본 연구에서는 국내에서 분리된 곤충병원성 선충인 Steinernema carpocapsae종과 공생박테리아인 Xenorhabdus nematophilus종의 지방산을 분석하여 비교하였다. In vitro에서 수확된 곤충병원성 선충은 탄소 18개를 함유한 지방산이 가장 많은 것을 확인할 수 있었고, in vivo에서 수확된 곤충병원성 선충도 탄소 18개를 함유한 지방산이 가장 많은 것을 확인할 수 있었다. 하지만 그 다음으로 많은 지방산 성분이 in vitro에서 수확된 선충의 경우 탄소가 19개인데 비해 in vivo에서는 16개의 탄소를 가진 지방산인 것으로 나타나 차이점이 있는 것으로 확인되었다. 공생박테리아인 경우는 탄소의 수가 16개인 지방산이 가장 많이 함유된 것으로 나타났다.
곤충병원선충(Steinernema carpocapsae)을 이용한 지상부 가해 해충 방제는 자외선과 건조 등의 제약점 때문에 적용의 한계를 갖고 있다. 본 연구는 이를 극복하기 위한 방제 기술을 개발하는 데 목적을 두고, 기주의 지상부를 가해하는 두 나비목 해충인 파밤나방(Spodoptera exigua)과 담배거세미나방(Sp. litura)을 대상으로 실시하였다. 감염태 선충을 포함하는 알지닌캡슐은 이들 두 해충에 대해 뚜렷한 섭식독성을 보였다. 이러한 독성은 캡슐내에 함유되어 있는 감염태 선충의 밀도에 따라 증가하는 전형적인 양독곡선을 나타냈다. 캡슐내에 잔존하는 수분함량은 감염태 선충의 생존력에 가장 중요한 요인으로 작용했다. 캡슐내에 약 10%이상의 수분이 함유되었을 때 약 80%의 감염태 선충이 생존하였다. 캡슐내 보습 능력은 상대습도, 온도 및 캡슐의 크기에 따라 변동되나, 캡슐 형성 과정 중의 시트릭산 반응 시간과는 무관하였다. 알지닌캡슐이 15$^{\circ}C$ 증류수에 보관되었을 때, 60일 경과후에도 80%이상의 생존 능력을 보였다. 이러한 감염태 선충이 함유된 캡슐을 섭식유도제로서 사용된 파추출물을 함유시킨 후 야외 땅콩을 가해하는 파밤나방 3령충에 적용시켰을 때, 약 90%의 방제 효과를 나타냈다. 이러한 결과는 알지닌캡슐이 곤충병원선충의 저장 형태의 캡슐 용도 뿐만 아니라 지상부 해충 방제용 제제화로서 이용될 수 있다고 제시한다.
최근 곤충병원성 선충은 생물학적 살충제로서 크게 주목을 받고 있다. 이러한 곤충병원성 선충의 in vitro배양, 저장, 수송 과정에서는 낮은 용해도와 물질전달 문제 때문에 적절한 산소 공급이 매우 중요하다. 4종의 서로 다른 Steinernema 곤충병원선충에 대하여 5L 생물반응기를 이용하여 온도를 변화시키면서 산소요구도(OUR)들을 측정하였다. 13~17$^{\circ}C$범위에서는 모든 Steinernema종의 산소 요구도는 0.5$\times$${10}^{-3}$ mmolO$_2$/L.min 이하였다. S. glaseri Dongrae와 S. carpocapsae Pocheon의 경우 산소요구도(mmolO$_2$/L.min)는 21$^{\circ}C$에서는 각각 0.4$\times$${10}^{-2}$와 0.75$\times$${10}^{-2}$, $25^{\circ}C$에서는 $1.5\times$${10}^{-2}$와 3.2$\times$${10}^{-2}$, 29$^{\circ}C$에서는 2.8$\times$${10}^{-2}$와 5.8$\times$${10}^{-2}$였다. 그러나 50~150rpm의 교반속도에서는 산소 요구도의 변화가 그다지 크지 않았다. S. glaseri NC, S. glaseri Dongrae, S. glaseri Mungyeong 그리고 S. carpocapsae Pocheon종의 비산소 요구도(${qo}_{2}$)는 $25^{\circ}C$에서 각각 0.3$\times$${10}^{-8}$, 0.5$\times$${10}^{-9}$, 0.3$\times$${10}^{-9}$, 그리고 0.2$\times$${10}^{-9}$mmolO$_2$/cell.min였다. 곤충병원성 선충의 크기와 온도가 증가됨에 따라 ${qo}_{2}$ 또한 증가하였다.
