지금까지의 여러 연구 보고에서 나타난 배지 성분 중 공통적인 것을 간추려 발효를 진행한 결과 미생물 성장과 항생제 발효가 아주 좋지 않았다. 여러가지로 배지 조성을 바꾸어 본 결과 2가 금속들과 탄수화물이 아주 중요한 오인임을 알 수 있었다. 2가 금속들은 천연배지에 들어있는 이상으로 첨가될 때는 일반적으로 항생제 생산을 배제하는 영향을 보였다. 탄수화물은 지금 까지의 연구 결과와는 달리 전분이 설탕보다 항생제 생산에 효과가 큼을 알 수 있었다. 또한 배지성분이 화학적으로 성분이 알려진 단순한 경우보다 천연 배치로서 여러가지 복합된 경우가 더욱 효과적임을 확인하였다.
Streptomyces aureofaciens를 이용하여 chlortetracycline 발효중 생산율을 높이는 방법에 대한 연구가 시행되었다. 지금가지 연구보고된 여러결과와는 달리 2가 금속 이온들은 어느 농도이상이 되면 각각 다른 수준으로 chlortetracycline 생산율을 저하시키는 영향이 있다는 관찰이 되었다.(중략)
This investigation was intended to find out the estrogenic effect of chlortetracycline (CTC) on vitellogenin induction in adult male Japanese medaka (Oryzias latipes). Vitellogenin (Vtg) produced in male fish has been used to as one of a biomarker of endocrine disrupters. The positive control was $17{\beta}-estradiol$ (E2) that induced Vtg in male fish. As a result, male and female fish were exposed to 0.1, 1, 10 and 100 ppm of CTC. Western blot results showed approximately 205 kDa, that is similar to myosin at high molecular weight range Sigma maker. Vtg band was showed fainted to 10 and 100ppm for chlortetracycline. Vtg concentration of CTC was qunatified by total protein quantification and ELISA. Exposure of the male fish to CTC of 0.1, 1, 10 and 100 ppm produced Vtg concentrations of 0.24, 0.12, 7.61 and 40.02%o, respectively, that value was elevated than control male fish (0.14%o). CTC exerted as a Vtg inducer in male fish from 10 ppm, but it was a reducer in female fish from 0.1 ppm level. The results say that vitellogenin induction patterns alter in male medaka treated with CTC, and that CTC may caused endocrine disruption in fish.
Chlortetracycline (CTC) is one of the most important compounds in antibiotic production, and its distribution has been widely investigated due to health and ecological concerns. This study presents systematic approach to optimize the high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry for analyzing CTC in a multiple reaction monitoring mode ($479{\rightarrow}462m/z$). One-factor-at-a-time (OFAT) test with response surface analysis (RSA) was used as optimization strategy. In OFAT tests, the fragmentor voltage, collision energy, and ratio of acetonitrile in the mobile phase were selected as major factors for RSA. The experimental conditions were determined using a composite in cube design (CCD) to maximize the peak area. As a result, the partial cubic model precisely predicted the peak area response with high statistical significance. In the model, the (solvent composition) and (collision $energy^2$) terms were statistically significant at the 0.1 ${\alpha}$-level, while the two-way interactions of the independent variables were negligible. By analyzing the model equation, the optimum conditions were derived as 114.9 V, 15.7 eV, and 70.9% for the fragmentor voltage, collision energy, and solvent composition, respectively. The RSA, coupled with the CCD, offered a comprehensive understanding of the peak area that responds to changes in experimental conditions.
현재 우리나라에서 널리 이용되고 있는 미생물학적 검사법을 이용하여 TCs 계열의 모화합물과 epimer에 대한 검출 그리고 이를 통한 모화합물과 epimer간의 상대적 생물학적 활성도를 확인하였다. 시험법의 관점에서 낮은 선택성과 낮은 민감도를 나타낸 균주는, 다양한 적용 가능 균주의 발굴 및 적용이 시험법 검증을 통해 이루어질 필요가 있다. 극단적으로 식품 중 epimer만이 잔류하여 미생물 시험에서 의양성이 나올 경우, 기기분석을 통해 확인 정량시 원물질이 검출되지 않는다면, 이는 분석화학과 독성학의 과학적 지식을 바탕으로 볼 때 제도적 맹점으로도 남을 수도 있다. 그리고, 현행 우리나라의 모화합물에 국한 된 잔류허용 기준은 활성이 있는 epimer나 대사산물까지 확대하여 검토 해 볼 필요가 있으며, 이는 최근 의약품류의 환경 중 잔류실태 조사, 환경 중 위해성 평가 및 관리를 위해서도 관리 대상물질을 과학적 근거에 따라 제시해 주는 중요한 자료가 된다.
It has been reported that the $Ca^{2+}$-ATPase and the $Ca^{2+}-Na^+$ exchanger play an important role for the regulation of intracellular $Ca^{2+}$ in somatic cells, the $Ca^{2+}$-ATPase located in the plasma membrane helps the $Ca^{2+}$ concentration in maintain low $[Ca^{2+}]_i$. Roldan & Fleming reported that the spermatozoan $Ca^{2+}$-ATPase plays an important role in the capacitation and acrosome reaction. We used to assess $Ca^{2+}$ changes by chlortetracycline (CTC) patterns in the capacitation and acrosome reaction of human and hamster spermatozoa. In the present study applying quercetin which has been known as an ATPase antagonist, the enzymatic effect of $Ca^{2+}$-ATPase on capacitation and acrosome reaction was found to be remarkable: a significant increase of the transformation from the original type to the B type and the AR type of spermatozoa. This finding suggests that $Ca^{2+}$-ATPase play an important role in the efflux and the influx of the $Ca^{2+}$ which have been known to be an essential factor for the capacitation and acrosome reaction, and that the inhibitory action of the $Ca^{2+}$-ATPase might be a prerequsit step toward the capacitation and acrosome reaction. In conclusion, this study suggest the considerable evidence as follows: the increment of the intracellular $Ca^{2+}$ concentration occurred by controlling the slope of $Ca^{2+}$ concentration through $Ca^{2+}$-ATPase activites in both the intracellular and extracellulr fluid may be important procedures for the capacitation and the acrosome reaction, and finally for fertilization of the sperm and ovum.
