L-Asparaginase (E.C. 3.5.1.1) is an enzyme involved in asparagine hydrolysis and has the potential to effect leukemic cells and various other cancer cells. We identified the L-asparaginase gene (L-ASPG86) in the genus Mesoflavibacter, which consists of a 1,035 bp open reading frame encoding 344 amino acids. Following phylogenetic analysis, the deduced amino acid sequence of L-ASPG86 (L-ASPG86) was grouped as a type I asparaginase with respective homologs in Escherichia coli and Yersinia pseudotuberculosis. The L-ASPG86 gene was cloned into the pET-16b vector to express the respective protein in E. coli BL21 (DE3) cells. Recombinant L-asparaginase (r-L-ASPG86) showed optimum conditions at 37-40℃, pH 9. Moreover, r-L-ASPG86 did not exhibit glutaminase activity. In the metal ions test, its enzymatic activity was highly improved upon addition of 5 mM manganese (3.97-fold) and magnesium (3.35-fold) compared with the untreated control. The specific activity of r-L-ASPG86 was 687.1 units/mg under optimum conditions (37℃, pH 9, and 5 mM MnSO4).
Hyun PARK;Man Young KO;Moon Kee PAIK;Ching Thack SOH;Jang Hoon SEO;Kyung-il IM
Parasites, Hosts and Diseases
/
v.33
no.3
/
pp.211-218
/
1995
To clarify the correlation of the proteinase activity with pathogenicity of Clonorrhis sinensis, the proteinase activity either in excretory-secretory products (ESP) or in crude extracts of adult C. sinensis was examined. Substrate gel electrophoresis of the ESP and crude extracts revealed four distinct enzyme bands, which were differently inhibited by the specific proteinase inhibitors. The proteinase of the ESP with molecular mass of 24 kDa, was purified 23-fold with 14.5% yield by spectra gel ACA 44 gel filtration. It exhibited optimal pH at 7.5 in sodium phosphate (0.1 M). Its activity was inhibited specifically by N-ethylmaleimide (NEMI and antipain whereas potentiated 1.9 folds in the presence of 5 mM dithiothreitol (DTT). Cytotoxicity of the proteinase increased in a dose- dependent manner up to 120 ㎍/ml while reduced by NEM and antipain, indicating that cysteine proteinase was responsible for the cytotoxicity. This result shows that the 24 kDa cysteine proteinase is deeply correlated with the pathogenicity of C. sinensis infection.
The purpose of this study was to suggest that selecting method of rotifer with high activity of digestive enzymes for the enrichment effect of rotifer and the increasing of digestive enzymes of fish larvae. the populations assayed the activities of the digestive enzymes were randomly selected out of several population communities cultured with freshwater condensed Chlorella. The relationship with the population density and the growth rate of selected populations was shown to RD=5865 SGR-350.08(P<0.001). The relationships with fecundity of the growth rate and the population density were shown to F=-36.147 SGR+61.652(P<0.05) and F=-0.0085 RD+66.38(P<0.001), respectively. The relationships of the growth rate and the individual activities of digestive enzymes in rotifer were assayed to Amyl=-1.6482 SGR+3.2498(P<0.05), TAP=-0.8115 SGR+1.1361(P<0.001) and TGL+0.0055 SGR+0.0079(P=0.239), respectively. But in TG-lipase was not related significantly with the growth rate. Also the relationships of the fecundity and the individual activities of digestive enzymes in rotifer were shown to Amyl=0.0296 F+1.0981(P<0.001), TAP=0.0252 F+0.0975(P<0.001) and TGL=-6E-06 F+0.0113(P=0.915), respectively. But in TG-lipase was not related significantly with the fecundity. And the relationships with the specific activity of TG-lipase of the fecundity, the growth rate and the population density were TGL=-0.024 F+0.2332(P=0.132), TGL=0.1267 SGR+0.005(P<0.01) and TGL=0.0002 F-0.0594(P<0.001), respectively. In this case, specific activity of TG-lipase was shown the significant relationship with the population density and the growth rate, but it was not related significantly with fecundity. Therefore, Because a population shown the high activity of digestive enzymes for increasing a lipid enrichment effect of a rotifers and receiving the many exogenous digestive enzymes to fish larvae was the population of high fecundity than the population of high rotifer density, to select the population of a high fecundity was suggested to benefit than a high growth rate for fish larvae.
