Cucumber mosaic cucumovirus (CMV) is an isometric plant virus with functionally divided genomic RNAs and a broad host range. RNA 1 and RNA 2 each encode one protein, both of which are essential for replication. RNA 3 encodes the viral coat protein and an additional protein thought to be involved in potentiating the cell-to-cell movement of the virus. Functions of the RNAs have been confirmed using a pseudorecombinant virus constructed with infectious cDNA-derived transcripts of the RNAs. Generally, CMV produces different symptoms in various host plants depending on the virus strains. In this mini-review, we describe the potential role of the genes associated with symptom expression of CMV RNAs.
The transcription factor SHE1 was identified as an interacting partner with the cucumber mosaic virus (CMV) 1a protein in the yeast two-hybrid system, by a pull-down assay, and via bimolecular fluorescent complementation. Using fluorescent-tagged proteins and confocal microscopy, the CMV 1a protein itself was found distributed predominantly between the nucleus and the tonoplast membrane, although it was also found in speckles in the cytoplasm. The SHE1 protein was localized in the nucleus, but in the presence of the CMV 1a protein was partitioned between the nucleus and the tonoplast membrane. SHE1 expression was induced by infection of tobacco with four tested viruses: CMV, tobacco mosaic virus, potato virus X and potato virus Y. Transgenic tobacco expressing the CMV 1a protein showed constitutive expression of SHE1, indicating that the CMV 1a protein may be responsible for its induction. However, previously, such plants also were shown to have less resistance to local and systemic movement of tobacco mosaic virus (TMV) expressing the green fluorescent protein, suggesting that the CMV 1a protein may act to prevent the function of the SHE1 protein. SHE1 is a member of the AP2/ERF class of transcription factors and is conserved in sequence in several Nicotiana species, although two clades of SHE1 could be discerned, including both different Nicotiana species and cultivars of tobacco, varying by the presence of particular insertions or deletions.
The coat protein (CP) gene of cucumber mosaic virus-As (CMV-As) strain was engineered for expression in the plant by using the cauliflower mosaic virus 35S transcript regulatory sequences. The CP gene was cloned into an Agrobacterium-derived binary vector. A chimeric gene was constructed by the cDNA of CMV-As CP and plant expression vector pBI121. The clone, pCMAS66, was first introduced into the phagemid vector pSPORT1 for situating sense orientation for translation and making restriction sites in order to re-introduce plant expression vector, pHI121. The resulting subclone pCASCP02 and plant expression vector pBI121 were treated with BamHI-SacI for excising the target gene and removing GUS gene, respectively. After Agrobacterium transformation by freeze-thaw technique, the clone, pCMASCP121-123 which contains sense orientation of the target gene, was selected and confirmed by restriction endonuclease analysis. The CMV-As CP gene was introduced into A. tumefaciens. The results on tobacco plant transformation with the vector system revealed that the system could be successfully introduced and showed high frequency of selection to putative transformations.
In August 2006, a severe disease incidence showing mosaic and/or necrotic symptoms on two bell pepper varieties including red-colored 'Special' and yellow-colored 'Fiesta' was observed in a greenhouse located in Gwangyang, Jeonnam province, Korea. To identify causal viruses, total RNAs were extracted from 11 fruit samples with and without symptoms. Specific oligonucleotide primers for Cucumber mosaic virus (CMV), Pepper mottle virus (PepMoV), Tomato spotted wilt virus (TSWV) and Pepper mild mottle virus (PMMoV) were designed based on the sequences available on GenBank. Database comparisons of the deduced amino acid sequences of each sequence produced 100% and 98% matches with nucleocapsid protein gene of TSWV (Acc. No. ABE11605) and coat protein gene of CMV (Acc. No. DQ018289), respectively, suggesting that the symptoms on bell pepper fruits might be caused by the infection of CMV and TSWV. To our knowledge this is the first report of necrotic as well as mosaic virus disease on bell pepper fruits by the infection of CMV and TSWV in Jeonnam province, Korea.
