하였다. 이 효소의 최적 생산 배양 조건은 미량원소를 함유한 0.5% Polypeptone, 50mM potassium phosphate pH 6.0이었다. 이 조건에서 pretense의 생산은 배양 1일 후부터 급격히 상승하여 배양 3일 이후 최대로 생산되었으며 배양액의 pH가 7.0 이상이 되면 효소 생산효과가 거의 없었다. 이 pretenses는 phenyl methyl sulfonyl fluoride (PMSF)에 저해받는다. 효소 활성은 pH 8.5와 11.5에서 높게 나타났다. 또한 비변성 isoeletricfocusing gel 전기영동 후 각 gel 절편의 활성을 측정한 결과 protease활성이 세부분에서 나타났다. 따라서 탄소원 및 질소원으로 polypeptone을 이용하여 생산되는 pretense는 세종류 이상인 것으로 판단된다.

• Journal of Microbiology
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• 제40권1호
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• pp.26-32
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• 2002

From the culture supernatant of the psychrotrophic strain of Bacillus amyloliquefaciens an extracellular serine protease was purified to apparent homogeneity by successive purification steps using QAE-Sephadex, SP-Sephadex and Sephacryl S-100 column chromatography. The pretense is monomeric, with a relative molecular mass of 23,000. It is inhibited by the serine protease inhibitor phenylmethylsulfonyl fluoride, but not by EDTA. The enzyme is most active at pH 9-10 and at $45^{\circ}C$, although it is unstable at $60^{\circ}C$.

• 대한의생명과학회지
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• 제6권3호
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• pp.209-221
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• 2000

본 논문은 환자들의 병소에서 채취된 가검물에 존재하는 미생물들 가운데 pretense을 분비하는 균주들을 분리하고, 그 가운데 가장 효소생산력이 우수한 균주를 선정하여 가정용 Protease 세제생산에 활용 가능성을 알아보고자 그들이 생산하는 protease의 기초적 생산조건 및 부분적 효소학적 특성 등에 관한 실험에서 얻은 결과들을 보고하고자 작성되었다. Serratia sp. 2000-1로 동정된 본 실험 균주가 생산하는 protease의 기초적 생산조건과 부분적 효소학적 특성을 조사한 결과 효소생산을 위한 최적 배지에 탄소원과 질소원 그리고 금속염의 종류와 농도는 각각 Glucose 1.5%, C.S.P 2.0%, CaCl$_2$ 0.1%였다. 그리고 최적 배양온도는 3$0^{\circ}C$, 초발 pH는 8.0, 배양시간은 72시간 이었다. Protease의 정제는 ammonium sulfate precipitation, DEAE-cellulose, Sephadex G-200 column을 통하여 분리 정제하였으며 이때 최종 효소수율은 14.4%, 효소 비활성도는 약 29배 증가한 것으로 나타났다. 그리고 효소 작용의 최적온도와 pH는 35$^{\circ}C$와 pH 8.0으로 나타났고, 효소 작용의 열과 pH에 대한 안정성은 4$0^{\circ}C$와 pH 6~10까지는 효소의 활성이 비교적 안정한 것으로 나타났다. 금속이온들 중 $Mg^{2+}$, $Ba^{2+}$, $Ca^{2+}$, Mn$^{2+}$은 효소활성을 촉진하나 Hg$^{2+}$, Ag$^{2+}$, Cu$^{2+}$는 효소활성을 저해하는 것으로 나타났다. 그리고 효소활성 저해제들 중에는 SDS가 가장 강하게 효소활성을 저해하는 것으로 나타났다.