In order to examine the effect of SO$_2$, which is the major component of acid rain, on the peroxidase activity, rice (Oryza sativa) seedlings were grown on the media containing various concentrations of Na$_2$SO$_3$. Na$_2$SO$_3$ concentrations needed for the 50% inhibition of rice seed germination were determined to be 300$\mu\textrm{g}$/ml at pH 7, 8$\mu\textrm{g}$/ml at pH 5 and 2$\mu\textrm{g}$/ml at pH 3. Notably, about 8 fold and 4 fold increase of the specific activity of the enzyme were observed with the seedlings treated with 8$\mu\textrm{g}$/ml Na$_2$SO$_3$ at pH 5 and 2$\mu\textrm{g}$/ml Na$_2$SO$_3$ at pH 3, respectively. The effects of Cd and Pb on the peroxidase activities and chlorophyll contents were also examined. About 3.9 fold higher peroxidase activities were found at 0.03mM Cd, and the chlorophyll contents were reduced to 63% of the control seedlings. At 0.04mM Pb, 2.5 fold higher enzyme activities were found and the chlorophyll contents were reduced to 72%. Therefore, the increases of rice peroxidase activities might be involved in the defense mechanism of the cell against various environmental stresses such as Na$_2$SO$_3$, Cd and Pb. The effects of Cu and Fe, which are the inducers of oxidative stresses by the generations of reactive oxygen species, on the peroxidase activities were also investigated. About 57% and 65% activity losses were found at 0.5mM CuSO$_4$ and 0.5mM FeSO$_4$, respectively, and radical scavenger ethanol almost completely protected both inactivations. However, dimethyl sulfoxide, mannitol, thiourea and histidine showed different radical scavenging effects one another against Cu and Fe inactivation.
Seo, Jae-Won;Lee, Hae-Beom;Kim, Nam-Soo;Lee, Young-Hoon;Kang, Hyung-Sub;Kim, In-Shik;Park, Sang-Youel
Journal of Veterinary Clinics
/
v.26
no.2
/
pp.144-149
/
2009
Chondrocytes and synovial fluid derived markers are used to monitor for osteoarthritis(OA). Specific inhibitors, known as tissue inhibitors of metalloproteinases(TIMP), regulate the proteolytic activity of matrix metalloproteinases(MMP). This study investigated whether MMP and TIMP levels were altered in synovial fluid and cartilage following the experimental induction of OA in canines. Twenty mature beagle dogs underwent a unilateral surgical transection of the cranial cruciate ligament and the medial collateral ligament as well as a medial meniscectomy. Matrix metalloproteinase-2 and MMP-9 levels were assayed using Western blot and TIMP-2 levels were measured with enzyme-linked immunosorbent assays four weeks after OA induction. Increased MMP-2 expression was observed in chondrocytes isolated from cartilage following OA induction, but MMP-9 expression decreased. Matrix metalloproteinase-2 and MMP-9 levels in synovial fluid from the OA induced joint significantly increased compared to those of the sham group. Tissue inhibitors of metalloproteinase-2 concentrations were higher in chondrocytes from the OA cartilage, yet TIMP-2 remained lower in the synovial fluid of OA. This suggests the elevated release of MMP-9 over MMP-2 into the synovial fluid following the cartilage degradation-related death of chondrocytes after OA. Osteoarthritis can be further deteriorated by increased MMP activity in the synovial fluid because TIMP-2 exist low concentration into the extracellular matrix. As a result, MMP activity, particularly MMP-9 activity, can be useful as a biomarker in diagnosing and monitoring the early stages of canine OA.
