• 생약학회지
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• 제46권4호
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• pp.279-282
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• 2015

In order to quantify compound K(CK), anticancer component of Panax ginseng C. A. Meyer, high titer rabbit polyclonal antibodies (pAbs) were raised against a conjugate of CK and bovine serum albumin coupled by a periodate oxidation method. Coating antigen (CK-OVA) was also prepared by the same method with OVA. As a result of optimization of antiserum dilution (2,000 fold), coating antigen ($25{\mu}g/ml$) and other condition (incubation time, temperature and washing method), ELISA method for the determination of CK was established. The measuring range extended from 0.5 ng/ml to 25 ng/ml of CK. The antibodies exhibited minor or even no cross reactivities with protopanaxatriol (1.56%) and other tested ginsenosides, $GRb_1$ (0.11%), $GRg_1$ (0.07%) except protopanaxadiol (87.2%) from the structural similarity. And the antibody showed good correlation (r=0.987) between the assay values obtained by this ELISA method and HPLC. Therefore, the ELISA method could be very useful tools for the determination of CK in biological fluids because of their high sensitivity and specificity.

• 한국축산식품학회지
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• 제32권6호
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• pp.706-712
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• 2012

The present study was aimed to produce a chicken polyclonal antibody against Cronobacter muytjensii and to develop an immunoassay for its detection. Purification of anti-C. muytjensii IgY from egg yolk was accomplished using various methods such as water dilution and salt precipitation. As a result, sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis produced two bands around 30 and 66 kDa, corresponding to a light and a heavy chain, respectively. Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (IC-ELISA) was performed to determine the effectiveness of the chicken IgY against C. muytjensii. The optimum conditions for detecting C. muytjensii by indirect ELISA and checkerboard titration of the antigen revealed an optimum average absorbance at the concentration of 18 ${\mu}g/mL$, having ca. $10^8$ coated cells per well. The anti-C. muytjensii IgY antibody had high specificity for C. muytjensii and low cross-reactivity with other tested pathogens. In this assay, no cross-reactivity was observed with the other genera of pathogenic bacteria including Escherichia coli O157:H7, Salmonella Typhimurium, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Enterobacter aerogenes, Salmonella Enteritidis and Listeria monocytogenes. In addition, detection of C. muytjensii in infant formula powder showed a low matrix effect on the detection curve of IC-ELISA for C. muytjensii, with similar detection limit of $10^5$ CFU/mL as shown in standard curve. These findings demonstrate that the developed method is able to detect C. muytjensii in infant formula powder. Due to the stable antibody supply without sacrificing animals, this IgY can have wide applications for the rapid and accurate detection of C. muytjensii in dairy foods samples.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제28권4호
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• pp.207-212
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• 1990

이락촌폐흡충(Paragonimusiloktsuenensis) 감염 흰쥐 혈청의 항체 생산을 효소면역 반응 (enzyme-linked immunosorbent assay: ELISA)으로 관찰하였다. 이락촌폐흡충의 피낭유충을 흰쥐 에 감염시킨 후 격주로 12주까지 채질한 혈청과 이락촌폐흡충 성충 추출 조항원의 반응, 면역교차 반응의 유무를 알기 위해 동혈청과 폐흡충(P. westermani) 조항원(PWA) 및 간흡충(Clonorchis sinensis) 조항원(CSA)의 반응을 ELISA의 OD값(optical density value)으로 측정하였다. 감염강도 별 혈청군(GI, GII, GIII, 및 GIV)은 회수된 충체수로 구분하였다. 이락촌폐흡충 감염 횐쥐 혈청은 동항원(PIA)과의 반응에서 감염 후 4주에 전 감염 개체의 평균 OD값이 대조 혈청과 유의한 차이를 나타내어 항체 양성 반응이 인정되었고, 조사된 12주까지 점차 OD간의 증가로 항체가의 증가를 나타내었다. 감염강도별로 구분한 군별 평균 OD값의 수치는 대체로 감염강도와 비례되었으나 감염 6주 이후 군별 OD값의 유의성은 없었고, 개체별 OD값은 보유충체 수에 비례하지 않는 개체들이 많았다. 이락촌폐흡충 감염 횐쥐 힐청은 폐흡충(p. westermani) 조항원(PWA) 및 간흡충(C. sinensis)조항원(CSA)과의 반응(ELISA)에서도 상당한 면역교차 반응을 나타내었다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제9권2호
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• pp.135-142
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• 2005