• Journal of Microbiology
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• 제41권1호
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• pp.58-62
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• 2003

An extracellular pretense of Bacillus amyloliquefaciens S94 was purified to apparent homogeneity. The enzyme activity was strongly inhibited by general inhibitor for serine protease, PMSF, suggesting that the enzyme is a serine pretense. The purified enzyme activity was inhibited by leucine peptidase inhibitor, bestatin, suggesting that the enzyme is a leucine endopeptidase. The maximum proteolytic activity against different protein substrates occurred at pH 10, 45$^{\circ}C$ (protein substrate) and pH 8, 45$^{\circ}C$ (synthetic substrate). The purified enzyme was specific in that it readily hydrolyBed substrates with Leu or Lys residues at P$_1$ site. The pretense had characteristics of a cold-adapted protein, which was more active for the hydrolysis of synthetic substrate in the range of 15$^{\circ}C$ to 45$^{\circ}C$, specially at low temperature.

• 한국식품영양과학회지
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• 제31권5호
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• pp.754-759
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• 2002

공업적으로 광범위하게 이용되고 있는 protease 중 중성 영역에서 최적의 활성을 갖는 중성 protease에 대한 연구의 일환으로, 토양으로부터 protease의 생성능이 우수한 10여 균주를 순수 분리하였으며, 이들 중에서 protease의 활성 이 가장 우수한 PANH765를 최종 선별하였다. 이 균주의 형태학적, 배양학적, 생리학적 및 생화학적 특성을 조사하여 Bergey의 세균 분류서의 색인에 따라 체계적으로 분류한 결과, Bacilius subtilis 또는 그 유연균으로 동정되어 분리균을 Bacilius .Subtilis PA-NH765로 동정하였다. B. subtilis PANH-765 균주에 의한 protease의 최적 배지 조성은 2.0% glucose, 1.0% yeast extract, 0.2% ammonium nitrate, 0.02% ferrous sulfate 및 0.02% di-potassium hydrogen phosphate이었으며, 최적 생산 조건은 배양온도 ,3$0^{\circ}C$, pH 7.0, 진탕 속도 150 rpm이었다. 이 조건에서 초기 균체량을5%(w/v)접종하여 배양하였을 때 시간에 따른 효소의 최대 활성은 배양 ,36시간일 때 6.34 U이었다.

• 미생물학회지
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• 제43권3호
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• pp.222-226
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• 2007

단백질 분해효소는 아미노산간에 존재하는 peptide결합을 절단하는 효소로 산업적으로 많이 사용된다. 이러한 단백질 분해효소의 새로운 공급원을 찾기 위하여 체외 단백질 분해효소를 생산하는 세균을 둥해 심층수로부터 집식배양으로 분리하였다. 이들 중 빠른 성장과 skim milk를 첨가한 배지에서 가장 큰 투명환을 보여준 균주를 HJ19로 명명하였다. 분리균의 형태학적, 생리생화학적 특성과 16S rRNA gene의 염기서열을 조사한 결과 Micrococcus sp.에 속하는 것으로 나타났다. 분리된 Micrococcus sp. HJ19는 $10^{\circ}C$에서는 자라지 못하였으며 $20^{\circ}C$부터 생육과 효소활성을 보여주었다. 최적 생육 온도는 $37^{\circ}C$였으며, 효소 활성은 $30^{\circ}C$에서 약 480 unit/ml의 활성을 보여 주었다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제15권2호
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• pp.176-178
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• 2000

V. parahaemolyticus를 균주로 alkaline protease 생산을 위한 질소원의 종류, skim milk농도, NaCl농도, 금속이온의 종류를 조사하였다. 질소원인 peptone, tryptone, casamino acid, ski milk, phyton peptone중에서는 skim milk에서 활성이 월등히 높게 나타났고, skim milk의 농도에 따른 실험에서는 2%일 때 활성이 가장 높게 나타났다. NaCl의 농도에 따른 실험에서는 0%일 때 활성이 가장 높았고 농도가 높아질수록 활성이 낮아졌다. 금속이온에 따른 활성을 보면 금속이온이 들어가지 않았을 때 활성이 가장 높게 나타났고, 금속이온을 첨가하므로써 활성이 급격히 떨어졌다. 또한 CoCl$_2$, CuCl$_2$, HgCl가 첨가되었을 때는 활성이 전혀 나타나지 않았다.