Proceedings of the Korean Society of Plant Pathology Conference
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2003.10a
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pp.137.1-137
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2003
A pepper strain of Cucumber mosaic virus (Pf-CMV) induces a mild chlorotic spot symptom in zucchini squash at 9 days post-inoculation (dpi), wile Fny strain of CMV causes severe mosaic and stunting symptom at 4 dpi in this host. Pseudorecombinants were constructed between the two strains, and assessments of symptom severity were indicated that both RNA2 and RNA3 were responsible for both mildness and the slow appearance of symptom elicited by Pf-CMV in zucchini squash. With various RNA2 and RNA3 chimeras between two strains of CMV, the genetic symptom determinants of phenotype of Pf-CMV were mapped to Tyr residue at positions amino acid 267 in 2a protein and at positions amino acid 168 in 3a movement protein (MP). Chimeras changed the sequences (both changed Tyr to lie) in the codons of both amino acid 168 of 3a MP and amino acid 267 of 2a protein were resulted in the high RNA accumulation, severity of symptom, and the rapid systemic spread, suggesting that 2a replicase as well as MP is involved in virus movement. The RNA accumulation pattern of all pseudorecombinants and chimeras are identical in protoplast of zucchini squash, indicating the virus movement is responsible for the phenotypes of two CMV strains rather than virus replication.
We isolated the Cucumber green mottle mosaic virus(CGMMV) particles from watermelon leaves and designated as CGMMV-HY1 as a watermelon isolate and attempted to characterize the pathogenic isolate responsible for such an epidemic in watermelon and also to monitor dominant viral isolates in greenhouse. The watermelon plants infected with CGMMV generally showed mottle mosaic, mosaic, growth stunting, necrosis and deformed fruit. The reactions of indicator plants to CGMMV-HY1 were the local lesions on Nicotiana tabacum cv. White Burley, Nicotiana tabacum cv. Samsun, and Chenopodium amaranticola, and the mosaic symptoms only on Cucumis sativus, but the CGMMV-HY1 did not infect Nicotiana sylvesytis, Datura stramonium, Chenopodium quinoa, and Petunia hybrida. Purified virus particles were rod-shaped and about 300 nm long. The coat protein (CP) of purified CGMMV-HY1 was single band with molecular weight of about 16.5 kDa which was confirmed by western blot analysis probed with monoclonal antibody of CGMMV-HY1. The genomic and subgenomic RNAs of 6.4 kb and 0.75 kb were revealed by the electrophoresis on 1.2% formaldehydedenatured agarose gel. Viral and complementary CGMMV-specific primer sets were designed for spanning the genome using previously reported CGMMV sequences. A 464bp of CP gene of CGMMV-HY1 was amplified by RT-PCR and cloned into PGEM-T easy vector. The nucleotide sequence of CP gene of CGMMV-HY1 shared 98%, 99%, and 100% identities with that of CGMMV strains W, KOM, and KW respectively. Based on these results, we identified CGMMV-HY1 as a CGMMV isolate of watermelon, a member of Tobamovirus.
A Cucumber mosaic virus (named CMV-Tr1) isolated from the white clover (Trifolium repens) showing mosaic and malformation that found in a pepper field. Cucumber mosaic virus was identified through confirmation with PT-PCR, PCR-restriction fragment length polymorphism, and sequence analysis of coat protein (CP) gene. CMV-Tr1 mosaic symptom on the upper leaves of five tobacco species including Nicotiana benthamiana, Cucumis sativus, Physalis angulata, and Solanum lycopersicon. In Chenopodium quinoa and Vigna unguiculata the isolate showed local lesions in inoculated leaves. CMV-Tr1 compared with CMV-As in the sequence identity of CP gene. CMV-Tr1 showed 98.9% and 99.5% homologies at nucleotide and amino acid levels, respectively. Phylogenetic analysis of the CP gene indicated that CMV-Tr1 belongs to the CMV subgroup IB base on the CP. To our knowledge, this is the first report of CMV in T. repens in Korea.
