Objectives: Whether the ultra-highly-diluted remedies used in homeopathy can effectively bring about modulations of gene expressions through acetylation/deacetylation of histones has not been explored. Therefore, in this study, we pointedly checked if the homeopathically-diluted anti-cancer remedy Condurango 30C (ethanolic extract of Gonolobus condurango diluted $10^{-60}$ times) was capable of arresting the cell cycles in cervical cancer cells HeLa by triggering an epigenetic modification through modulation of the activity of the key enzyme histone deacetylase 2 vis-a-vis the succussed alcohol (placebo) control. Methods: We checked the activity of different signal proteins (like $p21^{WAF}$, p53, Akt, STAT3) related to deacetylation, cell growth and differentiation by western blotting and analyzed cell-cycle arrest, if any, by fluorescence activated cell sorting. After viability assays had been performed with Condurango 30C and with a placebo, the activities of histone de-acetylase (HDAC) enzymes 1 and 2 were measured colorimetrically. Results: While Condurango 30C induced cytotoxicity in HeLa cells in vitro and reduced HDAC2 activity quite strikingly, it apparently did not alter the HDAC1 enzyme; the placebo had no or negligible cytotoxicity against HeLa cells and could not alter either the HDAC 1 or 2 activity. Data on $p21^{WAF}$, p53, Akt, and STAT3 activities and a cell-cycle analysis revealed a reduction in DNA synthesis and G1-phase cell-cycle arrest when Condurango 30C was used at a 2% dose. Conclusion: Condurango 30C appeared to trigger key epigenetic events of gene modulation in effectively combating cancer cells, which the placebo was unable to do.
본 연구는 약용 및 식용 식물로 사용되고 있는 쑥부쟁이 추출물과 분획물의 암세포 증식 억제 효과와 QR유도 효과를 실험하였다. 쑥부쟁이의 metanol 추출 및 용매 분획물의 암세포 증식억제 효과를 MTT assay로 실험한 결과, 3종의 인체 암세포주, 간암세포주인 HepG2, 자궁경부암 세포주인 HeLa 및 유방암 세포주인 MCF-7에서 모두 쑥부쟁이의 ethyl ether 분획층인 AYMEE층과 ethyl acetate 분획층인 AVMEA층에서 암세포 성장 저지 효과가 제일 컸다. 특히 HepG2 세포주에서 는 AYMEE를 200 $\mu$g/mL 첨가시켰을 때 94.5%의 암세포 증식 억제 효과가 나타났으며, 농도를 증가시킬수록 그 효과가 커져 500 $\mu$g/mL에서는 97.7%의 저지 효과를 보였다. MCF-7 세포주와 HeLa 세포주에서도 이와 비슷한 경향이었다. Butanol층인 AYMB와 메탄올층인 AYM에서는 대체적으로 낮은 농도에서는 효과가 약하였으나 300 $\mu$g/mL 이상에서는 높은 암세포 성장저지 효과를 보였다. HepG2 세포를 이용하여 암예방 지수인 QR 유도 활성을 측정한 결과, 다른 분획층에 비해 비극성 용매층인 hexane 분획층, AYMH에서 QR 유도 활성을 증가시키는 경향이었다.
In this study, antibacterial activity and cytotoxicity of the extracts from pericarp and seed of $Vitis$$coignetiea$, which were extracted with 0.1% HCl-60% ethanol, were analyzed. The antibacterial activity of the extracts was determined by paper disc diffusion method against food spoilage and food-borne pathogens. The pericarp extract showed high antibacterial activity against $Bacillus$$cereus$, $Escherichia$$coli$ O157:H7, and $Pseudomonas$$aeruginosa$, and the seed extract represented the high antibacterial activity against $B.$$cereus$, $E.$$coli$ O157:H7, and $Staphylococcus$$aureus$. The cytotoxicity of the $Vitis$$coignetiea$ extract against human cancer cells was determined using the MTT assay and SRB assay. The pericarp extract represented strong growth-inhibition activity against G361 and Hep3B cells and the seed extract greatly inhibited the growth of HeLa and G361 cells in the MTT assay. In addition, the pericarp extract displayed a high inhibition activity against the growth of AGS cells and the seed extract greatly inhibited the growth of HeLa, Hep3B, and MCF7 cells in the SRB assay. Especially, the cytotoxicities of the seed extract against HeLa were significantly higher than those of the extract against other cancer cells at all test concentrations. This study demonstrates that the extract from pericarp and seed of $Vitis$$coignetiea$ possess high antibacterial activity and cytotoxicity.
