Kim, Hyun-Jin;Kim, Ji-Hyun;Son, Jeong-Hwa;Seo, Hyo-Jin;Park, So-Jin;Paek, Nam-Soo;Kim, Sung-Koo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.14
no.3
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pp.503-508
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2004
The antimicrobial substance produced by Lactobacillus bulgaricus was inactivated by protease. It showed inhibitory activity against Staphylococcus aureus ATCC6538, Streptococcus agalactiae ATCC14364, some Gram-positive and Gram-negative bacteria, and characteristics of a bacteriocin. The optimal temperature and culture time for the production of bacteriocin were $30^{\circ}C$ and 10 h, respectively, in the culture of L. bulgaricus. The bacteriocin production started in the exponential phase and reached a maximum at the early stationary phase. Using Staph. aureus ATCC6538 and Strep. agalactiae ATCC14364, known as common bovine mastitis pathogens, as indicator strains for determination of the bacteriocin activity, the antimicrobial activity of the bacteriocin was found to be stable in acidic and neutral pH's (2- 7) even at lOOT, whereas it was lost at high pH (10- 11) and $100^{\circ}C$. The mode of action for the antimicrobial activity was bacteriocidal, and the molecular weight determined by SDS-PAGE and overlay method was 14 kDa.
The present study was to investigate anti-microbial effects of curcumin on major bacterial pathogens for farmed fish, such as Aeromonas hydrophila, A. salmonicida subsp. masoucida, A. salmonicida subsp. salmonicida, Edwardsiella tarda, Vibrio vulnificus, V. paraheamolyticus using disk diffusion, minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) tests. In disc diffusion test, curcumin exhibited concentration-dependent antimicrobial activities to all bacteria pathogens used in the study. Antimicrobial effects of curcumin was found differently depending on bacterial species when determined by MIC or MBC tests. For examples, E. tarda and A. hydrophila was respectively the most sensitive bacterium for bacteriostatic and bacteriocidal effect of curcumin. Collectively, curcumin could be a potential natural drug for controlling pathogenic bacteria in the aquaculture industry.
In order to know the defense mechanism of fish, bactericidal activity was examined into the sera of carp Cyprinus carpio, tilapia Oreochromis niloticus and flounder Paralichthys olivaseus. Each examined normal serum of fishes showed the bactericidal activity against avirulent Escherichia coli but it wasn't appeared against virulent Edwardsiella tarda. When the normal serum of each fish was treated with zymosan, it lost the bactericidal activity completely. After addition of EGTA into the normal serum of each fish, the sera of tilapia and flounder still exhibited the bactericidal activity but the serum of carp lost it. In the presence of specific antibody and complement, bactericidal activity of each antiserum was exhibited high level with in one hour incubation. On the other hand, heat inactivated antiserum showed bacteriostatic reaction. From the above results, although the activity of alternative or classical pathway of each fish complement is different, it is an important function in fish defense mechanism.
Bacillus subtilis 168 secreted antimicrobial substance(s) into culture medium and culture supernatant inhibited growth of some Gram positive bacteria. B. cereus and Listeria monocytogenes were the most sensitive organisms. The antimicrobial activity was destroyed when culture supernatant was treated by protease and proteinase K, indicating the proteinous nature of the substance (bacteriocin). The molecular weight of the bacteriocin was estimated to be 5 kDa by Tricine SDS-PAGE. B. cereus ATCC 14579 cells were killed when exposed to the bacteriocin, indicating that the mode of inhibition was bacteriocidal. These results show that B. subtilis 168 could be useful as a starter for fermented foods such as cheonggukjang where B. cereus contamination is a major concern.
Bovine mastitis is an important disease causing serious economic loss in dairy production and food poison in public health. The major causative agents of bovine mastitis include Escherichia coli (E. coli), Streptococcus agalactiae (S. agalactiae), Staphylococcus aureus (S. aureus). These bacteria were found in milk and environmental condition such as feces, water, soil and so on. Recently, many cases of mastitis are derived from environmental contamination of micro-organisms, which important factors for the spread of this disease in farm. Ultraviolet irradiation (UV) has been used as disinfection for waste and water in clinical and industrial facilities. Moreover the UV irradiation has been used as useful bactericidal agents to remove bacterial biofilms in environmental condition. In this study, we determined the bacterial replication in different percentage of water content (PWC) in sterilized saw dust and feces complexes from farm, and results showed that slightly decreased growth pattern of E. coli and S. agalactiae but increased growth pattern of S. aureus in various PWC (200, 400 and 600%) until 144 h incubation. In the bacteriocidal effect of UV irradiation to bacteria in saw dust and feces complex, the results showed that bacteriocidal effect was depended on the UV irradiation time, irradiation distance and PWC. Especially the antibacterial activity of UV irratiation is stronger in low PWC (50%), long time irradiation (50 sec), and short distance (5 cm) than other condition of this study. Furthermore UV irradiation with stirring showed increased the bactericidal effect compared without stirring. These results suggested that bovine mastitis causing agents may survive long time in environmental condition especially saw dust and feces complexes in farm and can cause a various disease including mastitis. Moreover, these data can be used as basis for application and development of UV disinfection to control of bovine mastitis from environmental contaminated bacteria in dairy farm.
