Tylenchulus semipenetrans is an important and widespread plant-parasitic nematode of citrus worldwide and can cause citrus slow decline disease leading to significant reduction in tree growth and yield. Rapid and accurate detection of T. semipenetrans in soil is important for the disease forecasting and management. In this study, a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay was developed to detect T. semipenetrans using DNA extracted from soil. A set of five primers was designed from the internal transcribed spacer region (ITS1) of rDNA, and was highly specific to T. semipenetrans. The LAMP reaction was performed at $63^{\circ}C$ for 60 min. The LAMP product was visualized directly in one reaction tube by adding SYBR Green I. The detection limit of the LAMP assay was $10^{-2}J2/0.5g$ of soil, which was 10 times more sensitive than conventional PCR ($10^{-1}J2/0.5g$ of soil). Examination of 24 field soil samples revealed that the LAMP assay was applicable to a range of soils infested naturally with T. semipenetrans, and the total assay time was less than 2.5 h. These results indicated that the developed LAMP assay is a simple, rapid, sensitive, specific and accurate technique for detection of T. semipenetrans in field soil, and contributes to the effective management of citrus slow decline disease.
Phytophthora-induced diseases on citrus in Jeju island have been considered of minor importance because of the use as root stock of trifoliate orange, which is immune to Phytophthora. However, brown rot on fruit, which severely occurred in 1998 and 1999, has become a great threat to citrus production in the island. About one-half of the surveyed orchards were infected in 1998 and 4 out of 19 infected fields showed over 20% fruit infection rate. The disease was less severe in 1999, with an estimated infected area and total fruit reduction of 3,155 ha and 15,300 tons, respectively. Typical gummosis was also occasionally observed on cv. Shiranugi, which is mostly cultivated under plastic film houses. Two types of Phytophthora were consistently isolated from various plant parts, identified as P. citrophthora and P. nicotianae. The former was isolated from the aerial parts of the fruit, young leaf, and shoot in the fields. Meanwhile, the latter was only isolated from the basal stem showing gummosis in plastic film houses.
Zar Zar Soe;Yong Ho Shin;Hyun Su Kang;Mi Jin Kim;Yong Chull Jeun
식물병연구
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제29권2호
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pp.130-136
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2023
Citrus melanoses caused by Diaporthe citri, has been one of the serious diseases in many citrus orchards of Jeju Island. To protect melanose in citrus farms, a fast and exact diagnosis method is necessary. In this study, diseased leaves and dieback twigs were collected from a total of 49 farms within March to April in 2022. A total of 465 fungal isolates were obtained from a total of 358 isolated plant samples. Among these fungal isolates, 40 representatives of D. citri isolates which were isolated from 22 twigs and 18 leaves on 23 farms were found based on cultural characteristics on potato dextrose agar and conidial morphology. Additionally, the molecular assay was carried out and compared with those by morphological diagnosis. All isolates were identified as D. citri by analyzing the sequences at the internal transcribed spacer (ITS) rDNA region using primers of ITS1/ITS4 or at β-tubulin using primer Btdcitri-F/R. Therefore, based on the present study, where the results of morphological identification of conidial type were consistent with DNA sequence analysis of certain gene, choosing a suitable method for a fast diagnosis of citrus melanose was suggested.
본 연구는 citrus에 심각한 피해를 초래하는 바이러스인 ICRSV가 국내로 유입되는 것을 차단하여 그로 인한 피해를 방지하기 위해 이를 진단하는 시스템을 구축하고자 하였다. ICRSV가 감염된 시료를 구할 수 없어 외피단백질 유전자를 E. coli의 codon usage를 고려하여 optimization한 뒤 E. coli에서 수용성 단백질로 과발현된 재조합 ICRSV 외피단백질을 정제하였다. 정제한 재조합 단백질을 이용해 제작한 복클론 항체는 $1{\times}10^{-4}$으로 희석하였을 때 western blot과 ELISA를 통해서 각각 10 ng, 5 ng의 재조합 ICRSV 외피단백질을 검출할 수 있었다. 이로써 제작된 항체를 이용하여 소량의 바이러스 입자만으로도 ICRSV를 검출할 수 있을 것이다.