Stress granules (SGs) are cytoplasmic aggregates of RNA-protein complexes that form in response to various cellular stresses and are known to restrict viral access to host translational machinery. However, the underlying molecular mechanisms of SGs during viral infections require further exploration. In this study, we evaluated the effect of SG formation on cellular responses to coxsackievirus B3 (CVB3) infection. Sodium arsenite (AS)-mediated SG formation suppressed cell death induced by tumor necrosis factor-alpha (TNF-a)/cycloheximide (CHX) treatment in HeLa cells, during which G3BP1, an essential SG component, contributed to the modulation of apoptosis pathways. SG formation in response to AS treatment blocked CVB3-mediated cell death, possibly via the reduction of mitochondrial reactive oxygen species. Furthermore, we examined whether AS treatment would affect small extracellular vesicle (sEV) formation and secretion during CVB3 infection and modulate human monocytic cell (THP-1) response. CVB3-enriched sEVs isolated from HeLa cells were able to infect and replicate THP-1 cells without causing cytotoxicity. Interestingly, sEVs from AS-treated HeLa cells inhibited CVB3 replication in THP-1 cells. These findings suggest that SG formation during CVB3 infection modulates cellular response by inhibiting the release of CVB3-enriched sEVs.
Objectives: Condurango (Gonolobus condurango) extract is used by complementary and alternative medicine (CAM) practitioners as a traditional medicine, including homeopathy, mainly for the treatment of syphilis. Condurango bark extract is also known to reduce tumor volume, but the underlying molecular mechanisms still remain unclear. Methods: Using a cervical cancer cell line (HeLa) as our model, the molecular events behind condurango extract's (CE's) anticancer effect were investigated by using flow cytometry, immunoblotting and reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). Other included cell types were prostate cancer cells (PC3), transformed liver cells (WRL-68), and peripheral blood mononuclear cells (PBMCs). Results: Condurango extract (CE) was found to be cytotoxic against target cells, and this was significantly deactivated in the presence of N-acetyl cysteine (NAC), a scavenger of reactive oxygen species (ROS), suggesting that its action could be mediated through ROS generation. CE caused an increase in the HeLa cell population containing deoxyribonucleic acid (DNA) damage at the G zero/Growth 1 (G0/G1) stage. Further, CE increased the tumor necrosis factor alpha ($TNF-{\alpha}$) and the fas receptor (FasR) levels both at the ribonucleic acid (RNA) and the protein levels, indicating that CE might have a cytotoxic mechanism of action. CE also triggered a sharp decrease in the expression of nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells ($NF-{\kappa}B$) both at the RNA and the protein levels, a possible route to attenuation of B-cell lymphoma 2 (Bcl-2), and caused an opening of the mitochondrial membrane's permeability transition (MPT) pores, thus enhancing caspase activities. Conclusion: Overall, our results suggest possible pathways for CE mediated cytotoxicity in model cancer cells.
When SiHa cells were incubated for varying periods of time with extracts of PFF and PFM, the cytotoxicity of the ethanol extracts of PFF was higher than those of the other extracts. These results indicated that the extracts from fruiting bodies of p. ferulae contain antitumor Substances. When A549, SiHa and HeLa cells were incubated with different concentrations of PFF and PFM extracts, the ethanol extracts of PFF showed strong cytotoxicity against A549 tells at concentrations over $10{\mu}g/mL$ and against SiHa and HeLa cells at concentrations over $40{\mu}g/mL$. However, the differences in the cytotoxic effects of the hot water and ethanol extracts of PFM and the hot water extracts of PFF on all 3 cancer cells were not significant. Also, the PFF ethanol extracts induced synergistic effects on the TRAIL-induced apoptosis in A549 cells, which were strongly resistant to TRAIL. These results indicated that ethanol extracts of PFF were the most prominent antitumor agents toward lung cancer cells (A549).
