Properites of Purified Ascorbate Oxidase in Chlamydomonas reinhardtii

Chlamydomonas reinhardtii 에서 정제한 Ascorbate Oxidase 의 특성

l o identil) ;~nclc li~iracterize; In iiscorhate oxiililinp enzyme in ('/rItrn~i~rlon~ir~c~t~itr~~lr.o\ r(1rii. we studicil ;is li)llows. Ascorh;ric oxiiliring cn/;jme activit) f ~ o ~thne crude extract 01' ( ' / ~ l o n ~ ~ . c l o t ~1~~oit~rl~1oin~/.t\ii W;I\ dctccietl by 5pecific active 5ta1ning through nati\e gel cletrophorcsi\ and ~iltra\~iolestp eciroscopy. Ascorb~ttco xidizing c n ~ y m ew i15 partilly 1~1rilieJ by \;~riousp roccclurcs inclucli~lga rnmoniu~ns uIl';~tcp recipit;iion. aJ\orption ~111-om;~togrophy on Iiy~lroxyapaiitca nd Scphailcx <;-I50 gel lillration chrornatogral>liy. Plie ~nolecularw eight 01' the nativc cnrytiic was ahour 88.000 tlalton hy nativc gel elcciroplloresis anci subunit niolecul;ir ~rciglit 55,000 ol' this cnrymc w;~c determined hy SIIS-P.ASI!. The optimum tcmper~tture ii)r the cnrymc nos ahout 5j$^{\circ}$C and pH 4.6 was the optimum. Moreover. ascorhaie oxi~losc in C: reinhardtii was confirmet1 by Ll1e\tcrn blotting technique.

생물체내의 ascorbic acid :dehydroascorbic acid system 을 조절하는데 관여하는 것으로 알려진 ascorbate 산화효소의 활성을 단세포 녹조류인 Chlamydomonas reinhardtii 에서 확인함으로써 이 효소의 존재와 특성을 고찰하였다. 조효소는 native gel 전기 영동에 의한 활성 염색과 분광광도계에 의한 ascorbic acid .의 흡광도 감소 측정에서 뚜렷한 활성을 나타내었다. 황산암모늄 침전, hydroxyapatite 흡착 크로마토그래피, 그리고 Sephadex G-150 gel 여과 크로마토그래피 분리한 결과 26.1 units/mg /의 specific activity 를 나타내었다. 분리된 ascorbate 산화효소는 $55^{\circ}C$, pH 4.6 에서 가장 활성도가 높았다. Native gel 전기 영동에서 88,000 dalton 갸량의 분자량을 가지고 있었고 소단위체의 분자량을 55,000 이었다. 또한 Western bloting technique 을 이용하여 C. reinhardtii 의 ascorbate oxidase를 확인하였다.