Kim Hee Seok;Bae Heung Mo;Kim Shin Moo;Lee Hyun Ok;Kim Ki young
Journal of Physiology & Pathology in Korean Medicine
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v.16
no.6
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pp.1184-1189
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2002
Allii sativi Bulbus(garlic) have been shown to possess medicinal value, in particular, antimicrobial activity. In this study, we compared the efficacy on some pathogenic bacteria and fungus among several different extracts(water, hexane, ethyl acetate, methanol, chloroform) of Allii sativi Bulbus. Animal pathogenic bacteria and fungus(S. gallinarium: KCTC 2441, S. flexneri: KCTC 2361, E. cloacae: KCTC 2006, K. pneumonia: KCTC 2208, C. albicans: KCTC 1940) were used to test by measurement of minimum inhibitory concentrations(MIC) and disc diffusion. Allii sativi Bulbus were cut and mixed with water at 37℃ about 24 h and filtered, and several different solvents(hexane, chloroform, ethyl acetate, methanol) were respectively added to separate the fraction of each solvent. The antimicrobial(bacteriocidal) and antifungal effect were apparently shown from water extract, hexane and ethyl acetate extract against using strains(Staphylococcus gallinarium, Shigella flexneri, Enterobacter doacae, Klebsiella pneumonia, Candida albicans). Especially, the water extract showed the superior efficacy. And the clear zone size of water extract (11~27 mm) was greater than that of gentamycin, hexane extract and ethyl acetate extract against S. gallinarium. S. flexneri, K. pneumonia and C. albicans. Minimum inhibitory concentrations(MIC) of water extract appeared to around 2.0~7.5 ㎎/㎖ against S. gallinarium, S. flexneri, E. cloacae and K. pneumonia. The greater activity was shown by water extract because the MIC of water extract for C. albicans observed in very low concentration(<1.0 ㎎/㎖) compared to hexane(5.0 ㎎/㎖) and ethyl acetate(10.0 ㎎/㎖). Therefore, these results exhibited that water extract of Allii sativi Bulbus have stronger antimicrobial activity than hexane and ethyl acetate extract, and may be useful as topical medicine of superficial infections causing C. albicans as well as antifungal agents.
We isolated microorganism secreting antimicrobial substance from tomato and identified as Enterococcus faecium. This substance was completely inactivated by pretense treatment and retained activity after catalase treatment. This result indicated that the antimicrobial activity of this substance was due to proteinaceous substance known as bacteriocin. The bacteriocin inhibited growth of Gram positive bacteria, such as Listeria monocytogenes, Leuconostoc mesenteroides, Lactobacillus plantarum, Streptococcus agalactiae, Streptococcus pyrogenes, and Gram negative bacteria, such as Pseudomonas aeruginosa. Purification of the bacteriocin was achieved by ethanol precipitation, ion exchange chromatography on CM Sepharose CL-6B, and gel filtration on Sephacryl S-100 HR. After these purification steps, the specific activity of the bacteriocin was increased 35.8 fold compared with culture broth. Purified bacteriocin was shown single band on SDS-PAGE and molecular weight was estimated 51 kDa. The residual activity of this bacteriocin was 3.3% at 10$0^{\circ}C$ for 60 min, and this bacteriocin was stable at pH 2~7.
