• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제29권3호
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• pp.293-310
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• 1991

우리 나라의 중요한 인체 기생충인 간흡충(Cloncrchis sinensis)을 연구함에 있어, 단세포를 항체제조법을 이용하여 보았다. 간흡충의 성충 조(조)항원으로 면역한 마우스의 비장 림프구와 형질세포종(plasmacytoma) 세포를 융합하여 간흡충의 항원에 대한 단세포를 항체를 분비하는 융합 세포를 만들어, 간흡충 항원에 대한 특이 단세포군 항체를 얻은 후, 이의 특성 및 반응하는 항원의 특성을 분석하고, 아울러 ELISA 억제 검사법을 이용하여 면역 진단법 상 특이도의 개선을 모색하였다 그 결과, 간흡충 항원에 대한 항체를 분비하는 총 29개의 융합세포군을 확인하였는데, 이 중 8개는 다른 기생 충 항원에 대해 교차 반응을 나타내지 않는 높은 특이성을 지니고 있었다. 클로닝 후 선택된 6종류의 단세포군 항체는 Ig Gl이 넷이었고, 나머지는 Is G2b 및 Is A로 나타났다. 위와 같이 선택된 단세포를 항체 중 4개만이 자연 감염 시에도 표현되는 항원 결정기에 대하여 생성된 것으로 판단되었다. 효소 면역 전기영동 블로팅으로 분자량 l0KD, 34 KD 항원은 각각 CsHyb 0714-20 및 CsHyb 0605-10단세포군 항체와 항원항체 반응을 나타냄을 확인하였다. 간접형광항체법을 이용하여 카 항원 결정기의 충체 내 위치를 관찰한 결과, CsHyb 0714-20 단세포를 항체에 대한 항원은 충체의 표면 및 실질 대부분에 분포하였으며, CsHyb 0605-10 및 CsHyb 0714-25 단세포군 항체에 대한 항원은 충체의 실질 및 장관의 상피세포에 분포하고 있었다. 한편 CsHyb 0605-23 단세포군 항체에 대한 항원은 주로 자궁내 충란 주위에 많이 분포하고 있었다. 단세포군 항체와 반응하는 Sephadex G200 겔 여과 항원 분획을 검색한 결과, 검색한 항원 결정기는 모두 전반적으로 빨리 젤 여과를 통하여 나온 분회에 속하여 있는 것을 알 수 있었다. 한편 이 단세포군 항체를 인체 간흡충증의 진단에 응용하여 그 특이도를 개선하고자 하였다. 통상적인 방법의 ELISA로 시행한 항체가로는 간흡충 감염자의 75U가 양성 병위에 들었으며, 정상 대조군의 7.l%, 폐흡충 감염 자의 37.5%가 위 양성 반응을 보였다. 반면 CsHyb 0605-23 단세포군 항체를 함께 사용하여 ELISA억제 검사를 시행한 결과는 간흡충 감염자의 77.1%가 양성으로 판정되었으며, 정상 대조군 및 폐흡충 감염자에서는 양성 반 응을 찾아 볼 수 없어서 100%의 특이도를 나타내었다. 따라서 이러한 단세포군 항체를 이용한 ELISA 억제검사 는 통상적인 ELISA 검사에 비하여 같은 정도의 민감도를 유지하면서도 매우 높은 특이도를 가지는 것으로 판단되었다.

• The Plant Pathology Journal
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• 제20권4호
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• pp.252-257
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• 2004

We developed a polyclonal antibody based-ELISA system to monitor inocula accurately and rapidly before onset of anthracnose on soybean sprouts. Titer of mouse antisera against conidia of Colletotrichum gloeosporioides, determined by indirect ELISA, was high enough to be detectable up to ${\times}$25,600 dilutions. Both PAb1 and PAb2 had the highest level of reactivity to Colletotrichum gloeosporioides. Absorbance readings exceeded 0.15. Sensitivity of PAb to C. gloeosporioides was precise enough to detect spore concentration as low as 500 conidia/well by indirect ELISA. Both antibodies are very sensitive and highly specific to the target pathogen Colletotrichum gloeosporioides, apparently discriminating other unrelated pathogen, or epiphytes. This kit fulfills the requirements far detecting inocula before infection and onset of anthracnose. Our ELISA system should also be feasible to detect C. acutatum (Mungbean sprouts rot) and G. cingulata (C. gleosporioides), (apple, pepper). It was remarkable that absorbance value was not reduced even after 4 consecutive washings (Fig.4), suggesting that antigenic determinants are on the surface of conidia. Antigenic determinant was characterized by heating and enzyme treatment: Both PAb1 and PAb2 bind to protein epitope that does not contain residue of amino acid, arginine, and Iysine, even though more work needs to be done.