Journal of mucopolysaccharidosis and rare diseases
/
v.3
no.1
/
pp.20-27
/
2017
Purpose: Mucopolysaccharidosis IV (MPS IV) is a disease characterized by deficient activity of N-acetylgalactosamine-6-sulfatase (GALNS) causing excessive lysosomal storage of keratan sulfate (KS). The identification of the relevant disaccharide units of KS after keratanase II digestion followed by liquid chromatography/tandem mass spectrometry detection (LC-MS/MS) is validated and applicable for the preliminary diagnosis of MPS IV. Methods: A total of 67 urine samples were collected and analyzed from 11 MPS IV patients comprising 10 MPS IVA and one MPS IVB patients, and 56 normal controls. Urinary glycosaminoglycan was first precipitated by the Alcian blue method followed by a digestion of keratanase II. The protonated species of the digested disaccharide products were detected by using multiple reaction monitoring experiment. Results: One particular disaccharide of KS was selected. The transition mass-to-charge (m/z) of the parent ion and its daughter ion after collision was $462.0{\rightarrow}97.0$, whereas the chondrosine used as an internal standard in this assay was m/z $353.9{\rightarrow}73.0$. The results corresponded well with the two-dimensional electrophoresis method. The quantities of urinary KS were significantly raised in confirmed MPS IV patients when comparing with those of normal controls ($170.2{\pm}81.1$ vs. $4.06{\pm}1.92{\mu}g/mL$). Conclusion: The LC-MS/MS method for MPS IVA determination is specific, sensitive, validated, and applicable for urinary KS quantification. This method can be used not only as a first-line biochemistry examination of MPS IVA, but also as an outcome survey after enzyme replacement therapy.
Hepatocellular carcinoma (HCC) is a leading cause of cancer death worldwide. Presently, targeted therapy via monoclonal antibodies to specific tumor-associated antigens is being continuously developed. Hep88 mAb has proven to exert tumoricidal effects on the HepG2 cell via a paraptosis-like morphology. To verify the pathway, we then demonstrated downstream up-regulation of caspase-3, caspase-8 and caspase-9, assessingmRNA expression by real-time PCR and associated enzyme activity by colorimetric assay. Active caspase-3 determination was also accomplished by flow cytometry. Active caspase-3 expression was increased by Hep88 mAb treatment in a dose-and time-dependent manner. All of the results indicated that Hep88 mAb induced programmed cell death in the HepG2 cell line from paraptosis-like to apoptosis by downstream induction of caspases. These conclusions imply that Hep88mAb might be a promising tool for the effective treatment of HCC in the future.
Human erythropoietin(EPO) is a glycoprotein that enhances red blood cell production by stimulating proliferation and differentiation of erythroid progenitor cells in the bone marrow. Patients with chronic kidney disease(CKD) suffer from anemia caused by reduced production of EPO in the kidney. Recombinant human EPO protein has been used successfully for the treatment of anemia associated with CKD. Recently, attention has been paid to the development of side effect of EPO, pure red cell aplasia(PRCA), in some patients with CKD. PRCA is a rare disorder of erythropoiesis that leads to a severe anemia due to an almost complete cessation of red blood cell production. EPO-related PRCA is caused by the production of EPO-neutralizing antibodies(Abs) that eliminate the biological activity of EPO as well as endogenous EPO in patients undergoing therapy. Since 1988, almost 200 cases worldwide have been reported with Ab-positive PRCA after receiving EPO therapeutics. The underlying mechanisms of the breaking of immune tolerance to self-EPO have been investigated. Modification of formulation, organic compounds of container closures, and route of administration has been suggested for the possible mechanism of increased immunogenicity of EPO. A number of assays have been used to detect Abs specific to EPO. These assays are generally grouped into two major categories: binding Ab assays and neutralizing Ab assays(bioassays). There are several types of binding Ab assays, including radioimmunoprecipitation assay, enzyme-linked immunosorbent assay, and the BIAcore biosensor assay. In vitro cell-based bioassays have been utilized for the detection of neutralizing Abs. Finally, the recent experience with anti-EPO Abs may have considerable implications for the future development and approval of EPO preparations. Also, considering that millions of patients are being treated with EPO, clinicians need to be aware of signs and consequences of this rare but severe clinical case.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
/
v.32
no.4
/
pp.562-566
/
2003
A $\beta$-mannanase of Bacillus sp. was purified by DEAE Sephacel ion exchange column chromatography. The specific activity of the purified enzyme was 17.41 units/mg protein, representing an 84.74-folds purification of the original crude extract. For the separation of two types of hydrolysates by the action of purified $\beta$-mannanase, carbon column chromatography, sephadex G-25 column chromatography and thin layer chromatography were accomplished. Main hydrolysates were D.P value 5 and 7 containing of low D.P values. By the method of FACE (Fluorophore Assisted Carbohydrate Electrophoresis), two types of hydrolysates were identified to homo type.
