Bacillus amyloliquefaciens CB1 was isolated from cheonggukjang, a Korean fermented soy food. B. amyloliquefaciens CB1 secretes proteases with fibrinolytic activities. A gene homologous to aprE of Bacillus subtilis, aprECB1, was cloned from B. amyloliquefaciens CB1, and DNA sequencing showed that aprECB1 can encode a prepro-type serine protease consisting of 382 amino acids. When aprECB1 was introduced into B. subtilis WB600 using an E. coli-Bacillus shuttle vector, pHY300PLK, transformants showed fibrinolytic activity and produced a 28 kDa protein, the size expected for the mature enzyme. The 28 kDa fibrinolytic enzyme was purified from the culture supernatant of B. subtilis WB600 transformant. AprECB1 was completely inhibited by phenylmethylsulfonyl fluoride and almost completely inhibited by EDTA and EGTA, indicating that it is a serine metalloprotease. AprECB1 exhibited the highest specificity for N-succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide, a known substrate for ${\alpha}$-chymotrypsin. $A{\alpha}$ and $B{\beta}$ chains of fibrinogen were quickly degraded by AprECB1, but the ${\gamma}$-chain was resistant.
Har dmaterials such as cemented carbides with or without coated layer, cermets, ceramics and diamond or c-BN high pressure sintered compact are used for cutting tools, wear -resistant parts, rock drilling bits and/or high pressure vessels. These hardmaterials contain not only hard phase, but also second consituent as the element for forming ductile phase and/or sintering aid, and the mechanical properties of each material depend on (1) the amount of the second constituent as well as (2) the grain size of the hard phase. The hardness of each material mainly depends on these two factors. The fracture strength, however, largely depends on other microstructur a1 factors as well as the above two factors. For all hardmaterials, the fracture strength is consider ably affected by (3) the size of microstructur a1 defect which acts as the fracture source. In cemented carbides, the following factors which are generated mainly due to the addition of the second constituent are also important; (4) the variation of the carbon content in the normal phase region free from V-phase and graphite phase, (5) the precipitation of $Co_3$ during heating at about $800^{\circ}C$,(6) the domain size of binder phase, and (7) the formation of ${\beta}$-free layer or Co-rich layer near the surface of sintered compacts. For cemented carbides coated with thin hard substance, the important factors are as follows; (8) the kind of coated substance, (9) the formation of ${\eta}$-phase layer at the interface between coated layer and substrate, (10) the type of residual stress (tension or compression) in the coated layer which depends on the kind of coating method (CVD or PVD), and (11) the properties of the substrate, and (12) the combination, coherency and periodicity of multi-layers. In the lecture, the details of these factors and their effect on the strength will be explained.
Acetyl-L-camitine (ALC), a naturally occurring endogenous compound, has been shown to improve the cognitive performance of patients with senile dementia Alzheimer's type, and to be involved in cholinergic neurotransmission. Because ALC is an endogenous compound, valida-tion of the analytical methods of ALC in the biological fluids is very important and difficult. This study was presented validation and correction for plasma ALC concentrations and pharmacok-inetics after oral administration of ALC to human volunteers. ALC concentrations in human plasma were corrected by subtracting the concentration of blank plasma from each sample. Precision and accuracy (bias %) for uncorrected ALC concentrations were below 2.6 and 6.5% for intra-days, and 4.0 and 9.4% for inter-days, respectively. Precision and accuracy (bias %)for corrected ALC concentrations were below 10.9 and 6.0% for intra-days, and 10.5 and 16.9% for inter-days, respectively. Quantitation limit was $0.1{\;}\mu\textrm{g}/mL$. After oral administration of a 500 mg ALC tablet to 8 healthy volunteers, the principle pharmacokinetic parameters were 4.2 h of the half-life$ (t_{1/2},{\beta})$, the area under the curve $(AUC_{0{\rightarrow}8){\;}of{\;}9.88{\;}\mu\textrm{g}{\cdot}h/mL$, and 3.1 h of the time ($T_{max}$) to reach $C_{max}$. This study first describes the pharmacokinetic study after oral admin-istration of a single dose of ALC in human volunteers.