우리나라산 곤충병원성 선충(Heterorhabditis sp. Gyeongsan, Steinernema carpocapsae GSN1, S. glaseri Dongrae, S. longicaudum Nonsan, S. monticolum Jiri)을 이용한 잔디밤나방(Spodotera depravata)의 환경 친화적 방제 가능성을 알아보기 위하여 실내와 야외에서 실험을 수행하였다. 아울러 잔디의 예고가 곤충병원성 선충의 효과에 미치는 영향과 야외에서 곤충병원성 선충의 처리가 잔디밭에 분포하고 있는 개미와 집게벌레의 밀도 변화에 미치는 영향도 조사하였다. 잔디밤나방 3령충은 곤충병원성 선충에 대하여 처리 5일째 53.3%에서 66.7%의 보정사충율을 나타내었다. S. carpocapsae GSN1과 S. monticolum Jiri의 잔디밤나방 3령충에 대한 반수치사농도 (LC$_{50}$)는 6.9와 3.9마리였다. S. carpocapsae GSN1의 병원성은 잔디밤나방의 령기에 따라 차이가 있어 2령충에서 73.3%로 가장 높았으며, 3령충부터 감소하였다. 예고는 곤충병원성 선충의 병원성에 영향을 미쳤다. 들잔디의 예고가 14mm인 pot에서 4령충의 치사율은 S. carpocapsae GSN1 처리가 40.0%였고, S. monticolum Jiri처리는 33.3%였으며 fenitrothion은 83.3%의 치사율을 나타내었으나 45mm구에서는 모두 낮았다. 곰개미(Formica japonica) 분포지에서 선충처리구의 보정사충율은 fenitrothion 처리구에 비하여 낮았으나, 개미의 감소율은 fenitrothion구에서 56.7%로 높았고, S. carpocapsae GSN1 처리구와 S. monticolum Jiri 처리구에서는 각각 0%, 6.7%로 낮았다. 잔디의 예고는 S. carpocapsae GSN1과 fenitrothion의 효과에 영향을 미쳤다. S. carpocapsae GSN1은 3-4cm 예고구에서는 62.2%의 방제효과를 나타내였으나, 6-8cm와 12-14cm의 예고구에서는 전혀 효과가 없었다. 그러나 fenitrothion 처리구에서는 유의적 차이가 없었다. 못뽑기집게벌레(Forficula scudderi)의 밀도도 fenitrothion 처리구에서만 감소를 보였다. 즉, 3-4cm 예고구에서는 100%의 감소율을 보였고, 6-8cm 구에서는 41.7%, 12-14cm 구에서는 16.1%의 감소율을 나타내었다.
Hang Dao Thi;Choo, Ho-Yul;Lee, Dong-Woon;Lee, Sang-Myeong;Kaya Harry K.;Park, Chung-Gyoo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제17권3호
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pp.420-427
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2007
We investigated the temperature effects on the virulence, development, reproduction, and otility of two Korean isolates of entomopathogenic nematodes, Steinernema glaseri Dongrae strain and S. longicaudum Nonsan strain. In addition, we studied the growth and virulence of their respective symbiotic bacterium, Xenorhabdus poinarii for S. glaseri and Xenorhabdus sp. for S. longicaudum, in an insect host at different temperatures. Insects infected with the nematode-bacterium complex or the symbiotic bacterium was placed at $13^{\circ}C,\;18^{\circ}C,\;24^{\circ}C,\;30^{\circ}C,\;or\;35^{\circ}C$ in the dark and the various parameters were monitored. Both nematode species caused mortality at all temperatures tested, with higher mortalities occurring at temperatures between $24^{\circ}C\;and\;30^{\circ}C$. However, S. longicaudum was better adapted to cold temperatures and caused higher mortality at $18^{\circ}C$ than S. glaseri. Both nematode species developed to adult at all temperatures, but no progeny production occurred at $13^{\circ}C\;or\;35^{\circ}C$. For S. glaseri, nematode progeny production was best at inocula levels above 20 infective juveniles/host at $24^{\circ}C\;and\;30^{\circ}C$, but for S. longicaudum, progeny production was generally better at $24^{\circ}C$. Steinernema glaseri showed the greatest motility at $30^{\circ}C$, whereas S. longicaudum showed good motility at $24^{\circ}C\;and\;30^{\circ}C$. Both bacterial species grew at all tested temperatures, but Xenorhabdus sp. was more virulent at low temperatures $(13^{\circ}C\;and\;18^{\circ}C)$ than X. poinarii.