• 한국동물위생학회지
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• 제33권1호
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• pp.37-44
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• 2010

An enzyme-linked immnnosorbent assay (ELISA) has been performed for the detection of the prevailing toxinotypes of Clostridium perfringens obtained from conventional culturing of intestinal contents of goats which have died of suspected enterotoxaemia. The test was found effective to detect the toxins as well as types of the organism with less time and labor. The most prevailing type of C. perfringens causing enterotoxaemia in goat was C. perfringens type D (68.75%) and followed by C. perfringens type B (25%) and C (6.25%). No C. perfringens type A was detected. This study showed an intelligible picture of prevailing toxinotypes of C. perfringens in goats in Bangladesh. The use of the ELISA for the detection of clostridial types and toxins allows the differential diagnosis of C. perfringens types A, B, C and D enterotoxaemias from samples of intestinal contents and the typing of cultures of C. perfringens.

• 한국어병학회지
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• 제22권3호
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• pp.335-342
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• 2009

본 연구에서는 능성어를 대상으로 항체 검출 ELISA법을 적용하기 위한 기초 연구로서 능성어 혈청의 보존 조건에 따른 IgM의 안정성을 검토하였으며, 또한 항체 검출 ELISA법을 통해 능성어의 특이 항체반응을 조사하였다. 항 BSA 능성어 혈청을 사용하여 보존 온도 (-80, -20 및 4${^{\circ}C}$) 및 기간 (1, 34, 61 및 119일)에 따른 ELISA값을 비교한 결과, 모든 시료에 서 뚜렷한 O.D.값의 차이는 확인되지 않았다. -80${^{\circ}C}$ 및 -20${^{\circ}C}$에 보존된 혈청을 사용하여 해동 횟수 (1, 5, 10회)에 따른 ELISA O.D.값을 비교한 결과, 해동을 반복한 혈청 및 미동결 혈청의 O.D.값은 뚜렷한 차이를 보이지 않았다. 이상의 결과로 능성어 혈청은 -80, -20 및 4${^{\circ}C}$에서 119일간 보존하거나 10회 반복 해동하여도 능성어 IgM의 안정함이 확인되었다. 사육수온에 따른 능성어의 특이적 항체 반응을 조사한 결과, 20${^{\circ}C}$에서 사육중인 능성어에서 는 BSA 면역 후 14일째부터 BSA에 대한 특이 항체가 확인되었고, 21일-28일에 가장 높은 항체가를 나타냈으며 그 후 항체가는 서서히 떨어졌으나 면역 70일째에도 BSA에 대한 특이 항체는 관찰되었다. 반면 25${^{\circ}C}$에서 사육중인 능성어에서는 7일째부터 항체가가 확인되었고, 14일-21일 가장 높은 항체가를 나타냈으며 그 후 항체가는 서서히 떨어져 면역 70일째에는 0.4-1.6의 O.D. 값이 관찰되었다. 이상의 결과로 능성어의 특이 항체 반응은 20${^{\circ}C}$보다 25${^{\circ}C}$에서 항체 형성이 빠르고 항체가도 높게 나타나는 것이 확인되었으며, 또한 20${^{\circ}C}$와 25${^{\circ}C}$에서 사육중인 능성어에서 특이 항체반응은 약 2달간 지속됨이 확인되었다.