• 한국수산과학회지
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• 제22권5호
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• pp.363-369
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• 1989

산업적으로 속성젓갈을 대량 생산하기 위하여, 우선 시중 젓갈에서 단백질분해력이 강한 균주 4 종을 분리하여 속성 분해정도와 분해 생성물의 풍미를 비교 검토한 결과 B. subtilis p-4 및 B. licheniformis p-5 균이 가장 양호하였으며, 이들 균주와 그 pretense의 특성은 다음과 같다. pH 7.0, $40^{\circ}C$ 식염$1\%$ 농도에서 균체 및 조효소 활성이 가장 양호하였으며, 이때의 비증식속도는 p-4 균 및 p-5 균이 각각 0.48/hr, 0.49/hr이었고, 최대 효소활성 농도는 p-4 는 30시간 후 335n mole-Tyr/min.ml, p-5는 28시간 후 300n mo1e-Tyr/min.ml이였다. 그리고 sephadex G-100 겔 여과에 의한 효소 정제도는 조효소에 비해 비활성이 p-4 및 p-5 균 protease의 경우 각각 25.4배, 8.6배씩 증가하였으며, pH 7.0, $50^{\circ}C$에서 활성이 가장 높았다. 또한 겔여과에 의한 분자량은 p-4가 18,000, p-5 protease가 30,000이었고, 저해제의 효과에서는 두 Protease 모두 $Ni^{2+},\;Cu^{2+}$ 이온과 EDTA, o-phenanthroline에 의해 강하게 활성이 소실되는 것으로 보아 metal chelator sensitive neutral protease에 속하는 것으로 추정되었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제40권5호
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• pp.388-394
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• 1997

곤충 병원성 곰팡이 Beauveria bassiana ATC7159의 배양여액으로부터 균체외 protease (basiasin I)를 Ammonium sulfate 침전, DEAE-Sephadex A-50, CM-cellulose 및 Hydroxyapatite column chromatography를 수행하여 완전히 정제하였다. 이 과정으로 41배 정제되었으며 정제수율은 13.6%였다. 정제된 bassiasin I의 분자량은 SDS-PAGE 상에서 약 32,000 Da이며 pI값은 9.5로 확인되었다. $NH_2$ 말단 아미노산 서열은 다른 곤충 병원성 곰팡이가 생산하는 pretense들과 높은 상동성을 보였다. Protease 활성의 최적 pH는 10.5 부근이며, pH 5.0-11.0범위에서 안정하였다. 최대 활성온도는 $60-65^{\circ}C$이며, $60^{\circ}C$에서 120분후에 약 20%의 잔존활성을 보였다. 이 pretense는 phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF) 및 diisopropyl fluorophosphate (DFP)에 의해 저해된다.

• 미생물학회지
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• 제38권1호
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• pp.50-53
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• 2002

백강균(Beauveria bassiana DGUM 34001)은 $24^{\circ}C$의 온도와pH 7.0의 초기 pH에서 최적의 균사체 생육을나타내었다. 사용한 복합배지 중 mushroom complex배지(MCM)에서 가장 우수한 균사생육을 나타내었다. Czapek-Dox 한천배지를 최소배지로 각각 탄소원, 질소원 및 인산원의 영향을 조사한 결과, glucose, soytone 및 sodium phosphate ($NaH_2$$PO_4$)에서 가장 우수한 균사 생육을 보여주었다. MCM액체배지에서 균사 배양 후 세포외 효소 활성을 측정한 결과,$\alpha$-amylase, lipase, chitinase, CMCase및 pretense의 비효소활성은 각각 297.0, 0.058, 0.33, 0.21 및 22.8 units/mg protein이었다. Casein과 soluble chitosan을 첨가할 경우 세포외 분비 pretense와 chitinase의 효소 활성 이 증가되었다.