무척추동물에서 척추동물에 이르기까지 대부분의 난생동물들의 난황 단백질의 전구체를 vitellogenin(VTG)이라 한다. 난생 척추동물에서 VTG는 간에서 합성되어 혈액을 통해 난세포로 전이된다. 암컷 어류는 정상적인 생식주기에서 난황단백전구체 형성이 시작되면 혈중 농도는 급격히 증가하게 된다. 수컷도 VTG의 유전자를 가지고 있기 때문에 낮은 수준의 내인성 에스트로겐으로 아주 적은 양의 단백질이 있을 수 있다. 그렇지만 수컷에 외인성에스트로겐 유사물질에 노출되면 그 양은 증가하게 된다. 따라서 어류에서 VTG는 내분비계 장애물질 효과를 조사하는 유용한 생물학적 추적자로 사용할 수 있다. 이 연구에서는 에스트로겐 유사물질에 오염된 지역에 서식하는 망둑어류의 혈중 VTG의 수준을 정량할 수 있는 방법을 제공하고자 한다. 이러한 목적을 위해 꾹저구(Chaenogobius annularis)의 VTG를 분리하고, 이에 대한 단클론 항체와 다클론 항체를 제작하여 혈중 VTG 수준을 정량할 수 있는 sandwich 경합 ELISA system을 만들었다. 난황 단백질에 대한 단클론 항체와 다클론 항체를 사용한 ELISA system에 대한 타당성 검토를 하였다. 순차적으로 희석한 암 컷의 혈청에 대한 흡광도 곡선은 VTG 표준농도의 곡선과 평행하였으나 수컷의 혈청에 대한 흡광도 곡선은 평행하지 않았다. 이 VTG에 대한 sandwich ELISA system으로 꾹저구(C. annularis)의 혈중 VTG의 수준을 정량뿐만 아니라 문절망둑(Acanthogobius flaviman)과 풀망둑(A. hasta)의 혈중 VTG 수준을 정량할 수 있다.

• 한국식품과학회지
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• 제30권6호
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• pp.1415-1419
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• 1998

시설 원예산물 중 곰팡이 독소 생성능이 있는 균주의 오염여부를 조사하기 위해 진주를 비롯한 서부 경남 일원과 경북 안동 근교에서 가지, 메론, 배추, 상추, 오이, 수박, 참외, 토마토, 딸기, 및 그 토양 등의 시료를 수집하여 ochratoxin A 생성균의 오염정도를 관찰하였다. 분석방법은 indirect competitive ELISA 법을 사용하였으며, HPLC법과도 비교 분석하였다. 그 결과 경남 일원과 경북 안동 근교에서 총 192점의 시료를 분리하여 균분리를 실시한 결과 Aspergillus속 142균주, Penicillium속 153균주를 분리하였다. 분리된 균은 SLS배지로 $28^{\circ}C$, 15일간 배양한 후 indirect competitive ELISA 법에 의해 ochratoxin A의 생성여부를 검색하였다. 그 결과 Penicillium속 5균주에서 ochratoxin A 생성이 확인되었으며 검출량은 $0.084{\sim}2.128\;{\mu}g/mL$이었고, 수박에서 분리한 균주가 $2.128\;{\mu}g/mL$로 가장 많은 ochratoxin A를 생산하였다. 그러나 Aspergillus속은 모두 음성반응을 나타내었다. ELISA법에서 ochratoxin A를 생성하는 것으로 나타난 균주를 HPLC법에 의해 확인한 결과 ochratoxin A의 생성이 확인되었으며 생성량은 ELISA 결과와 비슷하였다.

• The Plant Pathology Journal
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• 제22권1호
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• pp.21-27
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• 2006

We immunized BALB/c mice with purified Cucumber green mottle mosaic virus isolate HY1 (CGMMV-HY1). Through the selection of positive clones that were grown on the HAT medium, four sensitive monoclonal clones (CG99-01, CG99-02, CG99-03, and CG99-04) were selected from 500 Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase positive hybridoma cells. Four sensitive clones of CGMMV-HYI were determined as IgM type of the subclass of mouse immunoglobulins Ig group. The titer of monoclonal antiserum against CGMMVHY1 was estimated 1:12,800 by the indirect ELISA. Although monoclonal antibodies (MAbs) from CG99-01 and from CG99-04 cross-reacted with Zucchini green mottle mosaic virus and Kyuri green mottle mosaic virus, MAb from the cell line CG99-03 was highly specific to CGMMV. No MAbs cross-reacted with Cucumber mosaic virus-Fny. Only CG99-04 reacted with Pepper mild mottle virus weakly and CG99-02 reacted with both CGMMV and KGMMV. CGMMV was detected from the rind of watermelon fruit by DAS-ELISA of CGMMV-HY1, but not from the flesh of watermelon. Average seed transmission rate of CGMMV in watermelon was $24\%$ from symptomatic watermelon collected from 5 regions of Gyeongnam province. CGMMV was detected by DAS-ELISA with specific MAb of CGMMVHY1 periodically from root stock, during the sequential process for nursery seedling in Haman. Necrotic spots on cotyledons of root stock seedling progressed to reveal the typical symptomatology on the primary leaves of scion upon grafting. Here, we have established MAb based ELISA system, which could accurately detect CGMMV from watermelon seeds, nursery seedlings, transplants and field samples from greenhouse or open out door field as well.