• Preventive Nutrition and Food Science
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• 제6권2호
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• pp.91-95
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• 2001

Competitive indirect enzyme linked immunosorbent assay (Ci-ELISA) was used to obtain the preliminary data for the detection of irradiated beef. Ci-ELISA was individually formatted with polyclonal antibodies produced from 2 kinds of bovine proteins, myosin and bovine serum albumin (BSA). Beef round, loin and tender loin were vacuum-packaged and subdivided into 3 groups of 1) irradiation; 2) irradiation and chilled at 4$^{\circ}C$ for 7 day; 3) irradiation and frozen at 2$0^{\circ}C$ for 2 months to observe the changes under different storage and/or distribution conditions. Irradiation was performed at 3, 5 and 7 kGy. Protein solutions prepared from the sample were tested by formatted Ci-ELISA. Detected concentrations of myosin and BSA decreased with the increased irradiation dose in all samples with different reduction rates. Myosin was more susceptible to freezing than BSA. Samples irradiated at 5 kGy or above could be differentiated from non-irradiated ones by Ci-ELISA. These results indicate that immunological assay can be used as a detection method for irradiated beef.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제18권3호
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• pp.374-382
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• 2011

Atlatoxin은 Aspergillus속 곰팡이로부터 생성되며 사람에게 있어서 간독성, 및 간암을 유발하는 잠재력을 가진 대표적 곰팡이 독소이며, 생체에 섭취된 $AFB_1$은 여러 가지 대사경로를 거쳐 동물 조직 내에 축적되는 것으로 알려져 있다. 방사선은 수술, 항암약물요법과 더불어 임상 시 중요한 치료방법이나 정상세포에 방사선을 조사하였을 때 반응성이 높은 활성산소와 과산화라디칼($OH{\bullet}$)을 생성하여 세포막의 불포화 지방산을 지질 과산화물로 변성시켜 세포 산화적 손상을 일으킨다. 본 연구는 곡류를 주식으로 하는 우리나라 사람들의 경우 $AFB_1$에 노출되기 쉽고 이들 중 일부는 위, 간, 담도 암과 같은 상복부 암으로 진단되어 간을 포함하는 부위에 대해 방사선 치료를 받을 수 있는 경우를 생각하여 흰쥐에게 $AFB_1$을 투여하거나 방사선과 $AFB_1$을 병합처리하여 vitamin C가 흰쥐의 혈청중의 $AFB_1$ 잔류량에 미치는 영향을 조사하기 위하여 수행되었다. X-ray 조사는 실험기간 내 단 1회로 실험사육기간 첫 일에 조사 하였고 X-ray 조사 후 vitamin C를 투여하였으며 vitamin C 투여 1시간 후 $AFB_1$을 투여하였다. vitamin C와 AFB은 모두 복강투여로 실험 사육 첫 일부터 1회 시작하여 3일에 한번씩, 5회 반복 투였으며 실험동물 사육기간은 총 15일로 하였다. 실험이 끝난 마우스 혈청 중 $AFB_1$은 indirect competitive ELISA와 HPLC법으로 측정 후 비교하였다. ELISA 법에 의한 흰쥐의 혈청 중 $AFB_1$ 의 함량은 ELISA 실험에서 AFB1 단독 투여한 2군에서는 $5.17{\pm}0.34$ ng/mL 였으며, 2군에 vitamin C를 투여한 3군에서는 $3.23{\pm}0.76$ ng/mL로 감소하는 경향이었다. 또한 X선 조사와 $AFB_1$ 병합처리한 4군의 혈청 중 $AFB_1$ 함량은 $5.62{\pm}0.44$ ng/mL 이었으며 여기에 vitamin C를 함께 투여 한 5군에서는 $4.84{\pm}0.36$ ng/mL로 약간 감소하는 결과를 나타내었다. 한편 HPLC 결과에서도 ELISA와 같은 결과를 나타내었으며, $AFB_1$ 단독 투여군(2군)과 X선 조사와 $AFB_1$ 병합처리군(4군)에서의 혈청 중 $AFB_1$ 함량은 각각 $4.82{\pm}0.17$ ng/mL, $5.36{\pm}0.42$ ng/mL 이었으나 여기에 vitamin C를 함께 투여한 3군과 5군에서는 각각 $2.77{\pm}0.23$ ng/mL, $4.33{\pm}0.14$ ng/mL로 유의적인 감소를 보여 vitamin C가 흰쥐의 혈청 중 $AFB_1$ 잔류량을 감소시키는 것으로 나타났다.

