Chen, Taichi;Xia, Hongzhi;Cui, Shixiu;Lv, Xueqin;Li, Xueliang;Liu, Yanfeng;Li, Jianghua;Du, Guocheng;Liu, Long
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제30권5호
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pp.762-769
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2020
Vitamin K2 (menaquinone) is an essential vitamin existing in the daily diet, and menaquinone-7 (MK-7) is an important form of it. In a recent work, we engineered the synthesis modules of MK-7 in Bacillus subtilis, and the strain BS20 could produce 360 mg/l MK-7 in shake flasks, while the methylerythritol phosphate (MEP) pathway, which provides the precursor isopentenyl diphosphate for MK-7 synthesis, was not engineered. In this study, we overexpressed five genes of the MEP pathway in BS20 and finally obtained a strain (BS20DFHG) with MK-7 titer of 415 mg/l in shake flasks. Next, we optimized the fermentation process parameters (initial pH, temperature and aeration) in an 8-unit parallel bioreactor system consisting of 300-ml glass vessels. Based on this, we scaled up the MK-7 production by the strain BS20DFHG in a 50-l bioreactor, and the highest MK-7 titer reached 242 mg/l. Here, we show that the engineered strain BS20DFHG may be used for the industrial production of MK-7 in the future.
Rodriguez-Duran, Luis V.;Contreras-Esquivel, Juan C.;Rodriguez, Raul;Prado-Barragan, L. Arely;Aguilar, Cristobal N.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제21권9호
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pp.960-967
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2011
Tannin acyl hydrolase, also known as tannase, is an enzyme with important applications in the food, feed, pharmaceutical, and chemical industries. However, despite a growing interest in the catalytic properties of tannase, its practical use is very limited owing to high production costs. Several studies have already demonstrated the advantages of solid-state fermentation (SSF) for the production of fungal tannase, yet the optimal conditions for enzyme production strongly depend on the microbial strain utilized. Therefore, the aim of this study was to improve the tannase production by a locally isolated A. niger strain in an SSF system. The SSF was carried out in packed-bed bioreactors using polyurethane foam as an inert support impregnated with defined culture media. The process parameters influencing the enzyme production were identified using a Plackett-Burman design, where the substrate concentration, initial pH, and incubation temperature were determined as the most significant. These parameters were then further optimized using a Box-Behnken design. The maximum tannase production was obtained with a high tannic acid concentration (50 g/l), relatively low incubation temperature ($30^{\circ}C$), and unique low initial pH (4.0). The statistical strategy aided in increasing the enzyme activity nearly 1.97-fold, from 4,030 to 7,955 U/l. Consequently, these findings can lead to the development of a fermentation system that is able to produce large amounts of tannase in economical, compact, and scalable reactors.
This study aimed to optimize medium composition and culture conditions for enhancing the biomass of Lactobacillus plantarum 200655 using statistical methods. The one-factor-at-a-time (OFAT) method was used to screen the six carbon sources (glucose, sucrose, maltose, fructose, lactose, and galactose) and six nitrogen sources (peptone, tryptone, soytone, yeast extract, beef extract, and malt extract). Based on the OFAT results, six factors were selected for the Plackett-Burman design (PBD) to evaluate whether the variables had significant effects on the biomass. Maltose, yeast extract, and soytone were assessed as critical factors and therefore applied to response surface methodology (RSM). The optimal medium composition by RSM was composed of 31.29 g/l maltose, 30.27 g/l yeast extract, 39.43 g/l soytone, 5 g/l sodium acetate, 2 g/l K2HPO4, 1 g/l Tween 80, 0.1 g/l MgSO4·7H2O, and 0.05 g/l MnSO4·H2O, and the maximum biomass was predicted to be 3.951 g/l. Under the optimized medium, the biomass of L. plantarum 200655 was 3.845 g/l, which was similar to the predicted value and 1.58-fold higher than that of the unoptimized medium (2.429 g/l). Furthermore, the biomass increased to 4.505 g/l under optimized cultivation conditions. For lab-scale bioreactor validation, batch fermentation was conducted with a 5-L bioreactor containing 3.5 L of optimized medium. As a result, the highest yield of biomass (5.866 g/l) was obtained after 18 h of incubation at 30℃, pH 6.5, and 200 rpm. In conclusion, mass production by L. plantarum 200655 could be enhanced to obtain higher yields than that in MRS medium
Kim, Hyun-Han;Na, Jeong-Geol;Chang, Yong-Keun;Chun, Gie-Taek;Lee, Sang-Jong;Jeong, Yeon-Ho
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제14권5호
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pp.944-951
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2004
The influences of inoculum size, pH, and medium composition on mycelial growth and exopolysaccharides (EPS) production were investigated in shake flasks and in a bioreactor. The optimum inoculum size for both mycelial growth and EPS production was identified to be 10% (v/v) in shake flask cultures. The optimal initial pH for mycelial growth and EPS production in shake flask cultures were found to be 5.0 and 7.0, respectively. However, the optimal pH was 5.0 for both mycelial growth and EPS production in bioreactor cultures where the pH was regulated. The optimal mass ratio of the two major carbon sources, glucose to dextrin, was 1:4. The optimal mass ratio of the two major nitrogen sources, yeast extract to soy tone peptone, was 2:1. When 500 mg $1^{-1}$ of $MnSO_4-5H_2O$ was added to the bioreactor culture, both mycelial growth and EPS production were enhanced by approximately 10%. Under the optimized conditions, a mycelial biomass of 9.85 g $1^{-1}$ and an EPS concentration of 4.92 g $1^{-1}$ were obtained in 4 days.