Dispersal of citrus bacterial canker caused by Xanthomonas axonopodis pv. citri on Unshiu orange was investigated in naturally infested nursery plot at Seogwipo in Jeju island, Korea. Based on phage detection, over 2% of the bacterial pathogen over-wintered in canker lesions and started to multiply in late May. However, symptoms were first observed 1 month after the phage detection. The disease dispersed non-directionally to nearby plants possibly because of indirect dissemination of the bacterium by rain splashes. The disease increased from late June to late August and decreased thereafter. Population of phage increased constantly, however, disease occurrence somewhat fluctuated due to environmental factors. Disease incidence and severity were correlated with rainfall with wind that occurred 14-32 days earlier from late May to late August.
본 연구는 유자나무에 발생하는 주요 병을 방제하기 위한 친환경 유기농업자재를 선발하기 위하여 수행되었다. Phomopsi scitri에 의한 유자 검은점무늬병은(Meloanose)과 Elsinoe fawcettii에 의한 유자 더뎅이병(Scab)은 유자나무에서 가장 일반적인 병으로 알려져 있다. 병 발생은 6월 하순경에 피해가 큰 것은 6월 동안의 강우량과 상대습도와 밀접한 연관관계를 가지고 있다. 또한 이 병들은 수령이 낮은 유자보다는 수령이 높은 유자에서 심하게 발생하는 경향이 있다. 유자 검은점무늬병에 대한 방제효과는 농가의 관행재배구가 78.3%였으며, 친환경유기농업자재는 49.1~72.6% 방제효과를 보였다. 반면, 유자 더뎅이병 시험에서 농가의 관행재배구에 대한 방제효과는 82.6%였으며, 공시자재인 친환경유기농업자재는 41.1~71.8%의 방제효과를 보였다. 각각의 시험에서 통계적 유의성을 검정한 결과 통계적으로 유의성이 있었다. 본 시험결과에서 친환경유기농업자재는 유자의 검은점무늬병 및 더뎅이병에 대한 방제방법으로 제시할 수 있었다.
Citrus canker is very important disease in international trade of citrus. The disease was usually take place from late of June, and severe middle of July to middle of August, though disease occurrence was affected by environmental conditions. In pathogenicity test, three varieties, orange, lemon and kiyomi among 7 varieties, were succeptible, two varieties, satsuma mandarin and iwasachi, intermediate resistant. On the other hand, shiranuhi and yuzu were resistant relatively. The pathogen, Xanthomonas axonopodis pv. citri, grew well in PD broth adjusted to pH 7.0 at 26$^{\circ}C$. It's growth was best in medium containing group of monosaccharide as a carbon source and group of ammonium as a nitrogen source. Tow isolates were resistant to streptomycin among 11 isolates isolated from diseased leaves in field in Jeju-Do. The streptomycin sensitives isolate was controlled by in greenhouse test. On the other hand, the resistant and sensitive isolates were controlled by treatment with copper sulfate, the control value is 88.7% and 90.6%, respectively.