• The Plant Pathology Journal
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• 제20권4호
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• pp.247-251
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• 2004

We developed a polyclonal antibody (PAh) based- ELISA system to accurately and rapidly monitor inocula on plant surface before onset of anthracnose. Titer of mouse antisera against conidia of Colletotrichum gloeosporioides was determined by using indirect ELISA. It was high enough to be detectable up to ${\times}$ 12,800 dilutions. Absorbance readings exceeded (1.5even at a 10$^{-5}$ dilution. Sensitivity of PAb was precise enough to detect spore concentration as low as 50 conidia/well by indirect ELISA. PAb1 and PAb2 proved to be very sensitive and highly specific to the target pathogen, C. gloeosporioides, apparently discriminating other unrelated pathogens, or epiphytes. Absorbance values for original isolate exceeded 1.0, but no reaction was detected with other isolates, except three other anthracnose fungi: C. gloeosporioides (pepper strain), Glomerella cingulata (apple strain) and C. lagenarium. Our data suggest that PAb1 and PAb2 bind with the protein epitope that partially contains residues of amino acid, arginine, and Iysine. This kit fulfills the require-ments for detecting inoculums before infection and during onset of anthracnose on sweet persimmon.

• 한국동물위생학회지
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• 제27권3호
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• pp.273-280
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• 2004

The studies were performed for the PRRS antigen and antibody detection from breeding farms, artificial insemination(AI) center and growing farms in Jeonbuk province. 1. Specific PRRS primers were successfully amplified ORF6 617bp and ORF7 448 bp on agarose gel. 2. RT-PCR method has been establish by commercial kit and the thermal cycler program consisted of 30 cycles: $95^{\circ}C$ for 30 sec, $45^{\circ}C$ for 30 sec, and $72^{\circ}C$ for 45 sec. 3. The results of PRRS antibody test by ELISA method in AI centers were $6.6\%,\;53.3\%$ and breeding farms $65\%,\;65\%\;and\;38.7\%$, respectively. The serological positive of the antibody in gilt higher than sow. 4. The sero-positive of the PRRS antibody showed average $21\%$ in domestic farms, $56.2\%$ in breeding farms, and $29.9\%$ in AI center.

• 한국동물위생학회지
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• 제33권2호
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• pp.121-128
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• 2010

Brucellosis is a serious zoonosis, recognized worldwide. It primarily affects animals, which act as reservoirs for human infection as well as being of economic significance to the agri-food industry. Bangladesh has been reported as an endemic area for brucellosis. So a cross sectional study was conducted to determine the seroprevalence and potential risk factors of brucellosis in cattle in Dinajpur and Mymensingh districts of Bangladesh. A total of 182 cattle were examined by Rose Bengal Plate Test (RBPT) between September 2008 and October 2009. Then Positive, doubtful, and negative samples were further confirmed with slow agglutination test (SAT) and both indirect and competitive enzyme linked immunosorbent assay (iELISA and cELISA). A questionnaire was used to collect epidemiological information of the animals. The overall animal-level prevalence was 3.30%. Brucellosis seroprevalence was higher (4.76% by cELISA) in cattle above 48 months than those under 48 months. Female showed higher seroprevalence (10.67%) than male (6.25%). Higher seroprevalence was also found in cattle bred naturally (20.0%) than artificially (8.77%) and cattle that aborted or with previous abortion record (22.22%) showed higher seroprevalence than non-aborted (7.69%). The sensitivity of RBT and SAT was found 100% as compared to cELISA standard test, whereas specificity of RBT (95.35%) was higher than that of SAT (94.32%).

• 식물병연구
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• 제25권3호
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• pp.131-135
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• 2019

Cylindrocarpon destructans causes ginseng root rot and produces radicicol that has an antifungal effect. In this study, we developed a method to detect this fungus using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Secreted proteins of C. destructans were used as antigens to obtain C. destructans-specific IgG from mouse. Out of 318 monoclonal antibodies generated from mouse, two antibodies (Cd7-2-2 and Cd7-2-10) showed highest specificity and sensitivity. Indirect ELISA using both antigens successfully detected C. destructans in soils, but direct ELISA using IgG conjugated with horseradish peroxidase failed to detect antigens in soils. The indirect ELISA developed here can efficiently detect the fungus and help manage ginseng root rot disease in fields.