딱정벌레목 천공성 해충인 뽕나무 하늘소(Apriona germari)의 효과적인 방제를 위하여, 뽕나무 하늘소 이병충으로 부터 곤충병원 사상균을 분리하고, 위상차 현미경 및 주사전자현미경으로 관찰하였으며, PCR(polymerase chain reaction)을 이용하여 동정하였다. 뽕나무 하늘소 이병충으로 부터 분리된 곤충병원 사상균은 현미경 관찰 결과 Beauveria속의 전형적인 형태적 특성을 나타냈다. 따라서 이들의 용이한 동정을 위하여 PCR primer(5'-ACG GGC GCT C-3')를 이용한 RAPD(random amplification of polymorphic DNA) 방법으로 분석하고, B. bassiana와 B. brongniartii의 PCR 산물을 전기영동한 결과 DNA 표식자로 이용이 가능하였다. 이상의 결과로서 본 실험에서 분리·명명된 SFB-1A는 B. bassianifh, SFB-1A는 B. bassiana로, SFB-3A는 B. brongniartii로 동정되었다.
DNA fragments homologous to chitin synthase gene were amplified from the genomic DNA of Beauveria brongniartii by PCR using degenerate primers. Cloning and sequencing of the PCR-amplified fragments led to the identification of a gene, designated BbCHSl. Comparison of the deduced amino acid sequence of BbCHSl with those of other Euascomycetes revealed that BbCHSl is a gene for class II chitin synthase. The Blastp search of the deduced amino acid sequence of BbCHSl displayed the highest rate of similarity, 95.8%, with CHS2 of Metarhizium unisopliae. Phylogenetic analysis of the amino acid sequences confirmed the taxonomic and evolutionary position of B. brongniartii, which was previously derived by traditional fungal classification based on morphological features.
1차 액체배양액과 2차 pellet 배지로 이루어지는 대량배양체계의 다른 곤충병원성 곰팡이인 Beauveria bassiana, Beauveria brongniartii, Metarhizum anisopliae, Verticillium lecanii 등에 대한 효용성을 조사하기 위하여 단균사 및 분생포자의 성장율을 비교하였다. 그 결과, 액체배양액에서 단균사의 성장율은 접종 후 72시간에 그 수가 최초 접종수에 비해 103-104배까지 증가함을 확인할 수 있었으며, pellet 배지에서 분생자의 수는 접종 후 3주 째에 103배까지 증가됨을 확인할 수 있었다. 본 실험의 결과 진균의 대량배양을 위해 선발된 1차 액체배양액과 2차 pellet 배지는 여러 곤충병원성 진균의 성장에 효율적인 체계임을 확인할 수 있었다.
곤충병원성 선충의 이용 효율을 높이기 위하여 곤충병원성 선충 상호간 또는 선충과 곤충병원성 곰팡이와의 상호관계를 알아보았다. Steinernema glaseri는 기주의 무게에 따라 성충수에서는 차이가 없었으나 침입태 유충수에서는 차이가 있었다. 선충의 접종 농도에 따른 침입 발육된 성충수는 기주당 20마리 이하의 접종에서는 차이를 보였으나 40마리 이상 1,000마리 접종구에서는 차이가 없었고, 증식된 유충수도 기주당 1,000마리 접종구에서 현저히 적은 것을 제외하고는 차이가 없었다. 동일 기주에서의 선충 상호간 관계에서는 steinernematid 선충에 의한 기주 치사율이 heterorhabditid 선충에 의한 것보다 높았다. 즉, 서로 다른 종의 곤충병원성 선충을 동일 기주에 접종하였을 때, S. carpocapsae 포천에 의한 기주 치사율은 $76.2\pm$4.8%였고 Heterorhabditis bacteriophora 함양에 의한 치사율은 $23.8\pm$4.8%였다. 또한 S. carpocapsae 포천에 의한 기주치사율이 각각 $90.5\pm$4.8%와 $80.9\pm$4.8%, H. bacteriophora NC 1에 의한 것은 9.5$\pm$4.8%였다. S. glaseri NC와 H. bacteriophora 함양 및 H. bacteriophora NC 1을 동시 접종하였을 때는 S. glaseri NC에 의한 것이 각각 $61.9\pm$9.65%와 $80.9\pm$4.8%, H. bacteriophora 함양에 의한 것이 $38.1\pm$9.5%, H. bacteriophora NC 1에 의한 것이 $19.1\pm$4.8%였다. 그러나 두 선충의 동시 감염은 관찰되지 않았다. 그리고 S. carpocapsae All과 곤충병원성 곰팡이인 Beauveria brongniartii를 동시 또는 곰팡이를 먼저 처리했을 때는 곰팡이 12시간 전 처리부터 선충과 곰팡이의 동시 감염이 관찰되었고, H. bacteriophora NC 1는 곰팡이 6시간 전 처리부터 동시 감염이 관찰되었다. 선충에 의한 감염과, 곰팡이에 의한 감염, 선충과 곰팡이 동시 감염은 곰팡이 48시간 전 처리부터 관찰되었다. 그러나 유충 증식수는 선충 단독 감염보다 동시 감염충에서 현저히 떨어졌다.