• 한국동물위생학회지
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• 제43권4호
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• pp.237-244
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• 2020

Porcine transmissible gastroenteritis (TGE) has been a significant cause of economic losses in pig farming industry since 1950s. Although transmissible gastroenteritis virus (TGEV) has declined in recent years, it should not be excluded because of its characteristics; the frequency of gene mutation, the mortality in piglets, and the possibility for sudden incidence. Therefore, the herd-level monitoring of the virus is important to prevent further circulation of TGE. The aim of this study is to develop a large-scale sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with high specificity to rapidly detect TGEV in feces by using monoclonal antibodies (Mabs). The TGEV specific Mabs were produced in hybridoma cells. Among the Mabs belonged to the IgG class developed by this study, the final selected 8H6, 1B7, 4G3, and 1F8 were identified to have the neutralization ability against TGEV. The sandwich ELISA was established using 8H6 as a reporter antibody and 1B7 and the reported 5C8 as a capture antibody. The developed sandwich ELISA was able to distinguish TGEV from other pathogenic diarrheal agents (porcine rotavirus, porcine reovirus, porcine epidemic diarrhea virus (PEDV), E. coli, and C. perfringens) in tissue culture as well as fecal samples. And the detection rate of TGEV in feces was 80% compared with RT-PCR. The results suggested that the developed sandwich ELISA may be useful in the herd-level monitoring for effective preventive measures due to the early diagnosis of TGEV using a large amount of samples.

• 식물병연구
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• 제18권3호
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• pp.231-235
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• 2012

본 연구는 citrus에 심각한 피해를 초래하는 바이러스인 ICRSV가 국내로 유입되는 것을 차단하여 그로 인한 피해를 방지하기 위해 이를 진단하는 시스템을 구축하고자 하였다. ICRSV가 감염된 시료를 구할 수 없어 외피단백질 유전자를 E. coli의 codon usage를 고려하여 optimization한 뒤 E. coli에서 수용성 단백질로 과발현된 재조합 ICRSV 외피단백질을 정제하였다. 정제한 재조합 단백질을 이용해 제작한 복클론 항체는 $1{\times}10^{-4}$으로 희석하였을 때 western blot과 ELISA를 통해서 각각 10 ng, 5 ng의 재조합 ICRSV 외피단백질을 검출할 수 있었다. 이로써 제작된 항체를 이용하여 소량의 바이러스 입자만으로도 ICRSV를 검출할 수 있을 것이다.

• 대한수의학회지
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• 제41권1호
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• pp.51-57
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• 2001

A procedure for extraction and purification of 8 kDa antigen of Brucella abortus RB51 was developed. Bacteria heat inactivated at $60^{\circ}C$, 30 min was extracted by 1% sarcosine and followed by fluid pressure liquid gel filtration chromatography of 2 series, Superose 12 HR 10/30 and Sephacryl S-100. There was produced $71.46{\mu}g/g$(wet) of 8 kDa antigen, and it resisted 1% trypsin, solved 1% triton X-100 higher than distilled water and inactivated 0.1% proteinase K. These results show that 8 kDa antigen may be a lipoprotein existed cell surface of B. abortus RB51. Also, we developed ELISA using purified 8 kDa surface antigen of Brucella abortus RB51 strain, its specificity and sensitivity was 95.0%, 98.6%, respectively. As compared with dot-blot assay using whole cell and ELISA using 8 kDa antigen, its correlation was 93.5%.

• 한국산학기술학회논문지
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• 제13권12호
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• pp.6208-6214
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• 2012

해양미세조류 유래 독성물질에 대한 이해와 활용에 있어서 가장 중요하지만 간과되고 있는 부분은 독성물질을 검출할 수 있는 빠르고, 쉽고 경제적인 검출기술을 개발하는 것이다. 이 논문에서 우리는 삭시톡신(STX)에 대한 항체를 생산하였다. 헤모시아닌(mariculture keyhole limpet hemocyanin, mcKLH)과 오브알부민(ovalbumin, OVA)을 운반단백질로 사용하였다. 면역반응을 위해서 mcKLH-STX 결합체를 BALB/c 쥐에 복강주사하였다. 채혈 후 항-STX 항혈청을 분리하였다. 항혈청의 역가분석을 위하여 유리 STX와 OVA-STX로 코팅된 microtiter plate를 이용하여 간접 ELISA 실시하였다. 발색반응을 위한 이차항체로는 goat anti-mouse IgG-phosphatase conjugate가 사용되었다. 항-STX 항혈청은 OVA-STX와 유리 STX에 특이적으로 반응하였다. 항-STX 항혈청의 민감도는 매우 높았으며, STX를 위한 검출한계는 약 64.9 ng/kg이었다.