Studies on the Processing of Rapid Fermented Anchovy Prepared with Low Salt Contents by Adapted Microorganism 1. Biochemical Characterization of Proteolytic Bacteria and their Extracellular Pretense Isolated from Fermented Fish Paste

미생물을 이용한 저식염 멸치젓의 속성발효에 관한 연구 1. 젓갈에서 분리한 단백질분해균 및 단백질분해효소의 생화학적 특성

In this study, the biochemical characterization of strong proteolytic bacteria and their extracellular pretense isolated from fermented fish paste were experimented for the purpose of industrial large scale-production by accelerated fermentation. The results obtained were as follows: Among 4 strains isolated from fermented fish paste, B. subtilis p-4 and B. licheniformis p-5, which grow well at $40^{\circ}C$, pH 7.0 and $1\%$ of salt contents, were the best proteolytic bacteria and were shown $0.48hr^{-1}$, $0.49hr^{-1}$ of specific growth rate in TPY medium, respectively. Maximum enzyme activity of B. subtilis p-4 was 335n mole-Tyr/min.ml after 30 hrs and that of B. licheniformis p-5 was 300n mole-Tyr/min.ml after 28 hrs of shaking culture. Purified pretense produced by B. subtilis p-4 and B. licheniformis p-5 showed maximum activity at $50^{\circ}C$, pH 7.0 and molecular weight were estimated to be 18,000, 30,000 by sephadex G-100 gel filtration, respectively. These were supposed to be a kind of metal chelator sensitive neutral pretense from the result of high sensitivity against EDTA, o-phe-nanthroline and metal ions such as $Cu^{2+},\;Ni^{2+},\;Zn{2+}$.

산업적으로 속성젓갈을 대량 생산하기 위하여, 우선 시중 젓갈에서 단백질분해력이 강한 균주 4 종을 분리하여 속성 분해정도와 분해 생성물의 풍미를 비교 검토한 결과 B. subtilis p-4 및 B. licheniformis p-5 균이 가장 양호하였으며, 이들 균주와 그 pretense의 특성은 다음과 같다. pH 7.0, $40^{\circ}C$ 식염$1\%$ 농도에서 균체 및 조효소 활성이 가장 양호하였으며, 이때의 비증식속도는 p-4 균 및 p-5 균이 각각 0.48/hr, 0.49/hr이었고, 최대 효소활성 농도는 p-4 는 30시간 후 335n mole-Tyr/min.ml, p-5는 28시간 후 300n mo1e-Tyr/min.ml이였다. 그리고 sephadex G-100 겔 여과에 의한 효소 정제도는 조효소에 비해 비활성이 p-4 및 p-5 균 protease의 경우 각각 25.4배, 8.6배씩 증가하였으며, pH 7.0, $50^{\circ}C$에서 활성이 가장 높았다. 또한 겔여과에 의한 분자량은 p-4가 18,000, p-5 protease가 30,000이었고, 저해제의 효과에서는 두 Protease 모두 $Ni^{2+},\;Cu^{2+}$ 이온과 EDTA, o-phenanthroline에 의해 강하게 활성이 소실되는 것으로 보아 metal chelator sensitive neutral protease에 속하는 것으로 추정되었다.