A virus causing stunt, yellowing, severe mosaic, malformation symptoms on leaves and uneven development and malformation on fruits of zucchini was prevalent around Goseong, Gyeongsangnam-do, Korea. A survey conducted (2004) in the Goseong area revealed about 20% virus infection rate. The disease causative identified as Cucumber mosaic virus (CMV-Z1) was further characterized. The isolate induces mosaic symptoms on Cucumis sativus, while severe mosaic, stunt and malformation on C. pepo. Thin section analyses have shown that virus inclusions are formed in the cuticle layers as well as epidermal, parenchyma and collenchymas cells in virus-infected Nicotiana tabacum. CMV-Z1 isolate induced specific cytoplasmic inclusion bodies such as irregular clumps (IC), crystal (Cr) and irregular chloroplasts (ICh). IC was made up of virus particles interspersed with a darkly stained amorphous material and found both in the cytoplasm and vacuoles, whereas ICh and Cr were rarely found in the vacuoles. The genome of CMV-Z1 RNA-1 consists of 3359 nucleotide (nt) encoding 1a protein of 993 amino acids (aa). The CMV-Z1 RNA-2 was 3050 nt in length containing 2a (857 aa) and 2b (110 aa), while RNA-3 encoding 3a movement protein (279 aa) and coat protein (218 aa) was 2215 nt in length. Phylogenetic analyses of nucleotide sequences of CMV-Z1 isolate appeared it is more closely related to subgroup IA than to subgroup IB or II.
Cucumber mosaic virus (CMV) leads to a cause of poor crop productivity and quality. To solve this problem, we attempted to develop a virus-resistance tobacco plants by using viral coat protein (CP) gene. Transgenic tobacco plants expressing CMV CP gene were analysed by the resistance upon CMV infection. The virus-resistance was measured in $\textrm{T}_{1}$, generation by the inhibition of plant growth and the expression of the mosaic symptoms infected with CMV. The transgenic lines were divided into four groups: highly resistant, resistant, moderate and susceptible based on their growth and symptom severity. Out of 39 transgenic lines, 16 lines showed significant virus-resistance. And of resistant lines, 2 lines were designated highly resistant based on the facts that they achieved similar plant height to that of non-infected tobacco plants and showed lower disease symptom than that of other lines. The steady state level of CP RNA and coat protein level were measured by northern blot and immunoblot analysis. The CP RNA was highly accumulated in most resistant and moderate lines but barely detected in susceptible lines. The coat protein was detected in most lines regardless of their resistance to CMV. from this result, virus-resistance appeared to correlate more with CP RNA level than the level of coat protein. However, in two highly resistant lines, CP RNA level was unexpectedly low. This unexpected phenomenon need to be further investigated.
Three isolates of Cucumber mosaic virus (CMV) from lily plants showing mosaic and distortion symptoms were detected by reverse-transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) using primers specific to Cucumovirus genus namely, LK-CMV, LK4-CMV, and LKS-CMV. Restriction enzymes patterns of the RT-PCR products revealed that the lily isolates belonged to subgroup IA of CMV. In terms of biological properties, the lily isolates have highly similar but distinct pathogenicity as reported in other lily strains and ordinary strains of CMV. To characterize the molecular properties, cDNAs containing coat protein (CP) gene and 3' non-coding region (NCR) of RNA3 for the isolates were cloned and their nucleotide sequences were determined. The CP similarity (218 amino acids) was highly homologous (>97%) with that of subgroup I CMV strains. However, an additional 20-nulcleotide long segment was only present in 3' NCR of lily isolates, which form an additional stem-loop RNA structure. By using chimeric construct exchange cDNA containing 3'NCR of LK-CMV into the full-length cDNA clone of RNA3 of Fny-CMV, this additional segment may prove to be significant in the identification and fitness of the virus in lily plants. The pathology of zucchini squash infected by F1F2L3-CMV, a pseudorecombinant virus was showed to change drastically the severe mosaic and stunting symptom into a mild chlorotic spot on systemic leave, compared with Fny-CMV. To delimit the sequence of RNA3 affected the pathology, various RNA3 chimeras were constructed between two strains of CMV. The symptom determinants of F1F2L3-CMV were mapped to the positions amino acid 234, 239, and 250 in 3a movement protein (MP). RNA3 chimeras changed the sequences encoding three amino acids were resulted in alteration of systemic symptom.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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