Entomopathogenic nematodes (EPNs) have been used as biological control agents for control of various agro-forest insect pests, and are especially effective against soil-dwelling insect pests. Effect of soil moisture on pathogenicity of commercial EPNs for white grub control was evaluated in laboratory, pots, and golf courses. Pathogenicity of EPNs in sand column was variable depending on depth, soil moisture, and EPN species or strain. All tested EPNs (Heterorhabditis sp. GSNUH1, Heterorhabditis sp. GSNUH2, Steinernema carpocapsae GSN1, and S. longicaudum Nonsan strain) showed similar pathogenicity against the bait insect, great wax moth (Galleria mellonella) larva at 2 cm deep at a given soil moisture. However, pathogenicity of the Heterorhabditis sp. GSNUH1 strain was decreased with increasing soil moisture. Pathogenicity of S. carpocapsae GSN1 strain was the lowest in 3% soil moisture (v/w) at 7 cm depth. However, there was no difference in pathogenicity between Heterorhabditis sp. GSNUH2 and S. longicaudum Nonsan strain. Although pathogenicity of Heterorhabditis sp. KCTC 0991BP strain showed no difference against the 2nd instar of Exomala orientalis, that of the S. carpocapsae GSN1 strain was decreased in the laboratory depending on soil moisture. Highly pathogenic strain EPN, Heterorhabditis sp. KCTC 0991BP strain, showed higher pathogenicity at 100 mm irrigation than non-irrigation or 10 mm irrigation. However, poor pathogenic strain EPN, S. carpocapsae GSN1 strain, was not different in pathogenicity from the 2nd instar of Exomala orientalis in creeping bentgrass (Agrostis palustris) depending on irrigation amount in the pot. Pathogenicity of EPNs in field experiment at the tee of Ulsan golf club showed a similar trend to that in the pot experiment.
긴수염버섯파리 (Lycoriella mali)에 대한 곤충병원성 선충 Steinernema carpocapsae 포천계통과 Heterorhabditis bacteriophora함양 계통의 병원성을 실내와 포장에서 실험하였다. 곤충병 원성 선충에 의한 긴수염버섯파리의 치사율은 선충의 종, 농도, 온도 및 긴수염버섯파리의 발육단 계에 따라 차이가 있었다. S. carpocapsae가 H. bacteriophora보다, 긴수염버섯파리 2령충보다는 3령충과 4령충에서 효과가 높았다. 그리고 온도에 따른 긴수염버섯파리의 치사율은 $20^{\circ}C$보다는 $25^{\circ}C$에서 높았다. 반수치사농도가 가장 낮았던 값은 $25^{\circ}C$에서 S. carpocapsae의 긴수염버섯파리 2령 충에서 20.0마리, 3령충에서 27.5마리였다. S. carpocapsae에 의한 긴수염버섯파리의 치사율은 알과 1령충을 제외한 전 발육단계에서 병원성이 높았으며, 가장 치사율이 높았던 것은 암컷 성충으로 2$0^{\circ}C$에서 74.0%, $25^{\circ}C$에서 80.0%였다. S. carpocapsae는 긴수염버섯파리 암컷의 산란수를 감소시 켰고, 긴수염버섯파리의 성충에 의하여 감염이 된 후 전파가 되었다. 포장실험에서 S. carpocapsae를 $1.5\;\textrm{m}^2$ 당$2.25{\times}10^{5}마리와\;4.5{\times}10^{5}$ 마리로 처리한 14일째 유충감소율은 42.2%와 81.6%였으며 ,버섯재배사에서 곤충병원성 선충은 14일까지 지속되고 있었다. 곤충병원성 선충은 느타리버섯의 생장에는 아무런 영향을 미치지 않았다
Lysis of erythrocytes isolated from human, rabbit, and mouse blood samples was investigated with the culture supernatant of Xenorhabdus nematophilus in a primary form. Prior to use, the culture supernatant of the bacteria was concentrated and the concentrate was dialyzed against Tris-HCl buffer (10 mM, pH 8.1) by ultrafiltration using PM-5 membrane with a molecular weight cut-off of 5,000. At $30^{\circ}C$, the supernatant exhibited no lytic activity towards three types of erythrocytes. However, at $4^{\circ}C$, the supernatant showed selective lytic activity towards rabbit erythrocytes within 90 min. yet did not lyze human or mouse erythrocytes. Microscopic examination clearly revealed that most of the rabbit erythrocytes had been fumed into ghost forms.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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