For the environmental friendly management of diamondback moth, Plutella xylostella (L.), Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki ($30{\times}10^8\;cfu/mg$) and neem oil (0.5% azadirachtin) were used as green control agencies with mixed and alternative treatments on the chinese cabbage. When Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki was applied to 1st and 2nd larva of P. xylostella with recommended concentration, their mortalities were reached to 100% by 2 days after treatment. In case of azadirachtin, its effect of mortality was continued for 7 days, and reached to 100% mortality. $LC_{50}$ values of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki and azadirachtin against 1st, 2nd, 3rd and 4th larva of P. xylostella were $2.8{\times}10^4$, $3.1{\times}10^4$, $3.4{\times}10^4$ and $1.5{\times}10^5\;cfu/ml$, and 2.7, 3.9, 4.7 and 7.1 ppm, respectively. The number of laid eggs of P. xylostella was reduced to 57.5 at 25 ppm of azadirachtin compared with control treatment. The hatch ratio was not significantly different with Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki treatment in comparison with control treatment. However, when azadirachtin was applied, their hatch ratio were reduced to 25.8 and 45.4% at 25 and 50 ppm, respectively. On the other hand, emergence rate of eggs was not different with Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki treatment, but 45.4% was shown in azadirachtin treatment with 50 ppm in comparison with control. When the mixture with Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki and azadirachtin was applied to adults of P. xylostella, their mortality was higher than Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki treatment only. These results are supposed that the mixture of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki and azadirachtin might be used as green control agents for reducing the demage of diamondback moth in the Chinse cabbage.
The production of delta-endotoxin crystal and the cloning of endotoxin protein gene in Bscillus thuringiensis subsp. kurstaki HD1 strain were studied. The strain produced bipyramidal crystals ($2.9\times 1.0 \mu m$) in their cells during sporulation. The B. thuringiensis contained about 10 plasmid DNA elements ranging from 2.1 to 80 kilobases. The 73 kb plasmid DNA, the 29 kb BamHI fragment and the 7.9 kb Pstl DNA fragment hybridized to the pHL probe. The 7.9 kb fragment was eluted and cloned in the PstI site of pBR322 vector and transformed into E. coli HB101, which produced insecticidal proteins killing Bornbyx mori larvae.
The lethality to Pieris raepi larvae and the safety tests to mice of the endotoxin crystals and the pesticide of B thuringiensis serovar kurstaki were carried out. The LD50 of the endotoxin (3.9$\times$10$^9$ spores/$m{\ell}$) appeared to be 1$\mu$g and that of the pesticide (2.6$\times$10$^9$ spores/$m{\ell}$) was about 9 $\mu$g. When the endotoxin solution and the pesticide were injected to the mice's intraperitoneal cavities, 10 to 20% of the mite were dead. Also in the case of intracerebral injection 20% of the mice were dead at the doses of 7.8$\times$10$^3$ spores and 100% of the mice were dead at the concentration of 7.8$\times$10$^8$ spores. but the mice in the oral, subcutaneous and inhalation treatment groups were safe and healthy. When the pesticide applied to the cabbage field for raepi larvae, 52 to 65% of the larvae in the field were killed in 4 days postapplication.
Choi, Jae Young;Roh, Jong Yul;Li, Ming Shun;Shim, Hee Jin;Kang, Joong Nam;Woo, Soo Dong;Jin, Byung Rae;Je, Yeon Ho
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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v.9
no.2
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pp.183-186
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2004
Recently, we have developed an easy, simple and convenient circular DNA cloning system named plasmid capture system (PCS). To investigate usefulness of PCS in cloning of plasmids from Bacillus thuringiensis strains, PCS donors, pPCS-S and pPCS-L were applied to clone plasmids of B. thuringiensis subsp. israelensis by in vitro transposition using 4{TnsABC^*}$ transposase. In result, 3 small plasmids were cloned, and these were consistent with pTX14-1, pTX14-2 and pTX14-3 reported previously from B. thuringiensis subsp. israelensis. Therefore, the PCS can be successfully applied to clone small plasmids from B. thuringiensis strains.