Background: Epstein-Barr virus associated gastric lymphoepithelioma-like carcinoma (LELC) is characterized by the intensive infiltration of lymphoid cells, the presence of EBV, and the better prognosis over typical adenocarcinoma. Thus, it was assumable that viral latent proteins may be responsible for the recruitment of a certain T cell repertoire to EBV-associated gastric carcinoma. Methods: To examine above possibility, EBV gene expression in gastric carcinoma tissues and usage of TCR among the tumor infiltrating lymphocytes were analyzed. Results: EBV specific DNA and EBERs RNA were detected in 4 out of 30 patients. RT-PCR analysis revealed that all 4 of EBV-positive tumor tissues expressed EBNA1 mRNA and BARTs and LMP2a was detected only one sample out of 4. However, the EBNA2 and LMP-1 transcripts were not detected in these tissues. $CD8^+$ T cells were the predominant population of infiltrating lymphocytes in the EBV-positive gastric carcinoma. According to spectra type analysis of infiltrating T cells, 10 predominant bands were detected by TCR $V{\beta}$ CDR3 specific RT-PCR from 4 EBV-positive tumor tissues. Sequence analysis of these bands revealed oligoclonal expansion of T cells. Conclusion: These findings suggest that clonally expanded T cells in vivo might be a population of cytotoxic T cells reactive to EBV-associated gastric carcinoma.
This study is focusing on the improvement of problems of Ti-6Al-4V alloy. A new Ti based alloy, Ti-15Sn-4Nb, have designed to examine any possibility of improving the mechanical properties and biocompatibility. Specimens of Ti alloys were melted in vacuum arc furnace and homogenized at $100^{\circ}C$ for 24h. All specimens were solution treated at $812^{\circ}C$ and aged at $500^{\circ}C$ for 10h. The corrosion resistance of Ti alloys was evaluated by potentiodynamic polarization test and immersion test inl%Lactic acid solutions. Ti-15Sn-4Nb system alloys showed Widmanstatten microstructure after solution treatment which is typical microstructure of ${\alpha}+{\beta}$ type Ti alloys. Analysing the corrosion resistance of Ti alloys, it was concluded that the passive films of Ti-15Sn-4Nb system alloys are more stable than that of Ti-6Al-4V alloys. Also, the corrosion resistance of Ti-15Sn-4Nb system alloys was improved with adding elements, Hf. It was analysed that the passive film of the Ti-15Sn-4Nb alloy which was formed in air atmosphere was consisted of TiO2, SnO and NbO through X-ray photoelectron spectroscopy(XPS) analysis.
Supplementation of serum and estrogen in in vitro maturation(IVM) medium was shown to improve embryo development and quality in several species. This study investigates the effect of ovarian estrus stage on canine oocyte quality and supplementation of medium with canine serum or estrogen on IVM of canine oocytes. As results, in experimental 1, IVM oocytes collected from follicular stage ovaries to MII stages($10.2{\pm}1.5%$) was higher (p<0.05) with 10% canine estrus stage serum than control($1.3{\pm}1.6%$), anoestrus stage serum($4.0{\pm}1.6%$), luteal stage serum($2.7{\pm}1.7%$) and 10% FBS($1.3{\pm}1.6$). In experimental 2, 10% canine estrus stage serum supplementation has highest maturation rate to MII stages($10.0{\pm}1.8%$) and there were significant differences(P<0.05) with another treatment in follicular stages group. In order to investigate the synergic effect of estrous serum and estrogen supplementation, different estrous stage groups of oocytes were cultured with 2 ug/ml estrogen plus various concentrations of different reproductive stage serum and FBS(experimental 3). As results, the rate of maturation to metaphase II(MII) stage was significantly higher(p<0.05) in oocytes from the follicular stage supplemented with estrogen and 10% canine estrus stage serum(11.5%) compared to the other groups(6.0 - 8.8%). The present study was demonstrated that canine serum and the estrus cycle of the bitch affect the meiotic competence of oocytes. Hormonal influences within the follicle may be one of the factors responsible for the greater proportion of maturation of oocyte to MII from bitches at the follicular phase.