Propagation of Anagrapha falcifera nuclear polyhedrosis virus(AfNPV) was investigated using well-plates and split-flow air-lift bioreactors. In well-plate experiments, the effects of pH, cell density at a point of infection, serum concentration, DEAE-dextran, and lipid on virus propagation were all closely examined. The AfNPV titer in well-plates was optimal at pH 6.8 and $3{\times}10^6$ cells/$cm^2$. The virus titer was not dramatically affected when the fetal bovine serum concentration was reduced from 10% to 5%. The addition of cholesterol at AfNPV infection of Sf21 cells enhanced the virus titer, whereas the addition of DEAE-dextran did not improve the titer. The AfNPV titer ($3.8{\times}10^7$$TCID_{50}/ml$) at optimized conditions for well-plate experiments was 2.5-fold higher than for the control. In bioreactor experiments, the AfNPV titer showed its maximum level at air flow rates of 20-40 ml/min. In a split-flow air-lift bioreactor, AfNPV titer ($2.3{\times}10^7\;TCID_{50}/ml$) was 1.5-fold higher than the control when the culture was at pH 6.8 and supplemented with 0.34 mM cholesterol.
Nunez-Ramirez, Diola Marina;Medina-Torres, Luis;Valencia-Lopez, Jose Javier;Calderas, Fausto;Lopez-Miranda, Javier;Medrano-Roldan, Hiram;Solis-Soto, Aquiles
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제22권11호
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pp.1494-1500
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2012
Fermentation with filamentous fungi in a bioreactor is a complex dynamic process that is affected by flow conditions and the evolution of the rheological properties of the medium. These properties are mainly affected by the biomass concentration and the morphology of the fungus. In this work, the rheological properties of a fermentation with the fungus Beauveria bassiana under different hydrodynamic conditions were studied and the rheological behavior of this broth was simulated through a mixture of carboxymethyl cellulose sodium and cellulose fibers (CMCNa-SF). The bioreactor was a 10 L CSTR tank operated at different stir velocities. Rheological results were similar at 100 and 300 rpm for both systems. However, there was a significant increase in the viscosity accompanied by a change in the consistence index, calculated according to the power law model, for both systems at 800 rpm. The systems exhibited shear-thinning behavior at all stir velocities, which was determined with the power law model. The mixing time was observed to increase as the cellulose content in the system increased and, consequently, the efficiency of mixing diminished. These results are thought to be due to the rheological and morphological similarities of the two fungal systems. These results will help in the optimization of scale-up production of these fungi.