Targeted therapy has been a very promising strategy of drug development research. Many molecular mechanims of diseases have been known to be regulated by abundance of proteins, such as receptors and hormones. Chemoprevention for treatment and prevention of diseases are continuously developed. Pre-clinical and clinical studies in chemoprevention field yielded many valuable data in preventing the onset of disease and suppressing the progress of their growth, making chemoprevention a challenging and a very rational strategy in future researches. Natural products being rich of flavonoids are those fruits belong to the genus citrus. Ethanolic extract of Citrus reticulata and Citrus aurantiifolia peels showed anticarcinogenic, antiproliferative, co-chemotherapeutic and estrogenic effects. Several examples of citrus flavonoids that are potential as chemotherapeutic agents are tangeretin, nobiletin, hesperetin, hesperidin, naringenin, and naringin. Those flavonoids have been shown to possess inhibition activity on certain cancer cells' growth through various mechanisms. Moreover, citrus flavonoids also perform promising effect in combination with several chemotherapeutic agents against the growth of cancer cells. Some mechanisms involved in those activities are through cell cycle modulation, antiangiogenic effect, and apoptosis induction.Previous studies showed that tangeretin suppressed the growth of T47D breast cancer cells by inhibiting ERK phosphorylation. While in combination with tamoxifen, doxorubicin, and 5-FU, respectively, it was proven to be synergist on several cancer cells. Hesperidin and naringenin increased cytotoxicitity of doxorubicin on MCF-7 cells and HeLa cells. Besides, citrus flavonoids also performed estrogenic effect in vivo. One example is hesperidin having the ability to decrease the concentration of serum and hepatic lipid and reduce osteoporosis of ovariectomized rats. Those studies showed the great potential of citrus fruits as natural product to be developed as not only the source of co-chemotherapeutic agents, but also phyto-estrogens. Therefore, further study needs to be conducted to explore the potential of citrus fruits in overcoming cancer.
Elsinoe fawcettii는 현재 감귤 산업의 경제 가치를 떨어뜨리며, 감귤 더뎅이병을 일으키는 원인중 하나로 일반적으로 살균제를 이용하여 방제가 이루어지고 있다. 하지만 안전한 농산물에 대한 관심이 증대되면서 생물학적인 방제에 대한 연구가 많이 요구되고 있다. 이에 미생물 방제에 대한 연구로서 제주에서 분리한 식물근권세균 215개 중 Elsinoe fawcettii에 의해 발병되는 감귤 더뎅이병균의 항균 효과와 병원균 발병 억제효과가 나타나는지 조사하였다. 그 중 in vitro 실험에서 더뎅이병균에 저지원을 형성하며 항균 효과를 나타내는 근권세균은 THJ 609-3, MRL 408-3, TRH 423-3이었다. 또한 이들 식물근권세균을 선처리하고 병원균을 접종한 결과 감귤 더뎅이병 억제효과가 있었다. 근권세균에 의한 병억제 기작을 알아보기 위해 형광현미경을 이용하여 조사한 결과 선발된 식물근권 세균이 병원균의 포자수를 감소시켰으며 병원균 발아율도 접종 1일 후에 감소되었다. 식물근권세균 rDNA의 Internal Transcript Spaces(ITS)을 분석을 통해 동정한 결과 THJ 609-3은 Pseudomonas pudia로 동정되었으며, MRL 408-3과 TRH 423-3은 Burkholderia gladioli로 동정되었다. 본 연구는 생물적 방제로 감귤 더뎅이병균을 방제할 수 있는 친환경적 미생물제제로 유용하게 이용할 수 있는 가치가 있다고 생각된다.
Citrus fruit contain various flavonoids that have multiple biological activities. However, the content of these flavonoids are changed during maturation and immature Citrus is known to contain larger amounts than mature. Chemokines are significant mediators for cell migration, while thymus and activation-regulated chemokine (TARC/CCL17) and macrophage-derived chemokine (MDC/CCL22) are well known as the typical inflammatory chemokines in atopic dermatitis (AD), a pruritic and chronic inflammatory skin disease. We reported recently that the EtOH extract of immature Citrus unshiu inhibits TARC and MDC production. Therefore, we investigated the activity of flavonoids contained in immature Citrus on TARC and MDC levels. As a result, among the various flavonoids, quercetagetin has stronger inhibitory effects on the protein and mRNA expression of TARC and MDC than other flavonoids. Quercetagetin particularly has better activity on TARC and MDC level than quercetin. In HPLC analysis, the standard peak of quercetagetin matches the peaks of extract of immature C. unshiu. This suggests that quercetagetin is an anti-inflammatory component in immature C. unshiu.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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