중국에서 약용 및 음용식물로 사용되고 있는 여주 (Mo-mordica charantia L.)를 이용하여 추출, 분획한 후 항균, 항암 및 암예방 효과를 살펴보았다 여주의 MCU층을 제외한 모든 층에서 항균력을 보였으며 특히 Staphylococru aureus의 MCMEE층에서 가장 높은 항균활성을 나타내었다 실험에 사용한 각균에 대한 여주 분획물의 암세포 증식 억제 효과를 MTT assay로 실험한 결과, 3종의 인체 암세포 HepG2, HeLa 및 MCF극에서 모두 여주의 ethyleth-er 분획층인 MCMEE와 ethylacetate 분획층인 MCMEA 층에서 아주 높은 암세포 증식억제 효과를 나타내었다. HepG2세포를 이용하여 암예방 QR 유도 활성을 측정한 결과, 다른 분회층에 비해 비극성 용매층인 hexane 분획층 MCMH에서 아주 높은 QR 유도를 활성시키는 것으로 나타났다. 본 실험 결과, 여주에는 식품 보존과 항균제로서의 개발가능성이 보이며. 항발암 효과를 보기위한 암세포 증식 억제 효과는 ethylether층 MCMEE과 ethylacetate층 MCMEA층에서 월등하였고, 비극성 용매층인 hexane 분획층에는 암발생을 예방하는 quinone reductase inducer가 있는 것으로 사료되며. 나아가 단계적인 생리활성 연구의 분리 동정이 계속 이루어져야 할 것으로 사료된다.
The study on cytotoxicities of domestic antitumour crude drugs were carried out in order to evaluate the antitumour activity. The eleven crude drugs were studied in this paper. No cytotoxicities were observed both at 0.1ml of water extracts and alcohol extracts deuted against monkey kidney cell and HeLa-cell after 3 days cultivation at $37^{\circ}C$. The sample shown the heavy cytotoxicities against monkey kidney cell at 0.3ml alcohol extracts diluted sample solution are Lonicerae Flos and Puchrestae Radix.
인삼(Panax. ginseng) 열매를 80% MeOH 수용액으로 3회 반복 추출한 뒤, 감압 농축한 추출물을 EtOAc, n-BuOH과 $H_2O$ 층으로 계통 분획을 실시하였다. EtOAc분획에 대하여 $SiO_2$ 및 ODS column chromatography를 반복실시하여 5종의 ginsenoside 화합물을 분리 및 정제하였다. NMR, IR, FAB/MS 데이터를 해석하여, 각각 ginsenoside F1 (1), ginsenoside F2 (2), ginsenpside F3 (3), ginsenoside Ia (4) 및 notoginsenoside Fe (5)로 구조 동정 하였다. 화합물 2-5는 인삼열매에서는 이번에 처음 분리 보고되었다. 분리한 5종의 화합물을 인체 암세포주(HCT-116, SK-OV-3, HeLa, HepG2, SK-MEL-5)에 처리하여 세포독성을 측정하였다. 이 중 화합물 2, 4, 및 5가 인체 암세포주에 대해 세포독성을 저해시키는 것을 알 수 있었다. 화합물 2는 SK-MEL-5, HepG2, HeLa세포에서 $IC_{50}$값이 82.8, 86.8, $78.3{\mu}M$로 확인되었다. 화합물 4는 HCT-116, SK-MEL-5, SK-OV-3, HepG2, HeLa 세포에서 $IC_{50}$ 값이 24.5, 25.4, 26.3, 22.0, $24.9{\mu}M$로 확인되었다. 화합물 5는 SK-MEL-5 세포에서 $IC_{50}$ 값이 $81.7{\mu}M$로 확인되었다. 인삼 열매에서 분리한 화합물2, 4, 및 5가 암세포주에 대해 강한 세포독성을 나타내는 것을 확인하였으며, 이 화합물들은 공통적으로 3번 수산기에 glucopyranose를 가지고 있음을 확인하였다.
Verapamil은 항암제에 대한 내성을 극복하기 위하여 실험적으로 사용하는 대표적인 약제로 알려져 있다 본 연구에서는 부인과 종양중 자궁경부암 치료시에 발생하는 항암 화학요법제에 대한 내성을 극복하기 위한 기초적인 실험으로 인체 자궁경부암 유래의 HeLa 및 Caski 세포주를 이용, MTT법으로 verapamil과 5-FU 및 DDP를 단독 혹은 병용 처리하여 세포독성 상승효과를 측정하였다. Verapamil 단독투여시 각 세포주는 용량에 비례하여 세포독성이 증가하였으며, 각 항암제와의 병용 투여시에 세포독성의 상승효과가 관찰이 되었으며, HeLa세포주에서 그 효과가 가장 높았다. 이러한 결과를 바탕으로 세포내 내성발현의 기전의 탐구가 필요하며 자궁경부암 화학요법에 verapamil사용의 이론적인 가능성을 제시하고 있다
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[게시일 2004년 10월 1일]
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