The purpose of this study was to investigate the effects of aflatoxin $B_1$ ($AFB_1$) on the ultracellular morphology alteration, apoptosis induction and reactive nitrogen and oxygen intermediates production of peritoneal macrophages (DPM) from mule ducks. The ducklings were purchased from a commercial hatchery, and were fed a corn-soybean based diet. As the ducklings were grown up to 3 wk of age, the Sephadex-elicited peritoneal exudative cells (PEC) were used as the source for duck peritoneal macrophages. The ultracellular morphology study showed that significant number of cells shifted from category I (normal cell with ruffled membrane) and II (cell membrane blebbing) to category III (cell membrane blebbing and even rupture) after DPM were incubated with $AFB_1$ ($20{\mu}g/ml$) for 12 to 48 h. When DPM were exposed to $AFB_1$ in vitro, the production of NO, $H_2O_2$ and $O_2{^-}$ in macrophages was reduced after 12-48 h incubation with previous LPS stimulation. There was a DNA laddering pattern observed in DPM incubated with $AFB_1$ 5, 10, 20, 50 or $100{\mu}g/ml$ for 12 h. Evidence also revealed that the percentage of apoptotic cells was increased along with the elevation of $AFB_1$ concentration. The results suggest that $AFB_1$ exposure causes duck macrophages going on apoptotic pathway through evidence of ultracellular morphology alteration and DNA laddering in agarose electrophoresis. The production of reactive nitrogen and oxygen intermediates of duck macrophages also depressed after $AFB_1$ exposure, and this implied that $AFB_1$ could cause deteriorated functions of bacteriocidal and tumoricidal activity in duck macrophages.
A novel bioactive molecule produced by Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki Bn1 (Bt-Bn1), isolated from a common pest of hazelnut, Balaninus nucum L. (Coleoptera: Curculionidae), was determined, purified, and characterized in this study. The Bt-Bn1 strain was investigated for antibacterial activity with an agar spot assay and well diffusion assay against B. cereus, B. weinhenstephenensis, L. monocytogenes, P. savastanoi, P. syringae, P. lemoignei, and many other B. thuringiensis strains. The production of bioactive molecule was determined at the early logarithmic phase in the growth cycle of strain Bt-Bn1 and its production continued until the beginning of the stationary phase. The mode of action of this molecule displayed bacteriocidal or bacteriolytic effect depending on the concentration. The bioactive molecule was purified 78-fold from the bacteria supernatant with ammonium sulfate precipitation, dialysis, ultrafiltration, gel filtration chromatography, and HPLC, respectively. The molecular mass of this molecule was estimated via SDS-PAGE and confirmed by the ESI-TOFMS as 3,139 Da. The bioactive molecule was also determined to be a heat-stable, pH-stable (range 6-8), and proteinase K sensitive antibacterial peptide, similar to bacteriocins. Based on all characteristics determined in this study, the purified bacteriocin was named as thuricin Bn1 because of the similarities to the previously identified thuricin-like bacteriocin produced by the various B. thuringiensis strains. Plasmid elution studies showed that gene responsible for the production of thuricin Bn1 is located on the chromosome of Bt-Bn1. Therefore, it is a novel bacteriocin and the first recorded one produced by an insect originated bacterium. It has potential usage for the control of many different pathogenic and spoilage bacteria in the food industry, agriculture, and various other areas.
The in vitro and in vivo antibacterial activities of a new fluoroquinolone, DWP20364(1-cyclopropyl-5-amino-6,8-difluoro-7-(2,7-diazabicyclo[3.3.0]oto-4-ene-7-yl)-1 ,4-di-hydro-4-oxoquinoline-3-carboxylic acid) were evaluated in comparison with those of ciprofloxacin(CPFX), sparfloxacin(SPFX) and ofloxacin(OFLX). DWP20364 was more potent than CPFX and OFLX against Staphylococcus spp., Streptococcus spp. and Enterococcus faecium MD8b and it was similarly or slightly less active than CPFX against Escherichia spp. and Pseudomonas spp.. For MRSA and OFLX resistant strains (Staphylococcus spp.(14),Enterococcus spp.(4), Acinetobacter spp.(2), Pseudomonas spp.(9), Klebsiella spp.(2) and Serratia spp.(6)),DWP20364(MICs for 90% of strains,0.025 and 12.5${\mu}$g/ml, respectively) was 4 to 32 folds more potent than SPFX and CPFX. The activity of DWP20364 decreased moderately in the presence of 5mM $Mg^{2+}$. However, various pHs and the concentrations of various serum had no effect on the activity of DWP20364. DWP20364 possessed a bacteriocidal effect at the 1MIC against gram positive and gram negative strains. The protective effect of DWP20364 against systemic infections in mice caused by S. aureus Smith or S. aureus L2379 was superior to that of CPFX and SPFX but it was less active than that of CPFX against infection by P. aeruginosa E-2.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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