Kim, Jung-Beom;Choi, Ok-Kyung;Kwon, Sun-Mok;Cho, Seung-Hak;Park, Byung-Jae;Jin, Na Young;Yu, Yong Man;Oh, Deog-Hwan
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.27
no.8
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pp.1449-1456
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2017
The prevalence and toxin characteristics of Bacillus thuringiensis isolated from 39 organic vegetables were investigated. B. thuringiensis was detected in 30 out of the 39 organic vegetables (76.9%) with a mean value of 2.60 log CFU/g. Twenty-five out of the 30 B. thuringiensis isolates (83.3%) showed insecticidal toxicity against Spodoptera exigua. The hblCDA, nheABC, and entFM genes were found to be the major toxin genes, but the ces gene was not detected in any of the tested B. thuringiensis isolates. The hemolysin BL enterotoxin was detected in all 30 B. thuringiensis isolates (100%). The non-hemolytic enterotoxin complex was found in 27 out of 30 B. thuringiensis isolates (90.0%). The B. thuringiensis tested in this study had similar toxin gene characteristics to B. cereus, which possessed more than one toxin gene. B. thuringiensis could have the potential risk of foodborne illness based on the toxin genes and toxin-producing ability.
Immunological analysis between endotoxin proteins produced by Bacillus thuringiensis serovar. kurstaki HD1 and HD73 have been investigated by using polyclonal antibodies. The antisera against the endotoxin proteins were prepared from rabbits injected with the endotoxin protein antigens. When about 2mg/$m\ell$ of the antigens were injected for 7 times, the titers were highest. The stability of the antigens was reduced to about 50% after 9 days incubation at 4$^{\circ}C$. The sensitibity of endotoxin protein from B. thuringiensis HD1 and HD73 by indirect ELISA was 50ng/$m\ell$ and 400ng/$m\ell$, respectively. The cross reaction of antiserum appeared that anti-HD1 partialy reacted with crystal protein but anti-HD73 reacted with HD1 endotoxin about 100%.
The compositions of the four madia and their pHs for delta endotoxin production by B. thuringiensis serovar kurstaki 3a3b were examined. In the M-4 media out of the 4 media at pH8, the production of the endotoxin and spore formation were maximal. The mean generation times of the bacterium were 53.4 minutes in the M-1 media, 98 in the M-2, 132 in the M-3, and 127.5 in the M-4. The proper pHs of the media for the endotoxin production appeared to be pH 7 to 8. In the M-4 media, the lag time lasted about 5 hours.
Fourteen Bacillus thuringiensis isolates having both insecticidal activity and in vitro antifungal activity were selected and tested for in vivo antifungal activity against tomato late blight, wheat leaf rust, tomato gray mold, and barley powdery mildew in growth chambers. All the isolates represented more than 70% disease control efficacy against at least one of four plant diseases. Specifically, 12 isolates exhibited strong control activity against barley powdery mildew. Under glasshouse conditions, four (50-02, 52-08, 52-16, and 52-18) of the isolates also displayed potent control efficacy against cucumber powdery mildew. To our knowledge, this is the first report of B. thuringiensis isolates that have disease control efficacy against powdery mildew of barley and cucumber as well as insecticidal activity.
Surface changes of tissues caused by B. thuringiensis var. kurstaki-$\delta$-endotoxin intoxication of Helicoverpa assulta were observed by scanning electron microscopy. Bt-endotoxin crystals induced the erosion and disruption on the surface of all tissues tested. The results revealed that the toxin binds to all exposed plasma membranes without apparent specificity for particular membrane domains.
Crystals of six new Bacillus thuringiensis serovarieties [coreanensis (H25), konkukian (H34), leesis (H33), seoulensis (H35), sooncheon (H41), and yosoo (HI8a18c)] with different H-antigens, which are toxic to Bombyx mori and/or mosquito larvae, were serologically quite distinct from each other.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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