Thecodiplosis japonensis is an important insect pest in pine trees and hard to be controlled by chemical pesticides due to its characteristic life cycle. Experiments were conducted to determine the pathogenicity and growth temperature of several entomopathogenic fungi as potential microbial insectcides for T. japonensis. Beauveria bassiana SFB-SC and Paecilomyces fumosoroseus SFP-198 were highly pathogenic against T. japonensis. B. bassiana SFB-SC had also pathogenicity against a beneficial insect Bombyx mori. Growth rate and pathogenicity of P. funmosoroseus SFP-198 under 15$^{\circ}C$ was higher than those of B. bassians SFB-SC. These results indicated that P. fumosoroseus SFP-198 is a potential microbial control candidate for control of T. japonensis.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제8권1호
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pp.77-80
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2004
For the development of the alternative control system against the major forest pests, Beauveria spp. F-101, isolated from a dead larva of Thecodiplosis japonensis, was selected because this isolate showed high pathogenicities against T. japonensis and Acantholyda parki. Beauveria spp. F-101 had irregular clustered conidio-phores and conidia borne on a distinctive apical zigzag extension, and it showed typical characteristic of the genus, Beauveria in morphology. For molecular based-identification, the ribosomal ITS region of Beauveria spp. F-101 was amplified with ITS1 and ITS4 primers, and cloned into pGEM- T Easy vector. The amplified PCR product was 569 bp in size and completely sequenced. The similarities of the cloned ITS sequence were 99 % and 97% to those of B. bassiana and B. brongniartii, respectively. In comparison to other species among the genus Beauveria, the ITS region of Beauveria spp. F-101 showed a similarity of 95% to B. amorpha, 95% to B. tenella, 89% to B. vermiconia and 69% to B. alba, respectively. In addition, in comparison to different genus, it had 95% similarities to Cordyceps militaris and 91% to Paecilomyces tenuipes. Accordingly, the current result suggests that Beauveria spp. F-101 was a variant of B. bassiana and it seems to be a new isolate considering sequence variation in ITS region.
현재까지 곤충기생균 고유배지가 개발되어 있지 않아 식물기생균 배지를 대체 이용해 옴에 따라, 본 시험에서는 고단백질원으로써 이용가치가 있는 누에분말을 이용하여 곤충기생균 최적배지를 개발코자 하였다. 그 결과 사면배지상에서 균 배양시 12종의 배양형태는 현상, 융기, 주변형태가 균종 및 배지에 따라 배양 상이 동일 혹은 다양하게 형성되었다. 균주별 생장율은 12균주 중 C. militaris를 제외한 11 균주가 SLA배지에서 PDA에 비해 대부분의 균생장이 양호하였으나 C. militaris는 기존배지와 비교해 생장률이 78.6%로 감소하였다. Dextrose 첨가시 최적 농도는 C. gracilioides등 6균주에서 6% 처리시 가장 높은 생장률을 나타내었다. 본 시험결과 선발된 배지로부터 배양균을 누에접종 후 재배 시험한 결과 감염율, 자실체 형성을, 분생자경수 및 분생자경의 길이는 91.3$\pm$1.5%, 88.6$\pm$2.3%, 56.6$\pm$3.2개, 33.4$\pm$2.8mm로 대조에 비해 모두 높게 나타났다. 본 시험에서 개발된 Dextrose를 첨가한 SLA-A배지의 경제성 분석결과 1ι생산시 기존배지가 6,261원이 소요되는 것에 비해 총 2,386원으로 생산이 가능해 본 배지로 대체시 61.9%의 절감효과를 나타내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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