l o identil) ;~nclc li~iracterize; In iiscorhate oxiililinp enzyme in ('/rItrn~i~rlon~ir~c~t~itr~~lr.o\ r(1rii. we studicil ;is li)llows. Ascorh;ric oxiiliring cn/;jme activit) f ~ o ~thne crude extract 01' ( ' / ~ l o n ~ ~ . c l o t ~1~~oit~rl~1oin~/.t\ii W;I\ dctccietl by 5pecific active 5ta1ning through nati\e gel cletrophorcsi\ and ~iltra\~iolestp eciroscopy. Ascorb~ttco xidizing c n ~ y m ew i15 partilly 1~1rilieJ by \;~riousp roccclurcs inclucli~lga rnmoniu~ns uIl';~tcp recipit;iion. aJ\orption ~111-om;~togrophy on Iiy~lroxyapaiitca nd Scphailcx <;-I50 gel lillration chrornatogral>liy. Plie ~nolecularw eight 01' the nativc cnrytiic was ahour 88.000 tlalton hy nativc gel elcciroplloresis anci subunit niolecul;ir ~rciglit 55,000 ol' this cnrymc w;~c determined hy SIIS-P.ASI!. The optimum tcmper~tture ii)r the cnrymc nos ahout 5j$^{\circ}$C and pH 4.6 was the optimum. Moreover. ascorhaie oxi~losc in C: reinhardtii was confirmet1 by Ll1e\tcrn blotting technique.
본 웹사이트에 게시된 이메일 주소가 전자우편 수집 프로그램이나
그 밖의 기술적 장치를 이용하여 무단으로 수집되는 것을 거부하며,
이를 위반시 정보통신망법에 의해 형사 처벌됨을 유념하시기 바랍니다.
[게시일 2004년 10월 1일]
이용약관
제 1 장 총칙
제 1 조 (목적)
이 이용약관은 KoreaScience 홈페이지(이하 “당 사이트”)에서 제공하는 인터넷 서비스(이하 '서비스')의 가입조건 및 이용에 관한 제반 사항과 기타 필요한 사항을 구체적으로 규정함을 목적으로 합니다.
제 2 조 (용어의 정의)
① "이용자"라 함은 당 사이트에 접속하여 이 약관에 따라 당 사이트가 제공하는 서비스를 받는 회원 및 비회원을
말합니다.
② "회원"이라 함은 서비스를 이용하기 위하여 당 사이트에 개인정보를 제공하여 아이디(ID)와 비밀번호를 부여
받은 자를 말합니다.
③ "회원 아이디(ID)"라 함은 회원의 식별 및 서비스 이용을 위하여 자신이 선정한 문자 및 숫자의 조합을
말합니다.
④ "비밀번호(패스워드)"라 함은 회원이 자신의 비밀보호를 위하여 선정한 문자 및 숫자의 조합을 말합니다.
제 3 조 (이용약관의 효력 및 변경)
① 이 약관은 당 사이트에 게시하거나 기타의 방법으로 회원에게 공지함으로써 효력이 발생합니다.