Phytocystatins (PhyCYSs) are plant-specific proteinaceous inhibitors that are implicated in protein turnover and stress responses. Here, we characterized a PhyCYS from Arabidopsis thaliana, which was designated AtCYS5. RT-qPCR analysis showed that the expression of AtCYS5 in germinating seeds was induced by heat stress (HS) and exogenous abscisic acid (ABA) treatment. Analysis of the expression of the ${\beta}-glucuronidase$ reporter gene under the control of the AtCYS5 promoter showed that AtCYS5 expression during seed germination was induced by HS and ABA. Constitutive overexpression of AtCYS5 driven by the cauliflower mosaic virus 35S promoter led to enhanced HS tolerance in transgenic Arabidopsis, which was characterized by higher fresh weight and root length compared to wild-type (WT) and knockout (cys5) plants grown under HS conditions. The HS tolerance of AtCYS5-overexpressing transgenic plants was associated with increased insensitivity to exogenous ABA during both seed germination and post-germination compared to WT and cys5. Although no HS elements were identified in the 5'-flanking region of AtCYS5, canonical ABA-responsive elements (ABREs) were detected. AtCYS5 was upregulated in ABAtreated protoplasts transiently co-expressing this gene and genes encoding bZIP ABRE-binding factors (ABFs and AREB3). In the absence of ABA, ABF1 and ABF3 directly bound to the ABREs in the AtCYS5 promoter, which activated the transcription of this gene in the presence of ABA. These results suggest that an ABA-dependent pathway plays a positive role in the HS-responsive expression of AtCYS5 during seed germination and post-germination growth.
Flagellin, a major structural protein of the flagellum found in all motile bacteria, activates the TLR5- or NLRC4 inflammasome-dependent signaling pathway to induce innate immune responses. Flagellin can also serve as a specific antigen for the adaptive immune system and stimulate anti-flagellin antibody responses. Failure to recognize commensal-derived flagellin in TLR5-deficient mice leads to the reduction in anti-flagellin IgA antibodies at steady state and causes microbial dysbiosis and mucosal barrier breach by flagellated bacteria to promote chronic intestinal inflammation. Despite the important role of anti-flagellin antibodies in maintaining the intestinal homeostasis, regulatory mechanisms underlying the flagellin-specific antibody responses are not well understood. In this study, we show that flagellin induces interferon-β (IFN-β) production and subsequently activates type I IFN receptor signaling in a TLR5- and MyD88-dependent manner in vitro and in vivo. Internalization of TLR5 from the plasma membrane to the acidic environment of endolysosomes was required for the production of IFN-β, but not for other pro-inflammatory cytokines. In addition, we found that anti-flagellin IgG2c and IgA responses were severely impaired in interferon-alpha receptor 1 (IFNAR1)-deficient mice, suggesting that IFN-β produced by the flagellin stimulation regulates anti-flagellin antibody class switching. Our findings shed a new light on the regulation of flagellin-mediated immune activation and may help find new strategies to promote the intestinal health and develop mucosal vaccines.
SiC hollow fiber was fabricated by curing, dissolution and sintering of Al-PCS fiber, which was melt spun the polyaluminocarbosilane. Al-PCS fiber was thermally oxidized and dissolved in toluene to remove the unoxidized area, the core of the cured fiber. The wall thickness ($t_{wall}$) of Al-PCS fiber was monotonically increased with an increasing oxidation curing time. The Al-PCS hollow fiber was heat-treated at the temperature between 1200 and $2000^{\circ}C$ to make a SiC hollow fibers having porous structure on the fiber wall. The pore size of the fiber wall was increased with the sintering temperature due to the decomposition of the amorphous $SiC_xO_y$ matrix and the growth of ${\beta}$-SiC in the matrix. At $1400^{\circ}C$, a nano porous wall with a high specific surface area was obtained. However, nano pores grew with the grain growth after the thermal decomposition of the amorphous matrix. This type of SiC hollow fibers are expected to be used as a substrate for a gas separation membrane.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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