Oxytetracycline, tetracycline, chlortetracycline and doxycycline in honey were separated by solid phase extraction (SPE) and determined with high performance liquid chromatography (HPLC) with UV/Visible detector. Analysis was carried out using following conditions: XTerra $C_8$ column $(3.9\times150mm\;i.d. 5{\mu}m)$, mobile phase composed of 0.01M oxalic acid : methanol : acetonitrile (820 : 80 : 100, v/v/v), isocratic pump at a flow rate of 0.9 ml/min. and $50{\mu}l$ of injection volume, UV/Visible detector with wavelength of 360nm. The calibration curves of four tetracyclines showed linearity $(\gamma^2>0.999)$ at concentration range of $100\~1,000 ng/ml$. The recoveries in fortified honey represented more than $70\%$ with low coefficient of variation $(<10\%)$ for concentration range of four tetracyclines. The detection limits for oxytetracycline, tetracycline, chlortetracycline and doxycycline were 13.8, 14.6, 26.2 and 24.9ng/g in acacia honey. respectively. We also monitored tetracyclines residue in domestic honey [n : 38, acacia (20), wild flower (18) ] and foreign honey [n=22, legally distributed (13), illegally distributed (9)] using modified Charm II screening and HPLC confirmation methods. Seven of the 60 samples $(11.7\%)$ were suspect positive using modified Charm II screening test. Chlortetracycline residue was found in one foreign honey (illegally distributed) tested at concentrations of 0.22 ppm. Conclusively, for more effective control of tetracyclines used in beekeeping should be further survey for residues in honey and also national guidelines (maximum residue limit : MRL) and methods should be obligatory.
본 시험은 돼지사료에 첨가하여 사용하던 항생제를 대체하기 위한 유기산제의 효과를 평가하기 위하여 생후 79일령, $32{\sim}33kg$ 범위의 일대 잡종(Large White${\times}$Landrace) 돼지 25두에 항생제 무첨가사료(대조구)와 대조구 사료에 각각 Chlortetracycline(CTC) 100mg/kg을 첨가한 사료(T1), CTC 100mg/kg과 $Acidomix^{(R)}$ (formic acid 25%, sorbic acid 10%, fumaric acid 10%)를 0.1% 첨가한 사료(T2), $Acidomix^{(R)}$를 0.1% 첨가한 사료(T3), $Acidomix^{(R)}$를 0.3% 첨가한 사료(T4)의 5개 처리로 구분하여 급여한 다음 생산성과 혈액성상의 변화를 조사하였다. 시험 기간 동안 육성전기 돼지의 일당증체량은 생육이 진행됨에 따라 지속적으로 증가하였고 평균 일당증체 량은 T4구 > T2구 > T1구> T3구 > 대조구 순으로 낮아졌다. 특히 T4구가 대조구에 비하여 유의하게 높았고(p<0.05) 다음으로 CTC 또는 $Acidomix^{(R)}$를 첨가한 모든 처리구가 대조구에 비하여 높았다. 사료요구율의 경우에도 생육이 진행됨에 따라 높아졌고 평군 사료요구 율은 T4구 < T3구 < T2구 < T1구 < 대조구의 순서로 높아져 T4구와 T3구의 사료요구율이 낮았으나 통계적으로 유의한 차이는 나타내지 않았다. 사료 섭취량은 대조구 및 처리구 간에서 큰 차이를 보이지 않았다. 혈액내의 요소태 질소(BUN), cholesterol, triglyceride, total lipid함량은 유의한 차이가 인정되었으나 비교적 정상 수치에 근접한 결과로 개체간의 차이로 판단되며 유기산 또는 항생제의 급여가 혈액성상에는 그다지 큰 영향을 미치지 않았다. 이상의 결과를 볼 때, 유기산제의 첨가가 대조구 혹은 항생제 첨가구 보다 육성전기 돼지에 있어서 일당증체량을 증가시키고 사료요구율은 낮아져 유기산제에 의한 돼지의 성장촉진 및 사료요구율의 개선효과가 나타남으로써 항생제의 대체 가능성을 시사하였다.
농경지 토양에서 대상항생제 6종(amoxicillin, ampicillin, chlortetracycline, enrofloxacin, oxytetracycline, tetracycline을 아세트산 함유 아세토니트릴, Na2Cit.5H2O, Na3Cit.2H2O과 Na2-EDTA로 추출 후 C18으로 정제하여 LC-MS/MS로 분석하는 모니터링을 수행하였다. 그 중 2종의 항생제, chlortetracycline과 enrofloxacin이 국내 농경지 토양에서 검출되었다. 제안한 분석법은 토양 중 잔류 항생제 모니터링을 위한 빠르고 간편한 시험법이었고 다양한 활용이 가능할 것으로 보인다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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