② 당 사이트는 이 약관을 개정할 경우에 적용일자 및 개정사유를 명시하여 현행 약관과 함께 당 사이트의
초기화면에 그 적용일자 7일 이전부터 적용일자 전일까지 공지합니다. 다만, 회원에게 불리하게 약관내용을
변경하는 경우에는 최소한 30일 이상의 사전 유예기간을 두고 공지합니다. 이 경우 당 사이트는 개정 전
내용과 개정 후 내용을 명확하게 비교하여 이용자가 알기 쉽도록 표시합니다.
제 4 조(약관 외 준칙)
① 이 약관은 당 사이트가 제공하는 서비스에 관한 이용안내와 함께 적용됩니다.
② 이 약관에 명시되지 아니한 사항은 관계법령의 규정이 적용됩니다.
제 2 장 이용계약의 체결
제 5 조 (이용계약의 성립 등)
① 이용계약은 이용고객이 당 사이트가 정한 약관에 「동의합니다」를 선택하고, 당 사이트가 정한
온라인신청양식을 작성하여 서비스 이용을 신청한 후, 당 사이트가 이를 승낙함으로써 성립합니다.
② 제1항의 승낙은 당 사이트가 제공하는 과학기술정보검색, 맞춤정보, 서지정보 등 다른 서비스의 이용승낙을
포함합니다.
제 6 조 (회원가입)
서비스를 이용하고자 하는 고객은 당 사이트에서 정한 회원가입양식에 개인정보를 기재하여 가입을 하여야 합니다.
제 7 조 (개인정보의 보호 및 사용)
당 사이트는 관계법령이 정하는 바에 따라 회원 등록정보를 포함한 회원의 개인정보를 보호하기 위해 노력합니다. 회원 개인정보의 보호 및 사용에 대해서는 관련법령 및 당 사이트의 개인정보 보호정책이 적용됩니다.
제 8 조 (이용 신청의 승낙과 제한)
① 당 사이트는 제6조의 규정에 의한 이용신청고객에 대하여 서비스 이용을 승낙합니다.
② 당 사이트는 아래사항에 해당하는 경우에 대해서 승낙하지 아니 합니다.
- 이용계약 신청서의 내용을 허위로 기재한 경우
- 기타 규정한 제반사항을 위반하며 신청하는 경우
제 9 조 (회원 ID 부여 및 변경 등)
① 당 사이트는 이용고객에 대하여 약관에 정하는 바에 따라 자신이 선정한 회원 ID를 부여합니다.
② 회원 ID는 원칙적으로 변경이 불가하며 부득이한 사유로 인하여 변경 하고자 하는 경우에는 해당 ID를
해지하고 재가입해야 합니다.
③ 기타 회원 개인정보 관리 및 변경 등에 관한 사항은 서비스별 안내에 정하는 바에 의합니다.
제 3 장 계약 당사자의 의무
제 10 조 (KISTI의 의무)
① 당 사이트는 이용고객이 희망한 서비스 제공 개시일에 특별한 사정이 없는 한 서비스를 이용할 수 있도록
하여야 합니다.
② 당 사이트는 개인정보 보호를 위해 보안시스템을 구축하며 개인정보 보호정책을 공시하고 준수합니다.
③ 당 사이트는 회원으로부터 제기되는 의견이나 불만이 정당하다고 객관적으로 인정될 경우에는 적절한 절차를
거쳐 즉시 처리하여야 합니다. 다만, 즉시 처리가 곤란한 경우는 회원에게 그 사유와 처리일정을 통보하여야
합니다.
제 11 조 (회원의 의무)
① 이용자는 회원가입 신청 또는 회원정보 변경 시 실명으로 모든 사항을 사실에 근거하여 작성하여야 하며,
허위 또는 타인의 정보를 등록할 경우 일체의 권리를 주장할 수 없습니다.