In the process of producing chitosan from crustacean shell, the use of excessive acid and alkli is causing the problems of environmental pollution and of production cost. In this study, one way to solve these problems is to cultivate fungi, then, to extract chitosan from the cell wall. By means of flask incubation and batch cultivation, the optimum cultivation conditions for mass production of continuous cultivation was found. Four strains used for the production of fungal chitosan were Gongronella butleri IF08080, Absidia coerulea IF05301, Rhizopus delemar IF04775, Mucor tuberculisporus IF09256. In flask incubation to select strain of producing much chitosan by means of experiment of the effect of initial pH, Absidia coerulea IFO 5301 had highest yield in FCs, 258.1 $\pm$ 47.3 mg/200 $m\ell$l at pH 6.5. In flask incubation under the optimum cultivation condition, temperature 27$^{\circ}C$, culture time 6days, glucose 2%, peptone 1%, (NH$_4$)$_2$ SO$_4$ 0.5%, $K_2$HPO$_4$ 0.1 %, Nacl 0.1 %, MgSO$_4$ㆍ7$H_2O$ 0.05%, CaCl$_2$ㆍ2$H_2O$ 0.01 %, the yield of DCW brought the highest yields. In batch bioreactor, the optimum cultivation condition was that cell suspended solution was 70 $m\ell$, aeration rate 0.5 l/min, agitation rate 800 rpm, culture time 36 hr. In continuous bioreactor, the optimum substrate flow rate was 4 ι/day.
The cloning and expression of $\beta-glucosidase$ II, encoded by the gene ${\beta}glu2$, from thermotolerant yeast Pichia etchellsii into Escherichia coli is described. Cloning of the 7.3 kb BamHI/SalI yeast insert containing ${\beta}glu2$ in pUC18, which allowed for reverse orientation of the insert, resulted in better enzyme expression. Transformation of this plasmid into E. coli JM109 resulted in accumulation of the enzyme in periplasmic space. At $50^{\circ}C$, the highest hydrolytic activity of 1686 IU/g protein was obtained on sophorose. Batch and fed-batch techniques were employed for enzyme production in a 14 L bioreactor. Exponential feeding rates were determined from mass balance equations and these were employed to control specific growth rate and in turn maximize cell growth and enzyme production. Media optimization coupled with this strategy resulted in increased enzyme units of 1.2 kU/L at a stabilized growth rate of $0.14\;h^{-l}$. Increased enzyme production in bioreactor was accompanied by formation of inclusion bodies.
Selection of high producer strain, optimization of production medium and cultivation in bioreactor system were carried out in order to produce an antifungal substance, PAFS in large amounts which sources and 41 kinds of nitrogen sources, a synthetic medium consisting of fructose(70 g/1) and ammonium sulfate (10g/l) and a complex medium including galactose(30g/l), fructose(20g/l) and cottonseed flour(35g/l) were determined as opti-mized media for PAFS production. In bioreactor studies examining physiological characteristics of the pro- ducer microorganism with the complex medium, typical pattern of diauxic growth was observed as demonstrated by the result that fructose was not used before almost exhaustion on readily utilizable carbon source, galactose. When galactose was supplemented additionally during the fermentation period. PAFS pro-ductivity did no increases any more, indicating that large portion of the added galactose was used for cell growth instead of biosynthesis of the secondary metabolite. It was deduced that PAFS production could be enhananced by employing fed-batch operation in order to overcome the apparent phenomenon of catabolite repression and /or inhibition.
Aureobasidium pullulans HP-2001 균주를 사용하여 풀루란을 대량 생산을 위하여 7 l 및 100 l 생물배양기를 사용하여 용존산소와 관련된 조건을 최적화하였다. 풀루란의 생산에 최적인 탄소원과 질소원은 각각 50.0 g/l 포도당 및 2.5 g/l 효모추출물이었으며 플라스크 규모에서의 풀루란 변환율은 37%이었다. 풀루란 생산 균주의 생장에 최적인 배지의 초기 pH 및 배양온도는 7.5 및 30oC이었으나 풀루란의 생산에 최적인 배지의 초기 pH 및 배양 온도는 각각 6.0 및 $25^{\circ}C$이었다. 7 l 생물배양기에서 Aureobasidium pullulans HP-2001 균주의 생육에 최적인 교반속도 및 통기량은 각각 600 rpm 및 2.0 vvm이었으나 풀루란 생산에 최적인 조건은 각각 500 rpm 및 1.0 vvm이었으며 최적 조건에서 풀루란의 생산농도는 18.13 g/l이었다. 100 l 생물배양기에서 풀루란 생산 균주의 생장에 최적인 내압은 0.0 kgf/$cm^2$이었으나, 풀루란 생산에 최적인 내압은 0.4 kgf/$cm^2$이었으며 최적 조건에서 풀루란의 생산 농도는 22.89 g/l이었다. 이는 내압이 없는 상태에 비하여 풀루란의 생산 농도가 1.38배 증가한 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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