② 당 사이트가 관계법령 및 개인정보 보호정책에 의거하여 그 책임을 지는 경우를 제외하고 회원에게 부여된
ID의 비밀번호 관리소홀, 부정사용에 의하여 발생하는 모든 결과에 대한 책임은 회원에게 있습니다.
③ 회원은 당 사이트 및 제 3자의 지적 재산권을 침해해서는 안 됩니다.
제 4 장 서비스의 이용
제 12 조 (서비스 이용 시간)
① 서비스 이용은 당 사이트의 업무상 또는 기술상 특별한 지장이 없는 한 연중무휴, 1일 24시간 운영을
원칙으로 합니다. 단, 당 사이트는 시스템 정기점검, 증설 및 교체를 위해 당 사이트가 정한 날이나 시간에
서비스를 일시 중단할 수 있으며, 예정되어 있는 작업으로 인한 서비스 일시중단은 당 사이트 홈페이지를
통해 사전에 공지합니다.
② 당 사이트는 서비스를 특정범위로 분할하여 각 범위별로 이용가능시간을 별도로 지정할 수 있습니다. 다만
이 경우 그 내용을 공지합니다.
제 13 조 (홈페이지 저작권)
① NDSL에서 제공하는 모든 저작물의 저작권은 원저작자에게 있으며, KISTI는 복제/배포/전송권을 확보하고
있습니다.
② NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 상업적 및 기타 영리목적으로 복제/배포/전송할 경우 사전에 KISTI의 허락을
받아야 합니다.
③ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 보도, 비평, 교육, 연구 등을 위하여 정당한 범위 안에서 공정한 관행에
합치되게 인용할 수 있습니다.
④ NDSL에서 제공하는 콘텐츠를 무단 복제, 전송, 배포 기타 저작권법에 위반되는 방법으로 이용할 경우
저작권법 제136조에 따라 5년 이하의 징역 또는 5천만 원 이하의 벌금에 처해질 수 있습니다.
제 14 조 (유료서비스)
① 당 사이트 및 협력기관이 정한 유료서비스(원문복사 등)는 별도로 정해진 바에 따르며, 변경사항은 시행 전에
당 사이트 홈페이지를 통하여 회원에게 공지합니다.
② 유료서비스를 이용하려는 회원은 정해진 요금체계에 따라 요금을 납부해야 합니다.
제 5 장 계약 해지 및 이용 제한
제 15 조 (계약 해지)
회원이 이용계약을 해지하고자 하는 때에는 [가입해지] 메뉴를 이용해 직접 해지해야 합니다.
제 16 조 (서비스 이용제한)
① 당 사이트는 회원이 서비스 이용내용에 있어서 본 약관 제 11조 내용을 위반하거나, 다음 각 호에 해당하는
경우 서비스 이용을 제한할 수 있습니다.
- 2년 이상 서비스를 이용한 적이 없는 경우
- 기타 정상적인 서비스 운영에 방해가 될 경우
② 상기 이용제한 규정에 따라 서비스를 이용하는 회원에게 서비스 이용에 대하여 별도 공지 없이 서비스 이용의
일시정지, 이용계약 해지 할 수 있습니다.
제 17 조 (전자우편주소 수집 금지)
회원은 전자우편주소 추출기 등을 이용하여 전자우편주소를 수집 또는 제3자에게 제공할 수 없습니다.
제 6 장 손해배상 및 기타사항
제 18 조 (손해배상)
당 사이트는 무료로 제공되는 서비스와 관련하여 회원에게 어떠한 손해가 발생하더라도 당 사이트가 고의 또는 과실로 인한 손해발생을 제외하고는 이에 대하여 책임을 부담하지 아니합니다.
제 19 조 (관할 법원)
서비스 이용으로 발생한 분쟁에 대해 소송이 제기되는 경우 민사 소송법상의 관할 법원에 제기합니다.
[부 칙]
1. (시행일) 이 약관은 2016년 9월 5일부터 적용되며, 종전 약관은 본 약관으로 대체되며, 개정된 약관의 적용일 이전 가입자도 개정된 약관의 적용을 받습니다.